24.09.2013 Views

Deneysel Hayvan Araştırmalarının Planlamasında ... - jcam.com.tr

Deneysel Hayvan Araştırmalarının Planlamasında ... - jcam.com.tr

Deneysel Hayvan Araştırmalarının Planlamasında ... - jcam.com.tr

SHOW MORE
SHOW LESS

Create successful ePaper yourself

Turn your PDF publications into a flip-book with our unique Google optimized e-Paper software.

Journal of Clinical and Analytical Medicine ·<br />

Araştırma, az bilineni ya da bilinmeyeni tam bilinen yapma<br />

çabasıdır. Sağlık alanındaki araştırmalarda amaç; sağlıklı<br />

organizmayı ve hastalığı anlayabilmek, korumak veya tedavi<br />

için güvenli ve etkili yollar üretebilmektir. Bu amaçla sağlık<br />

alanında, çeşitli araştırma yöntemleri veya deneysel çalışmalar<br />

yapılmaktadır: Hücre kültürleri (in vi<strong>tr</strong>o), hayvan deneyleri<br />

(in vivo) ve klinik araştırmalar bu kategoride sayılabilir.<br />

<s<strong>tr</strong>ong>Deneysel</s<strong>tr</strong>ong> araştırmalar; bir varsayımın doğruluk durumunu<br />

denemek ya da kanıtlamak için, kon<strong>tr</strong>ol edilebilir şartlar altında,<br />

özgül yöntemler kullanılarak ölçme işlemlerinin yapılmasına<br />

dayanan, geçerli ve güvenilir verilerin üretildiği bilimsel<br />

araştırma yöntemleridir. <s<strong>tr</strong>ong>Deneysel</s<strong>tr</strong>ong> hayvan araştırmaları<br />

ise, bilimsel bilgi elde etmek amacı ile omurgalı veya<br />

omurgasız hayvanlar üzerinde yapılan/yapılacak çalışmaları<br />

ifade etmektedir. Deney hayvanları çok çeşitli alanlarda kullanılmakla<br />

birlikte en fazla; sağlık bilimleri alanında, aşılar,<br />

ilaçlar ve tıbbi malzemelerle ilgili çok sayıda biyolojik testlerde<br />

kullanılmaktadır.<br />

<s<strong>tr</strong>ong>Deneysel</s<strong>tr</strong>ong> hayvan araştırmalarının planlamasında şu hususlara<br />

dikkat edilmelidir:<br />

1. Araştırma Konusunun Belirlenmesi:<br />

Araştırma konusu belirlenirken; kurumun olanakları, hedefleri<br />

ve araştırmacının ilgisi belirleyici olmaktadır. İlk önce<br />

araştırmaya dayanak teşkil edecek problem belirlenmeli ve<br />

hedefler tanımlanmalıdır. Bunun için araştırma ile ilgili bilgiler<br />

toplanır, yayınlanmış veriler incelenir ve hala tamamen<br />

çözülmeyen/anlaşılmayan problemler esas alınır. Daha sonra<br />

bu bilgilere dayanarak varsayım/lar geliştirilir.<br />

Belirlenmiş veya geliştirilmiş bilimsel problemin yeniden ifade<br />

edilmesi, sorunun nedenini/etkisini açık ve anlaşılabilir<br />

şekilde ifade edilmesini sağlayacaktır. Bunun için;<br />

…………’nin üzerine………..’nin etkisi nedir? gibi bir kalıp cümle<br />

ile problem tanımlanabilir.<br />

İlk önce bu problemi basit bir cümle içinde ifade etmek gerekir.<br />

Problem ifade edildikten sonra değiştirebileceğimiz faktör<br />

(neden) ve etkilenebilecek faktörler (etkiler) tanımlanır.<br />

Daha sonra yukarıdaki örnekteki boşluklara; birincisine etkileri<br />

ve ikincisine nedeni koyunuz. Böylelikle araştırmada<br />

problem tanımlanmış olacaktır. Örneğin;<br />

• Problem: Kafes tasarımı laboratuvar sıçanının fizyolojik<br />

fonksiyonlarını etkilediğini göstermektedir.<br />

• Problemin yeniden ifadesi: Sıçanların vital fonksiyonları<br />

üzerine saydam kafesin etkisi nedir?<br />

• Bağımsız değişken (değiştirebileceğimiz faktör, etken): • •<br />

1 | Journal of Clinical and Analytical Medicine<br />

<s<strong>tr</strong>ong>Deneysel</s<strong>tr</strong>ong> <s<strong>tr</strong>ong>Hayvan</s<strong>tr</strong>ong> <s<strong>tr</strong>ong>Araştırmalarının</s<strong>tr</strong>ong> <s<strong>tr</strong>ong>Planlamasında</s<strong>tr</strong>ong> Dikkat Edilecek Hususlar<br />

