Deneysel Hayvan Araştırmalarının Planlamasında ... - jcam.com.tr
Deneysel Hayvan Araştırmalarının Planlamasında ... - jcam.com.tr
Deneysel Hayvan Araştırmalarının Planlamasında ... - jcam.com.tr
Create successful ePaper yourself
Turn your PDF publications into a flip-book with our unique Google optimized e-Paper software.
Journal of Clinical and Analytical Medicine ·<br />
Araştırma, az bilineni ya da bilinmeyeni tam bilinen yapma<br />
çabasıdır. Sağlık alanındaki araştırmalarda amaç; sağlıklı<br />
organizmayı ve hastalığı anlayabilmek, korumak veya tedavi<br />
için güvenli ve etkili yollar üretebilmektir. Bu amaçla sağlık<br />
alanında, çeşitli araştırma yöntemleri veya deneysel çalışmalar<br />
yapılmaktadır: Hücre kültürleri (in vi<strong>tr</strong>o), hayvan deneyleri<br />
(in vivo) ve klinik araştırmalar bu kategoride sayılabilir.<br />
<s<strong>tr</strong>ong>Deneysel</s<strong>tr</strong>ong> araştırmalar; bir varsayımın doğruluk durumunu<br />
denemek ya da kanıtlamak için, kon<strong>tr</strong>ol edilebilir şartlar altında,<br />
özgül yöntemler kullanılarak ölçme işlemlerinin yapılmasına<br />
dayanan, geçerli ve güvenilir verilerin üretildiği bilimsel<br />
araştırma yöntemleridir. <s<strong>tr</strong>ong>Deneysel</s<strong>tr</strong>ong> hayvan araştırmaları<br />
ise, bilimsel bilgi elde etmek amacı ile omurgalı veya<br />
omurgasız hayvanlar üzerinde yapılan/yapılacak çalışmaları<br />
ifade etmektedir. Deney hayvanları çok çeşitli alanlarda kullanılmakla<br />
birlikte en fazla; sağlık bilimleri alanında, aşılar,<br />
ilaçlar ve tıbbi malzemelerle ilgili çok sayıda biyolojik testlerde<br />
kullanılmaktadır.<br />
<s<strong>tr</strong>ong>Deneysel</s<strong>tr</strong>ong> hayvan araştırmalarının planlamasında şu hususlara<br />
dikkat edilmelidir:<br />
1. Araştırma Konusunun Belirlenmesi:<br />
Araştırma konusu belirlenirken; kurumun olanakları, hedefleri<br />
ve araştırmacının ilgisi belirleyici olmaktadır. İlk önce<br />
araştırmaya dayanak teşkil edecek problem belirlenmeli ve<br />
hedefler tanımlanmalıdır. Bunun için araştırma ile ilgili bilgiler<br />
toplanır, yayınlanmış veriler incelenir ve hala tamamen<br />
çözülmeyen/anlaşılmayan problemler esas alınır. Daha sonra<br />
bu bilgilere dayanarak varsayım/lar geliştirilir.<br />
Belirlenmiş veya geliştirilmiş bilimsel problemin yeniden ifade<br />
edilmesi, sorunun nedenini/etkisini açık ve anlaşılabilir<br />
şekilde ifade edilmesini sağlayacaktır. Bunun için;<br />
…………’nin üzerine………..’nin etkisi nedir? gibi bir kalıp cümle<br />
ile problem tanımlanabilir.<br />
İlk önce bu problemi basit bir cümle içinde ifade etmek gerekir.<br />
Problem ifade edildikten sonra değiştirebileceğimiz faktör<br />
(neden) ve etkilenebilecek faktörler (etkiler) tanımlanır.<br />
Daha sonra yukarıdaki örnekteki boşluklara; birincisine etkileri<br />
ve ikincisine nedeni koyunuz. Böylelikle araştırmada<br />
problem tanımlanmış olacaktır. Örneğin;<br />
• Problem: Kafes tasarımı laboratuvar sıçanının fizyolojik<br />
fonksiyonlarını etkilediğini göstermektedir.<br />
• Problemin yeniden ifadesi: Sıçanların vital fonksiyonları<br />
üzerine saydam kafesin etkisi nedir?<br />
• Bağımsız değişken (değiştirebileceğimiz faktör, etken): • •<br />
1 | Journal of Clinical and Analytical Medicine<br />
<s<strong>tr</strong>ong>Deneysel</s<strong>tr</strong>ong> <s<strong>tr</strong>ong>Hayvan</s<strong>tr</strong>ong> <s<strong>tr</strong>ong>Araştırmalarının</s<strong>tr</strong>ong> <s<strong>tr</strong>ong>Planlamasında</s<strong>tr</strong>ong> Dikkat Edilecek Hususlar<br />
Ensari Güneli, Mehmet Ateş, Mukaddes Gümüştekin<br />
Saydam kafes.<br />
• Bağımlı değişken (etkilenecek faktör/faktörler, sonuç): Vital<br />
fonksiyonlar.<br />
Yukarıda ifade edildiği gibi problem tanımlandıktan sonra,<br />
araştırmacı araştırma planını yazmaya hazır olmalıdır. Bu<br />
planlama bilimsel projedeki sorunu yanıtlamak için ne yapmamız<br />
ya da denememizi gösterecek şekilde tasarlanmalıdır.<br />
Bunun için desteğe ihtiyacınız olabilir. Bu amaçla danışabileceğiniz<br />
kişiler planlamanızı açık ve dikkatli bir şekilde<br />
yazmanıza yardımcı olabilir.<br />
2. Araştırma Protokolünün Hazırlanması:<br />
<s<strong>tr</strong>ong>Deneysel</s<strong>tr</strong>ong> hayvan araştırmaları maksimum düzeyde bilgi<br />
sağlayacak şekilde tasarlanmalıdır. İyi planlanmış bir deney<br />
en iyi sonuçları verecektir. Araştırmalarda sonuçların geçerliği<br />
ve güvenirliği birçok değişkene bağlı olarak değiştiği için,<br />
planlamanın iyi hesaplanmış ve kon<strong>tr</strong>ol edilmiş olması gerekir.<br />
Bu nedenle deneylerin planlanması esnasında biraz daha<br />
zaman ayırmak gerekir.<br />
