Comparação Entre a Contagem de Plaquetas pelos ... - NewsLab

Artigo
Comparação Entre a Contagem
de Plaquetas pelos Métodos Manual
e Automatizado
Luiz Arthur Calheiros Leite 1 , Nilson Marques Silva Junior 2 , Mayara Soares Miranda 2
1 - Professor da Disciplina de Hematologia do CESMAC. Mestre em Ciências, Disciplina de Hemtologia - UNIFESP
2 - Alunos de habilitação em Bioquímica – CESMAC FEJAL
Resumo
A contagem de plaquetas é extremamente importante
para avaliar amostras de pacientes com plaquetopenia
ou plaquetose. Os laboratórios utilizam os métodos automatizados
e manuais, estando este último em desuso
devido a argumentos relativos à sua baixa precisão e
exatidão. Este trabalho se propõe a comparar resultados
de exames realizados pelo método de Fonio com o método
automatizado. Foi realizado um estudo prospectivo
e comparados os resultados encontrados quando do
emprego de contagens de plaquetas de forma manual e
automatizada, a partir de lâminas de hematologia de um
laboratório de rotina. Dentre as 99 amostras avaliadas
pelo método manual de Fonio, 92 foram confirmadas
pelo método automatizado, seis apresentaram plaquetopenia
pela automação, seis apresentaram plaquetopenia
pelo método manual e uma apresentou plaquetose pela
automação. A análise dos dados nos conduz a afirmar
que as discordâncias de alguns resultados não são
significativas para garantir que os resultados obtidos
pelo método automatizado não confirmam os resultados
encontrados quando se utiliza o método indireto.
Palavras-chave: Contagem de plaquetas, método
de Fonio, automação
Summary
Comparison between Counting of Platelet
using Manual and Automatized Methods
The counting of platelets is extremely important to
evaluate patients with plaquetopenia or plaquetose.
The laboratories used to automatized, or direct indirect
method, being this last one more in disuse due its low
precision and exactness. A bibliographical survey
and comparison with the counting of platelets was
made, from blades of hematology of an archive of
blades, analyzing the values gotten for the automation.
Amongst the 99 samples evaluated for the automatized
accountant, 93 had been confirmed by the manual
method of Fonio, 2 had presented plaquetopenia for
the automation, 2 had presented plaquetopenia for
the manual method and 3 had presented plaquetose
for the automation. This work considered to compare
the indirect method (Fonio) with the automatized
method. The values gotten had demonstrated that the
indirect method does not confirm all the results with
the automatized method, but show great correlation
when the number of platelets is normal.
Keywords: Counting of platelets, method of Fonio,
automation
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Introdução
A
s plaquetas são produzidas
na medula óssea por
fragmentação do citoplasma dos
megacariócitos. Em um estágio
variável do desenvolvimento, o
citoplasma torna-se granuloso e
as plaquetas são liberadas (HOFF-
BRAND, 2004).
A maioria tem diâmetro de 1,3
a 3,5 µm, mas pode ser maior em
certas doenças. Elas não contêm
núcleo e são cercadas por uma
membrana de duas camadas lipídicas
(LEWIS, 2006).
A principal função das plaquetas
é a formação de um tampão mecânico
durante a resposta hemostática
normal à lesão vascular. Na
ausência de plaquetas pode ocorrer
vazamento espontâneo de sangue
pelos pequenos e grandes vasos
(HOFFBRAND, 2004).
A contagem de plaquetas é necessária
para se determinar alguma
alteração plaquetária (quantitativas
e qualitativas anisocitose plaquetária).
Existem métodos manuais
em que se utiliza a comparação de
plaquetas com o número de eritrócitos
por campo (método de Fonio)
e os métodos automatizados. Esses
métodos não apresentam valores
exatos e sim uma estimativa. Por
serem trabalhosos estão ficando em
desuso (FAILACE, 2003). A maneira
mais satisfatória de contar plaquetas
com a técnica exigida pela prática
hematológica atual é através de
contadores automatizados, os quais
Tabela 1. Principais causas de plaquetopenias e plaquetoses
Plaquetopenias
Plaquetoses
Leucemias Agudas
Policitemia Vera
Anemia Aplásica
Leucemia Mielóide Crônica
Esplenomegalia
Período pós-hemorrágico
Grandes hemorragias
Após esplenectomia
Viroses em geral
Doenças infecciosas crônicas
AIDS
Trombocitemia essencial
Púrpuras imunológicas
Quimioterapia e radioterapia antiblástica
Fonte: Renato Failace, Hemograma – Manual de Interpretação, 2003.
procedem à contagem de plaquetas
por tecnologia de impedância, de
dispersão de luz, ou com ambas
(BAIN, 2004). Todas as amostras
de sangue com baixa contagem
de plaquetas devem ter as lâminas
examinadas ao microscópio para
excluir agregação plaquetária e
satelitismo (FAILACE, 2003).
