Riscos e benefÃcios do uso dos inibidores seletivos da ... - Febrasgo
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soroalbumina bovina. Para recuperação antigênica, foi<br />
utiliza<strong>da</strong> panela a vapor T-Fal ® conten<strong>do</strong> tampão citrato<br />
de sódio (pH=6) a 90°C por 30 minutos. A seguir, as<br />
lâminas foram incuba<strong>da</strong>s com anticorpo primário específico<br />
“overnight” a 4ºC. Após a incubação, as lâminas<br />
foram incuba<strong>da</strong>s com “Em Vision Polymer Component<br />
(Dako)”, sen<strong>do</strong> colori<strong>da</strong>s com 3-3’diaminobenzidina<br />
(Sigma), um substrato cromógeno. Foram utiliza<strong>do</strong>s<br />
teci<strong>do</strong>s de hemangioma hepático como controle positivo.<br />
Os receptores de estrógenos foram identifica<strong>do</strong>s por<br />
meio <strong>do</strong> anticorpo monoclonal anti-receptor de estrógeno<br />
humano (SP1) (Dako). Os tumores foram considera<strong>do</strong>s<br />
receptor de estrógeno positivos quan<strong>do</strong> 10% ou mais <strong>da</strong>s<br />
células neoplásicas apresentavam núcleos cora<strong>do</strong>s para o<br />
anticorpo monoclonal anti-receptor de estrógeno 12 .<br />
Para a contagem de microvasos, utilizou-se o<br />
software Imagelab ® 2.3 para captura e análise de imagem,<br />
desenvolvi<strong>do</strong> pela Softium Informática Lt<strong>da</strong>., e<br />
um microscópio óptico Nikon Eclipse E400 acopla<strong>do</strong><br />
a uma vídeo-câmera digital Samsung colori<strong>da</strong> modelo<br />
SCC-131, ambos pertencentes ao Setor de Mastologia<br />
<strong>da</strong> Clínica Ginecológica <strong>do</strong> Hospital Getúlio Vargas<br />
<strong>da</strong> UFPI. Áreas de maior concentração de microvasos<br />
(hotspots) foram seleciona<strong>da</strong>s com aumento de 40X,<br />
após o que se procedeu à captura <strong>da</strong> imagem e contagem<br />
manual de microvasos em aumento de 400X, em<br />
dez campos aleatórios por lâmina, utilizan<strong>do</strong> o sistema<br />
de análise de imagens Imagelab ® . A uni<strong>da</strong>de vascular<br />
considera<strong>da</strong> foi a de qualquer célula ou grupo de células<br />
en<strong>do</strong>teliais cora<strong>da</strong>s que estavam niti<strong>da</strong>mente separa<strong>da</strong>s<br />
entre si e de microvasos adjacentes, forman<strong>do</strong> ou não<br />
lúmen 13 (Figuras 1 e 2). As médias de microvasos foram<br />
obti<strong>da</strong>s pela relação entre o somatório <strong>do</strong> número de<br />
vasos conta<strong>do</strong>s, pré e pós-tratamento com raloxifeno, e<br />
o número de pacientes que participaram <strong>do</strong> estu<strong>do</strong>.<br />
A comparação <strong>da</strong>s médias <strong>da</strong> quanti<strong>da</strong>de de microvasos<br />
conta<strong>do</strong>s antes e 28 dias após o <strong>uso</strong> de raloxifeno<br />
foi realiza<strong>da</strong> por meio <strong>do</strong> teste t de Student para duas<br />
amostras parea<strong>da</strong>s. Os valores foram considera<strong>do</strong>s estatisticamente<br />
significantes quan<strong>do</strong> p
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