<s<strong>tr</strong>ong>Deneysel</s<strong>tr</strong>ong> bir araştırmanın hazırlanmasında çeşitli adımlar/<br />
aşamalar vardır. Bu adımlar şu bilgileri içermelidir:<br />
Açıklama: Sıralama ve içerikler proje başvuru biçimlerine<br />
göre değişebilir; bilgiler kısaca açıklanmıştır.<br />
• Problem: Bağımsız ve bağımlı değişkenlerle (neden ve etkilerle)<br />
problemin ifade edilmesidir.<br />
• Bağımsız değişken: Sonucu etkileyen ve etken (neden) olduğu<br />
düşünülen faktörlere denir.<br />
• Bağımlı değişken: Etkenlerden etkilendiği düşünülen ve sonuç<br />
olan değişkenlere denir. Diğer bir deyişle deneyde bizim<br />
değiştirdiğimiz değişkene (bağımsız değişkene) bağlı olarak<br />
değişen değişkendir.<br />
• Kon<strong>tr</strong>ol: Deneyde değişmeyeceğinden emin olduğumuz faktördür.<br />
• Nicel ölçümler: Sonuçların kaydında kullanabileceğimiz<br />
standart ölçüm birimleridir. Daha iyi, daha yüksek gibi ifadelerin<br />
kullanılması bilimsel değildir.<br />
• <s<strong>tr</strong>ong>Deneysel</s<strong>tr</strong>ong> ve kon<strong>tr</strong>ol grupları: Bunlar deneydeki gruplardır.<br />
Kon<strong>tr</strong>ol grubunda tüm faktörler sabit tutulur, herhangi bir<br />
değişken yoktur. <s<strong>tr</strong>ong>Deneysel</s<strong>tr</strong>ong> grupta değişken vardır. Deneylerde<br />
genellikle sadece bir kon<strong>tr</strong>ol grubu vardır, ancak bazı<br />
durumlarda deneysel gruptan daha fazla olabilir. <s<strong>tr</strong>ong>Deneysel</s<strong>tr</strong>ong><br />
gruptaki veriler kon<strong>tr</strong>ol grubundaki verilerle karşılaştırılır. Bu<br />
gruplardaki hayvan sayısının belirlenmesinde ve deneysel<br />
planlamada istatistiksel yardım almak oldukça fayda sağlayacaktır.<br />
• Gereçler: Deneyde kullanma ihtiyacı duyduğumuz araçgereçleri<br />
ve nerede kullanmamız gerekeceğini düşündüğünüz<br />
malzemelerin listesidir.<br />
• Yöntem (Prosedür): Deneyin akışı ayrıntılı ve adım-adım<br />
sistematik bir yöntemle, basit ve açık bir şekilde belirtilmeli-<br />
Sorumlu Yazar: Ensari Güneli, Dokuz Eylül Üniversitesi, Tıp Fakültesi, Laboratuar <s<strong>tr</strong>ong>Hayvan</s<strong>tr</strong>ong>ları Bilimi AD, 35340 Balçova, İzmir, Türkiye. T.: +90 2324124652 F.: +90 2322770739 E-Mail: ensari.guneli@deu.edu.<strong>tr</strong><br />
Journal of Clinical and Analytical Medicine 5
<s<strong>tr</strong>ong>Deneysel</s<strong>tr</strong>ong> <s<strong>tr</strong>ong>Hayvan</s<strong>tr</strong>ong> <s<strong>tr</strong>ong>Araştırmalarının</s<strong>tr</strong>ong> <s<strong>tr</strong>ong>Planlamasında</s<strong>tr</strong>ong> Dikkat Edilecek Hususlar<br />
<s<strong>tr</strong>ong>Deneysel</s<strong>tr</strong>ong> <s<strong>tr</strong>ong>Hayvan</s<strong>tr</strong>ong> <s<strong>tr</strong>ong>Araştırmalarının</s<strong>tr</strong>ong> <s<strong>tr</strong>ong>Planlamasında</s<strong>tr</strong>ong> Dikkat Edilecek Hususlar<br />
dir. Örneğin, deneyde bir hayvan kullanılacaksa; hayvanın kökesaca açıklamak gerekirse;<br />
ni, türü-soyu, genetik ve mikrobiyolojik özellikleri (nomenklatür), Reduction: <s<strong>tr</strong>ong>Hayvan</s<strong>tr</strong>ong> sayısının azaltılmasıdır. Bu da araştırmalar-<br />
yaş, cinsiyet, vücut ağırlığı, barındırılması, beslenme şekli, madda en az sayıda hayvan kullanarak, en iyi sonuca varma ilkesini<br />
de uygulama yöntemi ve zamanı, biyolojik örneklerin alınma şek- ifade eder. Ancak çok az sayıda hayvanın kullanılması da uygun<br />
li ve zamanı, işlemden geçirilmesi, saklanması, model uygulan- değildir. Bundan dolayı hayvan sayısını belirlemekte kullanılan<br />
mışsa tekniği, anestezi, cerrahi ve ötenazi yöntemleri gibi konu- istatistiksel yöntemler için bu alanda uzmana danışmak gerelar<br />
eksiksiz belirtilmelidir. İstatistiksel yöntemler açıklanmalıdır. kir. Ön çalışma yapmak da hayvan sayısının belirlenmesine kat-<br />
• Hipotez: Beklenen sonuçların öngörülmesi, ifade edilmesidir. kı sağlayacaktır.<br />
Diğer bir şekilde, deneyinizle ne olacağını düşünüyorsunuz? Hi- Refinement: Araştırmada kullanılacak hayvanların yaşamlarıpotez<br />
istatistiksel olarak test edilebilir olmalıdır.<br />
nı uygun koşullarda sürdürmelerine izin verilmesidir. <s<strong>tr</strong>ong>Hayvan</s<strong>tr</strong>ong>la-<br />
• Açıklama: Bu bölümde hipotez ile ne düşünüldüğü açıklanmarın doğumlarından, deneylerde kullanımlarının sonlandırılmasılıdır.na<br />
kadar geçen süreçte gönençlerini artırmak ve sağlamaktır.<br />
Tüm bölümler, konu dışından bir yabancı tarafından okunduğu İnsanlarda ağrıya neden olan işlemlerin, diğer omurgalılarda da<br />
zaman dahi anlaşılabilir olmalıdır.<br />
ağrıya neden olabileceği araştırmacılar tarafından bilinmeli ve<br />
unutulmamalıdır. Bundan dolayı hayvanlarda minimum düzeyde<br />
ağrı duyumsaması sağlanmalıdır.<br />
