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Introdução A s plaquetas são produzidas na medula óssea por fragmentação do citoplasma dos megacariócitos. Em um estágio variável do desenvolvimento, o citoplasma torna-se granuloso e as plaquetas são liberadas (HOFF- BRAND, 2004). A maioria tem diâmetro de 1,3 a 3,5 µm, mas pode ser maior em certas doenças. Elas não contêm núcleo e são cercadas por uma membrana de duas camadas lipídicas (LEWIS, 2006). A principal função das plaquetas é a formação de um tampão mecânico durante a resposta hemostática normal à lesão vascular. Na ausência de plaquetas pode ocorrer vazamento espontâneo de sangue pelos pequenos e grandes vasos (HOFFBRAND, 2004). A contagem de plaquetas é necessária para se determinar alguma alteração plaquetária (quantitativas e qualitativas anisocitose plaquetária). Existem métodos manuais em que se utiliza a comparação de plaquetas com o número de eritrócitos por campo (método de Fonio) e os métodos automatizados. Esses métodos não apresentam valores exatos e sim uma estimativa. Por serem trabalhosos estão ficando em desuso (FAILACE, 2003). A maneira mais satisfatória de contar plaquetas com a técnica exigida pela prática hematológica atual é através de contadores automatizados, os quais Tabela 1. Principais causas de plaquetopenias e plaquetoses Plaquetopenias Plaquetoses Leucemias Agudas Policitemia Vera Anemia Aplásica Leucemia Mielóide Crônica Esplenomegalia Período pós-hemorrágico Grandes hemorragias Após esplenectomia Viroses em geral Doenças infecciosas crônicas AIDS Trombocitemia essencial Púrpuras imunológicas Quimioterapia e radioterapia antiblástica Fonte: Renato Failace, Hemograma – Manual de Interpretação, 2003. procedem à contagem de plaquetas por tecnologia de impedância, de dispersão de luz, ou com ambas (BAIN, 2004). Todas as amostras de sangue com baixa contagem de plaquetas devem ter as lâminas examinadas ao microscópio para excluir agregação plaquetária e satelitismo (FAILACE, 2003). Quando se constata uma diminuição na quantidade de plaquetas diz-se que ocorre uma plaquetopenia ou trombocitopenia e no caso de aumento do quantitativo de plaquetas diz-se que ocorre plaquetose ou trombocitose. Segundo FAILACE, 2003, as principais causas de plaquetopenias e plaquetoses são as constantes da Tabela 1. Preferencialmente, as contagens de plaquetas automatizadas são feitas em sangue venoso anticoagulado com EDTA, obtido por uma venopunção limpa. Contagens com sangue obtido por picada digital tendem a ser mais baixas. Já as contagens de plaquetas por método manual (Fonio) devem ser realizadas através de lâminas sem EDTA (BAIN, 2004). Diversas fontes de erros influenciam em um plaquetograma, como: formação de coágulos no sangue, agregação plaquetária em raros casos de sangue colhidos com EDTA. O presente estudo tem por objetivo analisar e comparar verificando a existência de correlação entre os dois métodos, para que com exatidão seja possível liberar um plaquetograma de qualidade e confiabilidade. Material e Método Foram coletadas 99 amostras para realização de hemogramas através da punção venosa com EDTA para contagens automatizadas e confeccionadas lâminas sem EDTA para contagem manual. As 108 NewsLab - edição 81 - 2007
amostras foram selecionadas aleatoriamente e não houve critérios para escolha das amostras. As amostras de sangue venoso coletado com EDTA foram processadas em um contador Coulter JT. As lâminas coradas (Corante Panótico) sem EDTA foram observadas ao microscópio Nikon Eclipse e, em seguida, comparadas com o resultado da automação. A avaliação iniciou-se analisando a distribuição dos eritrócitos, focalizando campos onde os mesmos tocavam-se sem se sobreporem. Em seguida foi observada a distribuição das plaquetas e contadas pelo método de Fonio 1 , onde as plaquetas foram contadas em campos de aproximadamente 200 hemácias cada e o cálculo estimado de plaquetas foi realizado em relação ao número de eritrócitos por microlitro (CARVALHO, 2002). O cálculo (ao lado e acima) é realizado contando-se mil hemácias e ao mesmo tempo as plaquetas, anotando o valor. A contagem é feita em vários campos sucessivos seguindo linhas longitudinais em relação à lâmina (CARVALHO, 2002). Por ter uma média de 200 hemácias por campo, utilizou-se a contagem de cinco campos com distribuição uniforme de plaquetas. Análise Estatística A análise estatística foi procedida através da comparação das médias de duas diferentes populações; Cálculo: Plaquetas por μl de sangue = , sendo P a quantidade plaquetas e Hm a de hemácias. uma compreendendo os resultados restantes apresentaram valores encontrados pelo método manual e maiores. Houve concordância, no a outra consistindo dos resultados que diz respeito à análise comparativa com os valores de referência encontrados pelo método automatizado utilizando-se para tanto suas com 93% das amostras. respectivas amostras. Das 85 amostras com valores O procedimento foi utilizado normais de plaquetas (150.000 e para detectar se há diferença 450.000/μl) avaliadas pelo método entre as médias das populações. automatizado, 83 apresentaram Para tanto, foram utilizados para concordância com o método manual comparação das amostras o teste de Fonio. t e o valor de p, sendo significante p < 0,05. Como para usar o lisadas houve discordância entre Em relação às amostras ana- procedimento da comparação das 11 amostras, apresentando pelo médias é necessário assumir que método automatizado três plaquetoses e valores normais pelo as populações sejam distribuídas normalmente, o que nem sempre método manual, cinco amostras ocorre, foi empregada também, apresentaram valores normais pela para comparação das duas populações, a técnica conhecida como método manual, três amostras automação e plaquetopenias pelo Teste de Postos de Wilcoxon. apresentaram plaquetopenia pela automação e valores normais pelo Resultados Dentre as 99 amostras comparadas, 60 (59%) contadas pelo método manual apresentaram valores menores do que a contagem de plaquetas automatizadas e as método manual. Houve concordância em 88 amostras. Quanto à plaquetopenia, foram identificadas em 11 amostras pela automação e nove (81,8%) foram confirmadas pelo método manual. A avaliação das plaquetoses encontrada pelo aparelho (três Tabela 2. Valores de referências Hemácias/µL Hemoglobinas g/dL Plaquetas/µL Homem 4,4 a 5,4x106 13,3 a 16,6 150.000 a 450.000 Mulher 4 a 5 x106 12 a 15,3 150.000 a 450.000 1 Fonte: CARVALHO, William de Freitas. Técnicas Médicas de Hematologia e Imuno-Hematologia, 2002. 110 NewsLab - edição 81 - 2007
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