Ensari Güneli, Mehmet Ateş, Mukaddes Gümüştekin<br />

Saydam kafes.<br />

• Bağımlı değişken (etkilenecek faktör/faktörler, sonuç): Vital<br />

fonksiyonlar.<br />

Yukarıda ifade edildiği gibi problem tanımlandıktan sonra,<br />

araştırmacı araştırma planını yazmaya hazır olmalıdır. Bu<br />

planlama bilimsel projedeki sorunu yanıtlamak için ne yapmamız<br />

ya da denememizi gösterecek şekilde tasarlanmalıdır.<br />

Bunun için desteğe ihtiyacınız olabilir. Bu amaçla danışabileceğiniz<br />

kişiler planlamanızı açık ve dikkatli bir şekilde<br />

yazmanıza yardımcı olabilir.<br />

2. Araştırma Protokolünün Hazırlanması:<br />

<s<strong>tr</strong>ong>Deneysel</s<strong>tr</strong>ong> hayvan araştırmaları maksimum düzeyde bilgi<br />

sağlayacak şekilde tasarlanmalıdır. İyi planlanmış bir deney<br />

en iyi sonuçları verecektir. Araştırmalarda sonuçların geçerliği<br />

ve güvenirliği birçok değişkene bağlı olarak değiştiği için,<br />

planlamanın iyi hesaplanmış ve kon<strong>tr</strong>ol edilmiş olması gerekir.<br />

Bu nedenle deneylerin planlanması esnasında biraz daha<br />

zaman ayırmak gerekir.<br />

<s<strong>tr</strong>ong>Deneysel</s<strong>tr</strong>ong> bir araştırmanın hazırlanmasında çeşitli adımlar/<br />

aşamalar vardır. Bu adımlar şu bilgileri içermelidir:<br />

Açıklama: Sıralama ve içerikler proje başvuru biçimlerine<br />

göre değişebilir; bilgiler kısaca açıklanmıştır.<br />

• Problem: Bağımsız ve bağımlı değişkenlerle (neden ve etkilerle)<br />

problemin ifade edilmesidir.<br />

• Bağımsız değişken: Sonucu etkileyen ve etken (neden) olduğu<br />

düşünülen faktörlere denir.<br />

• Bağımlı değişken: Etkenlerden etkilendiği düşünülen ve sonuç<br />

olan değişkenlere denir. Diğer bir deyişle deneyde bizim<br />

değiştirdiğimiz değişkene (bağımsız değişkene) bağlı olarak<br />

değişen değişkendir.<br />

• Kon<strong>tr</strong>ol: Deneyde değişmeyeceğinden emin olduğumuz faktördür.<br />

• Nicel ölçümler: Sonuçların kaydında kullanabileceğimiz<br />

standart ölçüm birimleridir. Daha iyi, daha yüksek gibi ifadelerin<br />

kullanılması bilimsel değildir.<br />

• <s<strong>tr</strong>ong>Deneysel</s<strong>tr</strong>ong> ve kon<strong>tr</strong>ol grupları: Bunlar deneydeki gruplardır.<br />

Kon<strong>tr</strong>ol grubunda tüm faktörler sabit tutulur, herhangi bir<br />

değişken yoktur. <s<strong>tr</strong>ong>Deneysel</s<strong>tr</strong>ong> grupta değişken vardır. Deneylerde<br />

genellikle sadece bir kon<strong>tr</strong>ol grubu vardır, ancak bazı<br />

durumlarda deneysel gruptan daha fazla olabilir. <s<strong>tr</strong>ong>Deneysel</s<strong>tr</strong>ong><br />

gruptaki veriler kon<strong>tr</strong>ol grubundaki verilerle karşılaştırılır. Bu<br />

gruplardaki hayvan sayısının belirlenmesinde ve deneysel<br />

planlamada istatistiksel yardım almak oldukça fayda sağlayacaktır.<br />

• Gereçler: Deneyde kullanma ihtiyacı duyduğumuz araçgereçleri<br />

ve nerede kullanmamız gerekeceğini düşündüğünüz<br />

malzemelerin listesidir.<br />

• Yöntem (Prosedür): Deneyin akışı ayrıntılı ve adım-adım<br />

sistematik bir yöntemle, basit ve açık bir şekilde belirtilmeli-<br />

Sorumlu Yazar: Ensari Güneli, Dokuz Eylül Üniversitesi, Tıp Fakültesi, Laboratuar <s<strong>tr</strong>ong>Hayvan</s<strong>tr</strong>ong>ları Bilimi AD, 35340 Balçova, İzmir, Türkiye. T.: +90 2324124652 F.: +90 2322770739 E-Mail: ensari.guneli@deu.edu.<strong>tr</strong><br />