Replacement: Yerine başka bir şey koyma anlamına gelir. Mümkünse<br />
omurgalı hayvanlar yerine başka şeylerin kullanılması tercih<br />
edilmelidir (bkz, alternatif modeller). Araştırmalar planlanırken<br />
filogenetik sınıflandırmada daha yüksekte yer alan hayvanlar<br />
yerine daha aşağıdaki hayvanlar seçilmelidir.<br />
Responsibility: Bu ilke kısaca kişisel sorumluluğunun arttırılmasını<br />
öngörmektedir.<br />
3. Yeterlilik:<br />
Deney hayvanları ile araştırma yapacak sorumlu kişilerin bu<br />
alanda yeterli teorik ve uygulamalı eğitim almış olmaları gerekir.<br />
Bu kişiler; yasalar, etik, ilgili hayvanlarının bakım ve biyolojisini,<br />
gönençlerini (refah) ve fizyolojik ihtiyaçlarını, tutma yöntemlerini,<br />
temel uygulamalar ve ötenazi, hastalık, s<strong>tr</strong>es ve diğer<br />
olumsuz durumları bilme, anestezi, analjezi, temel cerrahi prensipler<br />
ve deney güvenliği gibi temel bilgi ve becerilere sahip olmalıdır.<br />
Birçok ülkede hayvan kullanımı ile ilgili yasal düzenlemeler,<br />
hükümetin kon<strong>tr</strong>olü altında yetkili kurumları tarafından yürürlüğe<br />
konup uygulanmaktadır.<br />
4. Alternatif yöntemler:<br />
<s<strong>tr</strong>ong>Deneysel</s<strong>tr</strong>ong> araştırma planlanırken ilk önce canlı hayvan kullanmak<br />
gerekliliği dikkatlice düşünülmelidir. Bir hayvan kullanılacaksa,<br />
mümkünse omurgalı hayvanlar yerine alternatif yöntemler tercih<br />
edilmelidir. Eğer canlı hayvan kullanılacaksa amacı bilimsel<br />
gerekçelerle açıklanmalıdır. Örneğin;<br />
• İncelenen süreçlerin karmaşıklığı nedeniyle daha basit sistemlerde<br />
oluşturulması ve model kurulmasının olanaksızlığı,<br />
• İncelenecek sistemin, canlı olmayan modellerde taklit edilebilmesi<br />
için yeterli bilgi birikiminin olmadığı,<br />
• Preklinik çalışmalarda, insan üzerinde denenmeden önce canlı<br />
hayvan üzerinde deney yapmanın zorunluluğu,<br />
• Ve diğer sebepler gibi açıklamalar yapılmalıdır.<br />
Alternatif yöntemleri kısaca ifade etmek gerekirse; hayvan deneylerinin<br />
yerine geçen, kullanılacak hayvan sayısını azaltan,<br />
hayvanların acısını azaltacak veya hayvanların gönencini artıracak<br />
uygulamalar olarak ifade edilmektedir. Örneğin; doku ve<br />
organ kültürleri, omurgasız hayvanların kullanılması, embriyonlu<br />
yumurtanın kullanılması, bir hücrelilerin kullanılması, bilgisayar<br />
ve veri bankalarının kullanılması, matematiksel yöntemler, gönüllü<br />
insan kullanımı ve epidemiyolojik çalışmalar, eğitimde yapay<br />
modellerin ve filmlerin kullanılması gibi.<br />
<s<strong>tr</strong>ong>Deneysel</s<strong>tr</strong>ong> araştırmalarda hayvanlara alternatiflerin aranmasında<br />
Russell ve Burch tarafından tanımlanan 3R kuralı önemli katkı<br />
sağlamıştır. Bu üç ilkenin yanı sıra The International Foundation<br />
for Ethical Research (IFER) 1985 yılında hem hayvanlarda<br />
hem de insanlarda yapılacak araştırmalarda “Sorumluluk” ilkesini<br />
oluşturarak ilkeleri 4R biçiminde geliştirmiştir. Böylelikle<br />
bir araştırmacı deneysel araştırmasını planlarken 4R kuralına<br />
uymalıdır.<br />
‘‘4R’’ kuralı: İngilizce kelimeler olan; reduction, refinement, replacement<br />
ve responsibility kelimelerinin baş harfleridir. Bu kurallar<br />
hem hayvanların sağlığının korunması hem de bilimsel çalışmaların<br />
kalitesinin yükseltilmesini amaçlamaktadır. Sırasıyla kı-<br />
6 Journal of Clinical and Analytical Medicine<br />
2 | Journal of Clinical and Analytical Medicine<br />
5.<s<strong>tr</strong>ong>Hayvan</s<strong>tr</strong>ong> seçimi<br />
Deney materyalleri, araştırılacak konunun veya problemin en<br />
basit şekilde çözülebilmesine olanak verecek şekilde seçilmeli,<br />
yasal ve etik yönleri incelenmelidir. Günümüzde basit omurgalı<br />
hayvanlardan gelişmiş memeli hayvanlara kadar birçok hayvan<br />
türü deney materyali (denek) olarak kullanılmaktadır. Ancak,<br />
omurgasızların kullanımı oldukça sınırlı düzeylerde kalmaktadır.<br />
Son yıllarda bazı ilkel omurgalıların kullanımında artışlar olsa da,<br />
anatomik ve biyolojik fonksiyonları insana benzerliklerinden dolayı<br />
halen en fazla tercih edilenler memeli türleridir. Kullanımda<br />
üst grupları oluşturanları sınıflandırırsak, Dünya genelinde en<br />
fazla kullanılan deney hayvanlarının; sıçan, fare, balık ve tavşan,<br />
orta düzeyde kullanılanların ise domuz, kobay, hamster ve maymun<br />
olduğunu görürüz. Özellikle sıçan ve fare gibi küçük hayvanlar;<br />
yaşam sürelerinin kısalığı, kolay manipüle edilmeleri ve üretim<br />
kolaylığı gibi avantajlarından dolayı sık tercih edilirler. Bir<br />
dönem bazı alanlarda çok kullanılan kedi ve köpeklerin, yasalar<br />
gereği deneysel amaçlı kullanımı sınırlanmıştır. Bu hayvanlar, bu<br />
