Atividade enzimática extracelular de leveduras isoladas da ...

Onde lê-se:
A unidade de atividade da pectina metilesterase foi obtida através da seguinte fórmula:
UA é o número de unidades de enzima no volume testado (1 mL) expresso em
µ moles de ácido graxo/tempo de reação,
B é branco do teste,
X é a média dos testes expressa pelo valor da absorbância definido no
espectrofotômetro.
4.9 ATIVIDADE DE PROTEASES EXTRACELULARES PRODUZIDAS EM
FERMENTAÇÃO SUBMERSA
Para a determinação da atividade de protease em fermentação submersa foi utilizado o
meio reacional composto de uma solução de caseína a 2%. Para a reação foram adicionados
1,5 mL de solução de caseína em 1 mL de tampão fosfato pH 7. Todos os tubos de ensaio
foram incubados a 40°C por 15 minutos em banho-maria. Em seguida, a cada tubo de ensaio
foi adicionado 0,5 mL de solução enzimática e após 30 minutos de incubação, foi adicionado
3 mL de uma solução de ácido tricloroacético (TCA) a 0,4 M para interromper a reação
enzimática. Então, o extrato enzimático foi centrifugado durante 15 minutos a 10.000 rpm e o
sobrenadante transferido para outros frascos estéreis e armazenado em freezer a -1°C até a
leitura em espectrofotômetro sob luz UV a 280 nm, não ultrapassando o período de 7 dias.
Os testes foram realizados em duplicata para cada microrganismo. O branco foi
preparado com adição de água ao invés do extrato enzimático. A leitura foi obtida a 280 nm,
sob luz UV no qual a cada aumento de 0, 001 na absorbância por minuto de reação
correspondeu a uma unidade da enzima.
UA = [(B - X)]X1000/0,1
42