Resumos apresentados pelos autores durante a Sessão de Posters ...

Influência da seleção por gradiente de percoll e da capacitação espermática sobre a morfometria da cabeça de
espermatozoides bovinos (Influence of the selection by percoll gradient and sperm capacitation on the head
morphometryof bovine spermatozoa)
G.S.L. Sampaio 1 , D.A. Pinto 1 , I.N. Duarte 1 , B.G. Alves 1 , M.N. Gama 1 , M.E. Beletti 2
1 Faculdade de Medicina Veterinária, 2 Instituto de Ciências Biomédicas - Universidade Federal de Uberlândia-UFU,
Uberlândia, Brasil. E-mail: sampaiogsl@hotmail.com
Introdução
O objetivo do presente estudo foi verificar como a seleção de espermatozóides por gradiente de Percoll e a capacitação
espermática “in vitro” atuam na morfometria da cabeça de espermatozóides bovinos.
Material e Métodos
Foram utilizadas oito amostras de sêmen bovino. Antes e após a seleção por gradiente de Percoll (45%e90%) foram feitos
esfregaços de todas as amostras. A seguir, as amostras foram capacitadas em meio de fecundação heparinizado, também
sendo feitos esfregaços após esta etapa. Os esfregaços foram corados com Azul de Toluidina e deles foram obtidas 50
imagens digitais em tons de cinza de cada um, das quais foram segmentadas 100 cabeças. Estas foram processadas por
programas desenvolvidos em ambiente Scilab com objetivo de se avaliar a área, perímetro, largura, comprimento, razão
largura:comprimento, elipsidade, fator de forma, simetria lateral, simetria antero-posterior e harmônicas do descritor de
Fourier com amplitudes de zero a dois.
Resultados e Discussão
Foi possível notar que a seleção de espermatozóides por gradiente de Percoll melhora a qualidade do sêmen selecionando
espermatozóides com cabeças maiores que a média do sêmen “in natura”, porém de tamanho mais constante, tornando a
amostra mais homogênea. O Percoll também exclui algumas formas de espermatozóides, diferenciáveis apenas pelas
harmônicas de Fourier 1 e 2. Já na capacitação ocorre um pequeno aumento fisiológico da cabeça dos espermatozóides,
provavelmente devido a abertura de canais de cálcio, criando um influxo deste íon, carreando moléculas de água para o
interior do espermatozóides.
Referências bibliográficas
Beletti, M.E.; Costa, L.F. A systematic approach to multi-species sperm morphometrical characterization. Analytical and
Quantitative Cytology and Histology, St Louis, v.25, n.2, p.97-107, 2003.
Palavras-chave: Espermatozóide, gradiente de percoll, capacitação, morfometria.
Keywords: Spermatozoon, percoll gradient, capacitation, morphometry.
Agradecimento: Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais – FAPEMIG.
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Effect of extender and equilibration time on integrity of plasma and acrosomal membranes and mitochondrial
function of cryopreserved semen from dairy Gyr bulls evaluated by flow cytometry (Efeito do diluidor e do tempo de
equilíbrio na integridade das membranas plasmática e acrossomal e função mitocondrial em sêmen criopreservado de
touros Gir leiteiro avaliado por citometria de fluxo)
T.G. Leite 1 , R.P. Arruda 2 , A.F.C. Andrade 2 , V.R. Vale Filho 1 , F.G. Zaffalon 2 , L.L. Emerick 1 ,
J.A.M. Martins 1 , P.E.M. Gonçalves 1 , M.B.D. Ferreira 3 , V.J. Andrade 1
1 EV-UFMG, Brazil; 2 FMVZ, USP, Brazil; 3 EPAMIG-Uberaba, Brazil. E-mail: vejoan@gmail.com
Introduction
There are still doubts concerning the effect of equilibration time on integrity of sperm membranes during cryopreservation
(Gao et al, 1997). The aim of this study was to evaluate the effect of equilibration time and extender on post-thaw
integrity of plasma and acrosomal membranes, and mitochondrial function, of cryopreserved bovine semen evaluated by
flow cytometry.
Material and Methods
Semen samples of 12 andrologically normal adult dairy Gyr bulls were collected by eletroejaculation, evaluated according
to CBRA (1998). Samples were divided in two aliquots and each of them diluted with different extender (Bioxcell® or
TRIS) at 34ºC, to a concentration of 50 x 10 6 sperms/mL; thereafter cooled to ambient temperature (25ºC), packaged in
0.50-mL straws and transferred to automatized freezing machines (model TK-3000®). The same cooling (0,25°C/min.)
and freezing (20°C/min) rates were used for all six treatments (two extenders (BIO and TRIS), and three equilibration
times at 5ºC: 0h (T0), 2h (T2), and 4h (T4). Later, the semen samples were thawed (37ºC/30s) and integrity of plasma and
acrosomal membranes, evaluated by association of FITC-PSA and PI fluorescents probes; mitochondrial function
(measured by mitochondrial high potential) was evaluated by JC-1, using flow cytometry.
Results and Discussion
Interactions among equilibration times and extenders were registered. The treatments with no equilibration time showed
the lowest results (P 0.05) between T2 and
T4, for Bioxcell (BIOT2 = 15.20±8.15; BIOT4 = 18.27±6.24). For TRIS there were differences (P