amaçla üretilmiş merkezlerde olmaları koşuluyla, deneye alınmalarına<br />
izin verilmektedir.<br />
Seçilecek hayvan hakkında bir karar verebilmek için aşağıdaki<br />
noktaları göz önünde bulundurmak gerekmektedir:<br />
a) Uygun bir hayvan seçmek için araştırmacı ilk önce ihtiyaç duyulan<br />
hayvan modelini belirlemelidir.<br />
<s<strong>tr</strong>ong>Hayvan</s<strong>tr</strong>ong> Modeli; normal biyoloji ya da davranışların çalışılabileceği,<br />
kendiliğinden ya da indüklenmiş bir patolojik durumun<br />
araştırılabileceği ve biyolojik işlev yönünden insan ya da diğer<br />
hayvan türlerine benzerlik gösteren hayvanların kullanıldığı model<br />
olarak tanımlanır. <s<strong>tr</strong>ong>Hayvan</s<strong>tr</strong>ong> modelleri her zaman gerçek durumu<br />
(hastalık, biyolojik gibi) tam olarak yansıtmaz, sadece yaklaşık<br />
bir sonuç-fikir verir. Diğer bir deyişle geniş anlamda, deneysel<br />
bilim yaklaşık bilgi edinme çalışmalarıdır.<br />
Bu modeller şunlardır:<br />
• İndüklenmiş model: Cerrahi ya da çeşitli ajanlarla hayvanlarda,<br />
hedef organizmada görülenlere benzer hastalık veya bozukluk<br />
oluşturulmasıdır. En fazla kullanılan modeldir. Örneğin, <strong>tr</strong>ansgenik<br />
fare üretimi, karbon te<strong>tr</strong>aklorür (CCl4) ile karaciğer yetmez-
<s<strong>tr</strong>ong>Deneysel</s<strong>tr</strong>ong> <s<strong>tr</strong>ong>Hayvan</s<strong>tr</strong>ong> <s<strong>tr</strong>ong>Araştırmalarının</s<strong>tr</strong>ong> <s<strong>tr</strong>ong>Planlamasında</s<strong>tr</strong>ong> Dikkat Edilecek Hususlar<br />
liği, s<strong>tr</strong>eptozotosin ile diyabetik sıçan oluşturmak gibi. Etiyolojisi<br />
bilinen hastalıklarda faydalı olmakla birlikte, hastalık birçok<br />
nedene ya da bilinmeyen faktörlere bağlı ise hayvanlarda bu tür<br />
hastalıkları taklit etmek zor olabilmektedir.<br />
• Spontan model: Genetik olarak kendiliğinden oluşan ve insanlardaki<br />
hastalığa benzer mekanizmalar gelişen modeldir. Örneğin,<br />
spontan diabetik kemirgen modellerindeki patoloji ve belirtiler<br />
insanlara benzer.<br />
• Negatif model: Belirli bir hastalığın kesinlikle gelişmediği hayvan<br />
türü, ırkı veya soylarıdır. Örneğin, tavşanda gonokok infeksiyonu<br />
gelişmez.<br />
• Olası modeller (Orphan modeller); Bazı hastalıklar öncelikle<br />
hayvanlarda tanımlanmış, daha sonra insanlarda benzeri tanımlanabilir<br />
amacı ile çalışılan modellerdir. Örneğin, marek ve deli<br />
dana hastalığı gibi. Eğer benzer bir hastalık insanlarda görülürse<br />
model adapte edilir.<br />
Araştırmanın planlamasında hangi modelin mümkün ve gerçekçi<br />
olduğu belirlenmelidir. Spesifik araştırma modellerini inceleyen<br />
çok sayıda kitap ve geniş bir hayvan modeli listesi vardır.<br />
Uygun bir model bulunmadığı zaman yeni bir modelin geliştirilmesi<br />
gerekebilir; ancak, yeni bir model geliştirmek oldukça zaman<br />
alıcı bir süreçtir.<br />
b) <s<strong>tr</strong>ong>Hayvan</s<strong>tr</strong>ong> türünün belirlenmesi için daha önce benzeri yapılan<br />
çalışmalar incelenmeli, literatür araştırması yapılmalıdır.<br />
Birçok araştırmacı hayvan seçimini daha önce yapılan benzer<br />
araştırmalarda kullanılmış hayvan türüne göre yapar. Daha önce<br />
elde edilen verilerle karşılaştırma yapmayı olanaklı kılan geniş<br />
veritabanları bulunması hayvan türünün belirlenmesinde avantaj<br />
sağlayacaktır. Özellikle fare ve sıçan gibi sık ve çok kullanılan<br />
laboratuvar hayvanları bu açıdan kolaylık sağlamaktadır. Ancak<br />
araştırmalarda kullanılan hayvan türü mevcut koşullarda bulunmayabilir<br />
veya temin edilse bile laboratuvar koşulları uygun<br />
olmayabilir. Bundan dolayı benzer hayvan modelinin diğer hayvan<br />
türlerinde uygun olup olmayacağı araştırılmalıdır. Çalışmalar<br />
için en uygun hayvanın seçiminin önemi ile ilgili en iyi örnek<br />
vasküler restenoz (damarın tekrar daralması) çalışmalarıdır. Domuz<br />
ve maymunda anjiyoplasti sonrası “restenoz” ile ilgili sonuçlar,<br />
küçük hayvanlardan elde edilen verilere kıyasla insandakine<br />
daha yakındır.<br />
c) Çalışmada kullanılacak gereçler için lojistik desteğin listesi<br />
hazırlanmalıdır.<br />
– <s<strong>tr</strong>ong>Hayvan</s<strong>tr</strong>ong> barınakları<br />
Barındırma; hayvanın gönencini, araştırma sonuçlarının kalitesini,<br />
personelin güvenliğini ve sağlığını etkiler. Günümüzde laboratuvar<br />
hayvanı üretimi yapan birçok kuruluşta, bazı hususlara<br />
gereksinim duyulmayabilir, ancak araştırmacının mevcut barınma<br />
ve bakım koşullarını bilmesi fayda sağlayacaktır. Unutulmamalıdır<br />
ki, hayvan üretim tesisleri optimum kalitenin altında olsa<br />
dahi, iyi eğitilmiş ve motive personelin hayvanların yaşam koşullarında<br />