Quando se constata uma diminuição
na quantidade de plaquetas
diz-se que ocorre uma plaquetopenia
ou trombocitopenia e no caso de
aumento do quantitativo de plaquetas
diz-se que ocorre plaquetose ou
trombocitose. Segundo FAILACE,
2003, as principais causas de plaquetopenias
e plaquetoses são as
constantes da Tabela 1.
Preferencialmente, as contagens
de plaquetas automatizadas
são feitas em sangue venoso anticoagulado
com EDTA, obtido por
uma venopunção limpa. Contagens
com sangue obtido por picada
digital tendem a ser mais baixas.
Já as contagens de plaquetas por
método manual (Fonio) devem
ser realizadas através de lâminas
sem EDTA (BAIN, 2004). Diversas
fontes de erros influenciam em um
plaquetograma, como: formação de
coágulos no sangue, agregação plaquetária
em raros casos de sangue
colhidos com EDTA.
O presente estudo tem por
objetivo analisar e comparar verificando
a existência de correlação
entre os dois métodos, para que
com exatidão seja possível liberar
um plaquetograma de qualidade e
confiabilidade.
Material e Método
Foram coletadas 99 amostras
para realização de hemogramas
através da punção venosa com
EDTA para contagens automatizadas
e confeccionadas lâminas sem
EDTA para contagem manual. As
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amostras foram selecionadas aleatoriamente
e não houve critérios
para escolha das amostras.
As amostras de sangue venoso
coletado com EDTA foram processadas
em um contador Coulter JT.
As lâminas coradas (Corante Panótico)
sem EDTA foram observadas
ao microscópio Nikon Eclipse e, em
seguida, comparadas com o resultado
da automação.
A avaliação iniciou-se analisando
a distribuição dos eritrócitos, focalizando
campos onde os mesmos
tocavam-se sem se sobreporem.
Em seguida foi observada a distribuição
das plaquetas e contadas
pelo método de Fonio 1 , onde as plaquetas
foram contadas em campos
de aproximadamente 200 hemácias
cada e o cálculo estimado de plaquetas
foi realizado em relação ao
número de eritrócitos por microlitro
(CARVALHO, 2002).
O cálculo (ao lado e acima) é realizado
contando-se mil hemácias e
ao mesmo tempo as plaquetas, anotando
o valor. A contagem é feita em
vários campos sucessivos seguindo
linhas longitudinais em relação à
lâmina (CARVALHO, 2002).
Por ter uma média de 200 hemácias
por campo, utilizou-se a
contagem de cinco campos com distribuição
uniforme de plaquetas.
Análise Estatística
A análise estatística foi procedida
através da comparação das médias
de duas diferentes populações;
Cálculo: Plaquetas por μl de sangue =
, sendo
P a quantidade plaquetas e Hm a de hemácias.
uma compreendendo os resultados restantes apresentaram valores
encontrados pelo método manual e maiores. Houve concordância, no
a outra consistindo dos resultados que diz respeito à análise comparativa
com os valores de referência
encontrados pelo método automatizado
utilizando-se para tanto suas com 93% das amostras.
respectivas amostras.
Das 85 amostras com valores
O procedimento foi utilizado normais de plaquetas (150.000 e
para detectar se há diferença 450.000/μl) avaliadas pelo método
entre as médias das populações. automatizado, 83 apresentaram
Para tanto, foram utilizados para concordância com o método manual
comparação das amostras o teste de Fonio.
t e o valor de p, sendo significante
p < 0,05. Como para usar o lisadas houve discordância entre
Em relação às amostras ana-
procedimento da comparação das 11 amostras, apresentando pelo
médias é necessário assumir que método automatizado três plaquetoses
e valores normais pelo
as populações sejam distribuídas
normalmente, o que nem sempre método manual, cinco amostras
ocorre, foi empregada também, apresentaram valores normais pela
para comparação das duas populações,
a técnica conhecida como método manual, três amostras
automação e plaquetopenias pelo
Teste de Postos de Wilcoxon. apresentaram plaquetopenia pela
automação e valores normais pelo
Resultados
Dentre as 99 amostras comparadas,
60 (59%) contadas pelo
método manual apresentaram valores
menores do que a contagem
de plaquetas automatizadas e as
método manual. Houve concordância
em 88 amostras.