yüksek kalite sağladığı bilinmektedir.<br />
Kafesler; hayvanların kaçmasına engel olacak şekilde muhafazalı<br />
ve boyutları türe uygun olmalıdır. <s<strong>tr</strong>ong>Hayvan</s<strong>tr</strong>ong>ın türüne ve yaşına<br />
göre rahat edeceği kafes alanı ve yüksekliği sağlamak zorunluluktur.<br />
Kafes içi değişiklikler hayvanların fizyolojik, metabolik işlevlerini<br />
değiştirebilir, hastalıklara duyarlılaştırabilir. Dolaysıyla,<br />
araştırmacı hayvanlarını kafeslerken; tür, suş, yavrulama, bireysel<br />
özellikler (cinsiyet, yaş, davranış, sağlık.), sosyal formu (tek<br />
veya grup şeklinde barındırma), barınacak alanın zenginliği gibi<br />
faktörlere dikkat etmelidir.<br />
Farklı bir merkezden veya kaynağı bilinmeyen bir üretim yerinden<br />
getirilen hayvanların, hastalık taşıyıp taşımadığı incelenmelidir.<br />
Bu amaçla araştırma yapılacak alanda hayvanların gözet-<br />
3<br />
| Journal of Clinical and Analytical Medicine<br />
<s<strong>tr</strong>ong>Deneysel</s<strong>tr</strong>ong> <s<strong>tr</strong>ong>Hayvan</s<strong>tr</strong>ong> <s<strong>tr</strong>ong>Araştırmalarının</s<strong>tr</strong>ong> <s<strong>tr</strong>ong>Planlamasında</s<strong>tr</strong>ong> Dikkat Edilecek Hususlar<br />
lenmesine olanak sağlayacak karantina alanı bulunmalıdır.<br />
<s<strong>tr</strong>ong>Hayvan</s<strong>tr</strong>ong>ın bulunduğu ortamda hijyenik koşullar, havalandırma,<br />
ısı, nisbî nem, gürültü, ışık gibi barınma faktörleri türlere özgüleştirilmiş<br />
olmalıdır. Bu koşullara uygun davranılmadığı takdirde<br />
hem hayvanların sağlığı bozulacak, hem de deney sonuçları farklı<br />
olacaktır. Örneğin, havalandırma ve ısıtma sorunları ile hayvanlarda<br />
ciddi akciğer problemleri ortaya çıkabilir. Ayrıca farklı<br />
yerlerde yapılan benzer çalışma sonuçları da farklı olacaktır.<br />
<s<strong>tr</strong>ong>Hayvan</s<strong>tr</strong>ong>ların genellikle 30ºC ‘nin yukarısında ve 5 ºC nin altındaki<br />
sıcaklığa koruyucu mekanizmalar olmaksızın maruz kalması<br />
klinik etkiler yapabilir ve hayatı tehdit edebilir. <s<strong>tr</strong>ong>Hayvan</s<strong>tr</strong>ong>lar davranışsal,<br />
fizyolojik ve morfolojik mekanizmalarla bu sapmalara<br />
uyum sağlayabilir. Fakat böyle adaptasyonlar zaman alır ve performansı<br />
etkileyebildiği gibi sonucu da değiştirebilir. Sıcaklık değişimleri<br />
hayvanların; ilaca yanıtını, infeksiyonlara olan duyarlılıklarını,<br />
üremesini, yem ve su tüketimini, büyümesini, hematolojik<br />
parame<strong>tr</strong>elerini,..değiştirir.<br />
Laboratuvar hayvanlarının çoğu albino oldukları için, aşırı ışık<br />
katarakt ve s<strong>tr</strong>es gelişmesine neden olabilir. Bu nedenle, albino<br />
hayvanların bulunduğu odaların ışıkları çok parlak olmamalıdır.<br />
Dikkat edilmesi gereken önemli koşullardan biri de hayvanların<br />
bulunduğu odalarda gürültü 85 dB’den düşük olmalıdır. Özellikle<br />
gebe ve yeni doğurmuş hayvanlar, gürültüden rahatsız olup yavrularına<br />
zarar verebilirler. Ayrıca gürültünün oluşturacağı s<strong>tr</strong>es<br />
faktörleri de deney sonuçlarını olumsuz etkileyebilir. Örneğin,<br />
sürekli s<strong>tr</strong>es altında kalan sıçanlarda böbreküstü bezi hiperplazisi<br />
saptanmıştır.<br />
İnsan, diğer türler, kafes içindeki türdeşler, koku, zemindeki materyaller<br />
gibi faktörler hayvanın durumunu etkiler. Bundan dolayı<br />
çevresel faktörler standart hale getirilmeli ve sabit tutulmalıdır.<br />
– Teknisyenler<br />
Teknisyenler deneysel bölümün konforlu, etkin gerçekleşmesinde<br />
önemli rol oynayan personellerdir. Bu kişilerin görevleri; hayvanlara<br />
karşı iyi davranma, kuralına uygun tutma, operasyona<br />
hazırlama, ilaç uygulama, vücut sıvılarını toplama, davranışlarını<br />
inceleme, anestezi uygulama, aseptik bir operasyona yardımcı<br />
olma gibi tanımlanmıştır. Örneğin, bir teknisyen herhangi bir<br />
ilaç uygulamadan önce; hayvanın ve ilacın doğruluğunu, ilacın<br />
dozunu, uygulama yolu ve zamanının doğruluğunu ve ilacın son<br />
kullanma tarihini kon<strong>tr</strong>ol etmelidir. Bunlardan kaynaklanacak bir<br />
hata hayvana zarar verebilir, yanlış sonuca neden olabilir. Eğer<br />
araştırmacı bu uygulamaları kendi yapacaksa kon<strong>tr</strong>olleri benzer<br />
şekilde yapmalıdır.<br />
– Maliyet<br />
<s<strong>tr</strong>ong>Hayvan</s<strong>tr</strong>ong>ın boyutları küçüldükçe bakım ve satın alma maliyeti az<br />
olmaktadır. Operasyondan sonra hayvan uzun süre yaşatılacaksa<br />
bakım masrafları da yüksek olacaktır. Projeler hazırlanırken<br />
bu unsurlar göz önünde tutularak, maliyet hesaplamaları yapılmalıdır.<br />
– Beslenme<br />
Deney hayvanı seçerken; beslenme özellikleri iyi bilinen ve dengeli<br />
beslenmeleri için ticari yem bulunabilecek hayvanların seçilmesi<br />
tavsiye edilmektedir. Kaliteli yem ve içme suyu temin edilmelidir.<br />
Nadir bulunan türler seçildiği zaman beslenme problem<br />
yaratabilir.<br />
– <s<strong>tr</strong>ong>Hayvan</s<strong>tr</strong>ong> temini<br />
Araştırmayı planlarken hayvan temininde harcanacak süre göz<br />
önüne alınmalıdır. Bu süre hayvanın niteliği ve sayısı ile değişmektedir.<br />
Bazı türleri (maymun gibi) veya özellikli hayvanları<br />
(<strong>tr</strong>angenik, SPF hayvanlar gibi) mevcut koşullarda bulmak zor<br />
olabilir. Ülkemizde fare, sıçan, tavşan ve kobay gibi yaygın ve<br />
konvansiyonel olarak yetiştirilen hayvanların temininde genel-<br />
Journal of Clinical and Analytical Medicine 7
<s<strong>tr</strong>ong>Deneysel</s<strong>tr</strong>ong> <s<strong>tr</strong>ong>Hayvan</s<strong>tr</strong>ong> <s<strong>tr</strong>ong>Araştırmalarının</s<strong>tr</strong>ong> <s<strong>tr</strong>ong>Planlamasında</s<strong>tr</strong>ong> Dikkat Edilecek Hususlar<br />
<s<strong>tr</strong>ong>Deneysel</s<strong>tr</strong>ong> <s<strong>tr</strong>ong>Hayvan</s<strong>tr</strong>ong> <s<strong>tr</strong>ong>Araştırmalarının</s<strong>tr</strong>ong> <s<strong>tr</strong>ong>Planlamasında</s<strong>tr</strong>ong> Dikkat Edilecek Hususlar<br />
likle bir sorun yaşanmaz. Bu hayvanlar genellikle araştırmaların kalitatif ve kantitatif uyarlanabilirliğine, yani uygun olup olma-<br />
yapıldığı kurumlarda yetiştirilir veya ticari hayvan yetiştiriciliği dığına dikkat edilmelidir. Zira hayvan deneylerindeki ‘’hayvan-<br />
yapan firmalardan satın alınabilir. Kayıtsız, belgesiz veya çevrelardan insanlara uyarlama’’ kavramı halen anlaşılmazlığını koden<br />
toplanan hayvanlar deneylerde kullanılamaz. Özellikle dışarumaktadır. Bazı bilim adamlarına göre hayvan deneyleri sonuçrıdan<br />
getirilecek hayvanlar sağlık durumları incelenmelidir. Sağları insanlara uyarlanabilirliği söylenmektedir. Örneğin bir ilalık<br />
durumu iyi olmayan hayvanlar deneylerde kesinlikle kullanılcın sıçan ve köpekte zararsız olması insanlarda da zararsız olmamalıdır.ması<br />
gibi. Bazı bilim adamları ise, özellikle hayvan karşıtı olan-<br />
<s<strong>tr</strong>ong>Hayvan</s<strong>tr</strong>ong>ların nakledilmelerinde; kafes niteliği ve boyutu, yöntemi, lar, hayvan deneylerinden elde edilen sonuçların yanıltıcı olduğu-<br />
yiyecek desteği gibi hususlara da dikkat edilmelidir.<br />
nu savunmaktadır. Örneğin, kobaylarda penisilinin öldürücü ol-<br />
d) Malzeme listesinin hazırlanması<br />
ması gibi. İnvi<strong>tr</strong>o yöntemlerle elde edilen sonuçların hayvanlara<br />
Türlerin seçimi<br />
ve insanlara uyarlamak çok daha zordur. Bu nedenlerle bu uyar-<br />
<s<strong>tr</strong>ong>Deneysel</s<strong>tr</strong>ong> araştırmalarında hayvan seçiminde tür ve soy bazında lamaların yapılmasına, açıklanmasına gerek yoktur. Sonuçların<br />
düşünmek gerekir. Çünkü her araştırmayı her hayvan türünde ya bir türden diğer türe aktarılmasında sadece homologunun se-<br />
da soyunda yapmak mümkün olmayabilir. Bu nedenle, çalışmaçilmesi ile olmamaktadır. Birden çok tür yaklaşımında da buluya<br />
başlamadan önce hangi hayvan türünün, hatta o türün içinnulmalıdır. Örneğin, toksikolojik çalışmalarda araştırılacak etkedeki<br />
hangi soyun çalışmaya en uygun olduğu saptanmalıdır. Senin kemirgen olmayan iki türde de (kedi ve köpek gibi) incelençilecek<br />
tür, insandaki durumu taklit etmek için çok uygun bir momesi gerekir.<br />
del oluşturmalıdır. Temin edilebileceği görüldükten sonra çalış- Uyarlamada türler arasında metabolik yapı ve hız uyumlu olmama<br />
projesi sunulmalıdır.<br />
lıdır. Örneğin kemirgenlerde metabolizma insanlardan oldukça<br />
hızlıdır. Metabolizmanın kon<strong>tr</strong>olü ve işleyişi vücut büyüdükçe<br />
azalır, ilaç dozları da buna göre hesaplanır.<br />
Türe özgü şu parame<strong>tr</strong>eler incelenmelidir:<br />
Fizyolojik özellikler; yaşam alanları, nabız ve soluk sayısı, toplam<br />
kan miktarları, deney süresince öldürmeden alınabilen kan miktarı<br />
ve bölgeleri, kan parame<strong>tr</strong>e özellikleri (biyokimyası gibi), injeksiyon<br />
bölgesi ve o bölgelere verilebilecek maksimum madde<br />
volümü, çıkardığı idrar miktarı, günlük içtiği su miktarı, dışkı<br />
özelliği, biyoloji ve üreme fonksiyonlarının iyi bilinmesi gerekir.<br />
<s<strong>tr</strong>ong>Hayvan</s<strong>tr</strong>ong>ların yaşam şekilleri ve davranışları dikkate alınmalıdır.<br />
Anatomik özellikler; yapılacak çalışmaya anatomik yapı olarak<br />
uygunluk, hayvan büyüklüğü, organ yapısı ve modele uygunluk,<br />
türler arası anatomik farklılıklar, özel anatomik eksiklerden faydalanma<br />