Quanto à plaquetopenia, foram
identificadas em 11 amostras pela
automação e nove (81,8%) foram
confirmadas pelo método manual.
A avaliação das plaquetoses
encontrada pelo aparelho (três
Tabela 2. Valores de referências
Hemácias/µL Hemoglobinas g/dL Plaquetas/µL
Homem 4,4 a 5,4x106 13,3 a 16,6 150.000 a 450.000
Mulher 4 a 5 x106 12 a 15,3 150.000 a 450.000
1
Fonte: CARVALHO, William de Freitas. Técnicas Médicas de Hematologia e Imuno-Hematologia, 2002.
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amostras), não foi confirmada,
apresentando valores normais
pelo método manual.
O Gráfico 1 apresenta o diagrama
de dispersão dos resultados
das contagens de plaquetas
das amostras. As duas linhas
paralelas ao eixo das amostras
representam o intervalo fechado
no qual o resultado é considerado
normal. Abaixo da linha inferior
indicam casos de plaquetopenia
e acima da linha superior encontram-se
os casos de plaquetose.
A Tabela 2 apresenta os valores
de referências utilizados na
maioria das referências bibliográficas
para ensaios de hemácias,
hemoglobina e plaquetas.
O fato constatado anteriormente
de que alguns exames
efetuados por ambos os métodos
conduzem a análises clínicas distintas,
não é argumento suficiente
para sustentar que os resultados
não são consistentes.
Os resultados estatísticos da
comparação entre os resultados
constam da Tabela 3.
Usando-se a estatística p, chega-se
a conclusão que o valor de p é
maior do que 0,05 significa que não
existe diferença significante entre
os valores médios das contagens
manual e automatizada.
Discussão
A literatura mostra a eficiência
e sensibilidade dos aparelhos
Gráfico 1. Diagrama de Dispersão do resultado da contagem de plaquetas
Tabela 3. Estatística para comparação entre os resultados dos dois
procedimentos de ensaios*
PLT Automático PLT Manual
Média 254.020,202 245.573,939
Variância 6.507.877.138,73 6.201.104.354,73
Observações 99 99
Variância agrupada 6.354.490.746,73
Hipótese da diferença de média 0
Gl 196
Stat t 0,74546
P(T

automatizados. Em nosso estudo
92 lâminas apresentaram concordância
pela contagem automatizada
e manual não apresentando
variação de plaquetas.
Coelho E. et al, 1981, demonstraram
que as amostras contadas
pelo método manual estão sujeitas
a variáveis, podendo ser devido à
má distribuição de plaquetas nos
campos focalizados.
Segundo Failace R., 2003, as
contagens automatizadas apresentam
um coeficiente de variação
menor que 10% em contagens
entre 40.000 e 500.000/µL, mas
insatisfatória nas contagens mais
baixas. Quando a contagem está
abaixo de 20.000/µL o coeficiente
de variação é de aproximadamente
de 50%.
Ficou evidente que a contagem
de plaqueta manual varia, ficando
a maioria abaixo das contagens
automatizadas. Em relação às plaquetoses,
pelo método manual todas
apresentaram valores normais,
não sendo analisados os agregados
plaquetários devido à dificuldade de
contagem.
Em casos onde as plaquetas que
deram valores abaixo de 130.000/
µL sem indicação que justificasse a
plaquetopenia, recomendamos que
seja colhida amostra sem garrote,
pois pode haver aumento significativo
de plaquetas.
A presente pesquisa mostrou
boa correlação de resultados quanto
à contagem de plaquetas automatizada
e o método Fonio.
Finalmente, os estudos estatísticos
apontam que os resultados
podem ser considerados satisfatórios
por ambos os métodos. Portanto,
os laboratórios que não tenham demandas
para viabilizar a aquisição de
equipamentos automatizados podem
continuar a realizar a contagem de
plaquetas pelo método de Fonio, levando
em conta que seu uso requer
experiência e cuidados especiais.
Conclusão
O presente trabalho mostra que a
contagem automatizada de plaquetas
é de grande eficiência e precisão.
Em laboratórios de pequeno porte
que não têm acesso a esses aparelhos
e sua demanda não os tornam
necessários, a contagem manual
de plaquetas pode ser utilizada sem
prejuízos para o diagnóstico do exame,
porém o método de Fonio deve
ser usado com cautela, pois requer
experiência do microscopista.
Correspondência para:
Luiz Arthur Calheiros Leite
lahemato@hotmail.com
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