(sıçanda safra kesesi olmaması) gibi özellikler incelenmelidir.<br />
Küçük hayvanların; maliyeti, tutulmaları, bakım ve barındırma,<br />
üretim kolaylıkları açısından birçok avantajları vardır. Büyük<br />
hayvanlar ise cerrahi teknikler, i.v. injeksiyon, kan alma, örnek<br />
alma gibi durumlarda avantaj sağlamaktadır.<br />
<s<strong>tr</strong>ong>Hayvan</s<strong>tr</strong>ong> Tipinin Belirlenmesi<br />
Genetik homojenitesi yüksek olan hayvanların seçilmesi (inbred);<br />
büyüme hızı, vücut ağırlığı ve biyolojik özellikler açısından daha<br />
birörnektir. Eğer bir araştırmada inbred hayvanlar kullanılırsa,<br />
denekler arası bireysel farklılıklar azalacağı için ölçülen veriler<br />
benzer yakınlıkta olacaktır. Bu özellik deneyde daha az hayvan<br />
kullanmamızı sağlayacak, istatistiksel açıdan da sorun yaratmayacaktır.<br />
Ancak bazı deneysel araştırmalarda, toksisite testlerinde<br />
olduğu gibi, belirli derecede genetik farklılığın olması istenir<br />
(outbred).<br />
Belirlenen her gruba özgü yaş ve cinsiyetleri (erkek ya da dişi)<br />
benzer olan hayvanlar seçilmelidir.<br />
Bizı durumlarda enzim noksanlığı, immün yetersizliği olan ya da<br />
dalağı, timusu, tiroidi, hipofizi alınmış ya da diabetik hayvanlara<br />
gereksinim duyulabilir ve seçilebilir.<br />
Cerrahi girişimler için seçilecek bir hayvanda; operasyona uygun<br />
olması, büyük hayvanlar için mevcut olan cerrahi tekniklerin<br />
küçük hayvanlara uygulanabilmesi, ya da hayvana sürekli kanül<br />
takılabilmesi, NMR, radyografi, anjiografi, teleme<strong>tr</strong>i (nabız, kan<br />
basıncı, EKG, vücut ısısı, lokomotor aktivite gibi) gibi deney izleme<br />
yollarına uygun olması, uzun sürebilecek genel anesteziye<br />
dayanabilmesi gibi özellikler değerlendirilmeli ve seçilen hayvanın<br />
uygunluğunu belirlemek için ön çalışma yapılması gereklidir.<br />
Seçilecek türlerle elde edilecek verilerin (sonuçların), insanlara<br />
8 Journal of Clinical and Analytical Medicine<br />
4 | Journal of Clinical and Analytical Medicine<br />
Bazı türlerin en fazla kullanıldığı araştırma alanları:<br />
Fare: Kanser, antikor, ilaç, aşı…<br />
Sıçan (rat): Temel tıp, ilaç, gıda, davranış, toksisite…<br />
Kobay (guinea-pig): Duyarlılık, aşı, immünoloji, otoloji, diyet…<br />
Tavşan: Toksisite, antiserum üretimi, göz ve deri irritasyon testleri,<br />
damar sertliği…<br />
Hamster: Tümör, kan dolaşımı, üreme ve fötüs bozuklukları, bazı<br />
deneysel enfeksiyonlara (leptospiroz, influenza, köpek gençlik<br />
hastalığı) duyarlık, hipotermi (kış uykusuna yatar)…<br />
Gerbil: Epilepsi, kolesterol metabolizması ve damar sertliği, obezite,<br />
filarya, beyin infarktüsleri…<br />
Kedi: İlaç geliştirmesinde, kalp-damar hastalıkları, nöroloji…<br />
Köpek: Aşı ve ilaç testleri, cerrahi tekniklerin geliştirilmesi, kalpdamar<br />
hastalıkları…<br />
Domuz:, Deri, pankreas, gas<strong>tr</strong>ointestinal sistem, kardiyovasküler<br />
sistem, iskelet gibi pek çok organları insanlarınkine benzerlik<br />
gösterir. Aşı, gıda…<br />
Koyun ve keçi: Antikor geliştirme, cerrahi tekniklerin geliştirilmesi…<br />
Maymun: Aşı ve ilaç, davranış, insanlara özgü enfeksiyon hastalıkları…<br />
Kanatlılar (tavuk, güvercin, bıldırcın): Tavuklar; genellikle beslenme,<br />
aşılama, bağışıklık, embriyoloji ve toksikoloji, güvercin ve<br />
kumrular; fizyoloji ve davranış, farmakokinetik ve toksikoloji,<br />
Soğukkanlı omurgalılar: Sürüngenler zooloji ve karşılaştırmalı<br />
çalışmalarda, amfibiler organ gelişimi ve moleküler genetik, balıklar<br />
çevre kirliliği ve genetik araştırmalarında kullanılırlar.<br />
6. <s<strong>tr</strong>ong>Hayvan</s<strong>tr</strong>ong> deneylerinin standartlaştırılması:<br />
Standartlaşma bir deneyden elde edilen verilerin ortalamasının,<br />
deney tekrarlandığında benzer yakınlıkta olmasını amaçlar. Dolayısıyla,<br />
hayvan deneylerinin standartlaştırılması; deneyde kullanılacak<br />
hayvanların, çevresel ve deneysel koşullarının sabit tutulması<br />
veya kon<strong>tr</strong>ol altına alınması anlamına gelir. Standartlaşmada<br />
metabolizmayı etkileyen değişkenler kon<strong>tr</strong>ol edilmelidir.<br />
Bunlar arasında beslenme şekilleri, cins, yaş, madde uygulama<br />
yolu-zamanı-miktarı, örnek alma yolu-hacmi-zamanı, mevsim,<br />
biyoloji gibi birçok özellik sayılabilir.<br />
Standartlaştırma aynı zamanda deneyde kullanılacak hayvanların<br />
ölçülebilir parame<strong>tr</strong>eleri arasındaki varyasyonu azaltacağı
<s<strong>tr</strong>ong>Deneysel</s<strong>tr</strong>ong> <s<strong>tr</strong>ong>Hayvan</s<strong>tr</strong>ong> <s<strong>tr</strong>ong>Araştırmalarının</s<strong>tr</strong>ong> <s<strong>tr</strong>ong>Planlamasında</s<strong>tr</strong>ong> Dikkat Edilecek Hususlar<br />
için daha az sayıda hayvan kullanımı sağlar. Beslenmenin standardizasyonu<br />
(yemler ve yemleme şekli gibi), genetik olarak birörnek<br />
hayvanların kullanılması (inbred), mikrobiyolojik kalitenin<br />
sağlanması (kontaminasyonların etkisini en aza indirmek veya<br />
tamamen ortadan kaldırmak için, spesifik patojen free, gnotobiyotik<br />
veya germfree hayvan üretim teknikleri) ve hayvanların<br />
çevresel ortamın standardizasyonu önemlidir.<br />
Mikrobiyolojik durumları birbirinden farklı hayvanların fizyolojileri<br />
ve çeşitli etkenlere karşı yanıtları farklı olacaktır. Örneğin,<br />
bazı patojenlerden arındırılmış (SPF) fareler ile geleneksel yetiştirilmiş<br />
farelerin bir maddeye karşı yanıtı bu özellikten dolayı<br />
farklı olabilir.<br />
Araştırmacı, bakıcı ve diğer personellerin tutum ve davranışları<br />
da hayvanları etkilediği için, bunlar sonuçlara deney dışı faktörler<br />
olarak yansımaktadır.<br />
Kısacası hayvanların refahını bozan her faktör deney sonuçlarını<br />
etkilemektedir. Bundan dolayı belirlenen standartların sağlanması<br />
ve sürdürülmesi etik, araştırma sonuçları, finans ve işgücü<br />
açısından oldukça önemlidir.<br />
Kaynaklar<br />
1. Altuğ T. Biyolojik Araştırmalarda Deney <s<strong>tr</strong>ong>Hayvan</s<strong>tr</strong>ong>ı Kullanılmasının Ana İlkeleri. II.<br />
Ulusal Moleküler Biyoloji ve Genetik Öğrenci Kış Okulu Kitabı, Mart 2005, İstanbul,<br />
s. 97-101<br />
2. Altuğ T. <s<strong>tr</strong>ong>Hayvan</s<strong>tr</strong>ong> Deneyleri Etiği. Türk Tıp Dizini. Sağlık Bilimlerinde Süreli Yayıncılık<br />
2009 7.Ulusal Sempozyum Bildirileri. S.53-68<br />
http://www.ulakbim.gov.<strong>tr</strong>/cabim/vt/uvt/tip/sempozyum7/altug.pdf<br />
3. Dokuz Eylül Üniversitesi [homepage on the Internet]. Dokuz Eylül Üniversitesi<br />
<s<strong>tr</strong>ong>Hayvan</s<strong>tr</strong>ong> Deneyleri Yerel Etik Kurulu.<br />
http://www.deu.edu.<strong>tr</strong>/DEUWeb/Icerik/Icerik.php?KOD=6664<br />
4. Dikensoy O. Neden <s<strong>tr</strong>ong>Deneysel</s<strong>tr</strong>ong> Araştırmalar? Ülkemizde <s<strong>tr</strong>ong>Deneysel</s<strong>tr</strong>ong> Araştırmalarda<br />
Mevcut Durum. Türk Toraks Derneği 13. Yıllık Kongre, 5-9 Mayıs 2010, İstanbul.<br />
5. Hughes HC, Lang CM. Basic Principles İn Selecting Animal Species For Research<br />
Project. Clınıcal Toxıcology. 1978;13; 611-621.<br />
6. Kaya M. <s<strong>tr</strong>ong>Hayvan</s<strong>tr</strong>ong> çalışmalarında planlama ve uygun model ve denek seçimi nasıl<br />
yapılmalı? Türk Toraks Derneği 13. Yıllık Kongre, 5-9 Mayıs 2010, İstanbul.<br />
7. Lipman NS, and Perkins SE. Factors That May Influence Animal Research. Fox<br />
JG, Anderson LC, Loew FM, Quimby FW. Editors, Laboratory Animal Medicine, Second<br />
Edition, London: Academic Press, 2002. p. 1143-1165.<br />
8. Planning the Experiment. nefrsef.org [homepage on the Internet]. Northeast Florida<br />
Regional Science and Engineering Fair, Inc; c2005 Available from: http://www.<br />
nefrsef.org/students/plan.html<br />
9. Poyraz Ö. Laboratuar <s<strong>tr</strong>ong>Hayvan</s<strong>tr</strong>ong>ları Bilimi. Kardelen Ofset Ankara, 2000.<br />
10. Quimby FW. Animal Models in Biomedical Research. Fox JG, Anderson LC, Loew<br />
FM, Quimby FW. Editors, Laboratory Animal Medicine, Second Edition, London:<br />
Academic Press, 2002. p. 1185-1214.<br />
11. Russell. WMS, Burch RL.. The Principles of Humane experimental Technique.<br />
London: Methuen. 1959<br />
12. Utkan NZ, Cantürk NZ. Deney hayvanlarının ve deney modellerinin seçimi. In;<br />
Cantürk ZF, Sayek İ, Editörler. Cerrahi Araştırma “Araştırma planlama, Değerlendirme<br />
ve sunum, Deney hayvanları, Özgül deneysel modeller”. Birinci basım. İstanbul:<br />
Nobel Tıp Basımevi, 2005. s. 125-129.<br />
13. von Zutphen LFM, Baumans V, Beynen AC. Laboratuvar <s<strong>tr</strong>ong>Hayvan</s<strong>tr</strong>ong>ları Biliminin<br />
Temel İlkeleri. Çeviri Editörü. Tayfun İde, Medipres Ankara 2003.<br />
14. Yavru N, Yavru S. Deney <s<strong>tr</strong>ong>Hayvan</s<strong>tr</strong>ong>ları. Konya: Selçuk Üniversitesi Veteriner Fakültesi<br />
Yayını; 1996.<br />
15. Yeğen BÇ, Gören Z. Biyomedikal Araştırmalarda Deney <s<strong>tr</strong>ong>Hayvan</s<strong>tr</strong>ong>ı “Temel Bilgiler<br />
ve Etik İlkeler” Yüce Yayım Tavaslı Matbaası, İstanbul, 2005.<br />
5<br />
| Journal of Clinical and Analytical Medicine<br />
<s<strong>tr</strong>ong>Deneysel</s<strong>tr</strong>ong> <s<strong>tr</strong>ong>Hayvan</s<strong>tr</strong>ong> <s<strong>tr</strong>ong>Araştırmalarının</s<strong>tr</strong>ong> <s<strong>tr</strong>ong>Planlamasında</s<strong>tr</strong>ong> Dikkat Edilecek Hususlar<br />
Journal of Clinical and Analytical Medicine 9