Journal of Clinical and Analytical Medicine 5


<s<strong>tr</strong>ong>Deneysel</s<strong>tr</strong>ong> <s<strong>tr</strong>ong>Hayvan</s<strong>tr</strong>ong> <s<strong>tr</strong>ong>Araştırmalarının</s<strong>tr</strong>ong> <s<strong>tr</strong>ong>Planlamasında</s<strong>tr</strong>ong> Dikkat Edilecek Hususlar<br />

<s<strong>tr</strong>ong>Deneysel</s<strong>tr</strong>ong> <s<strong>tr</strong>ong>Hayvan</s<strong>tr</strong>ong> <s<strong>tr</strong>ong>Araştırmalarının</s<strong>tr</strong>ong> <s<strong>tr</strong>ong>Planlamasında</s<strong>tr</strong>ong> Dikkat Edilecek Hususlar<br />

dir. Örneğin, deneyde bir hayvan kullanılacaksa; hayvanın kökesaca açıklamak gerekirse;<br />

ni, türü-soyu, genetik ve mikrobiyolojik özellikleri (nomenklatür), Reduction: <s<strong>tr</strong>ong>Hayvan</s<strong>tr</strong>ong> sayısının azaltılmasıdır. Bu da araştırmalar-<br />

yaş, cinsiyet, vücut ağırlığı, barındırılması, beslenme şekli, madda en az sayıda hayvan kullanarak, en iyi sonuca varma ilkesini<br />

de uygulama yöntemi ve zamanı, biyolojik örneklerin alınma şek- ifade eder. Ancak çok az sayıda hayvanın kullanılması da uygun<br />

li ve zamanı, işlemden geçirilmesi, saklanması, model uygulan- değildir. Bundan dolayı hayvan sayısını belirlemekte kullanılan<br />

mışsa tekniği, anestezi, cerrahi ve ötenazi yöntemleri gibi konu- istatistiksel yöntemler için bu alanda uzmana danışmak gerelar<br />

eksiksiz belirtilmelidir. İstatistiksel yöntemler açıklanmalıdır. kir. Ön çalışma yapmak da hayvan sayısının belirlenmesine kat-<br />

• Hipotez: Beklenen sonuçların öngörülmesi, ifade edilmesidir. kı sağlayacaktır.<br />

Diğer bir şekilde, deneyinizle ne olacağını düşünüyorsunuz? Hi- Refinement: Araştırmada kullanılacak hayvanların yaşamlarıpotez<br />

istatistiksel olarak test edilebilir olmalıdır.<br />

nı uygun koşullarda sürdürmelerine izin verilmesidir. <s<strong>tr</strong>ong>Hayvan</s<strong>tr</strong>ong>la-<br />

• Açıklama: Bu bölümde hipotez ile ne düşünüldüğü açıklanmarın doğumlarından, deneylerde kullanımlarının sonlandırılmasılıdır.na<br />

kadar geçen süreçte gönençlerini artırmak ve sağlamaktır.<br />

Tüm bölümler, konu dışından bir yabancı tarafından okunduğu İnsanlarda ağrıya neden olan işlemlerin, diğer omurgalılarda da<br />

zaman dahi anlaşılabilir olmalıdır.<br />

ağrıya neden olabileceği araştırmacılar tarafından bilinmeli ve<br />

unutulmamalıdır. Bundan dolayı hayvanlarda minimum düzeyde<br />

ağrı duyumsaması sağlanmalıdır.<br />

Replacement: Yerine başka bir şey koyma anlamına gelir. Mümkünse<br />

omurgalı hayvanlar yerine başka şeylerin kullanılması tercih<br />

edilmelidir (bkz, alternatif modeller). Araştırmalar planlanırken<br />

filogenetik sınıflandırmada daha yüksekte yer alan hayvanlar<br />

yerine daha aşağıdaki hayvanlar seçilmelidir.<br />

Responsibility: Bu ilke kısaca kişisel sorumluluğunun arttırılmasını<br />

öngörmektedir.<br />

3. Yeterlilik:<br />

Deney hayvanları ile araştırma yapacak sorumlu kişilerin bu<br />

alanda yeterli teorik ve uygulamalı eğitim almış olmaları gerekir.<br />

Bu kişiler; yasalar, etik, ilgili hayvanlarının bakım ve biyolojisini,<br />

gönençlerini (refah) ve fizyolojik ihtiyaçlarını, tutma yöntemlerini,<br />

temel uygulamalar ve ötenazi, hastalık, s<strong>tr</strong>es ve diğer<br />

olumsuz durumları bilme, anestezi, analjezi, temel cerrahi prensipler<br />

ve deney güvenliği gibi temel bilgi ve becerilere sahip olmalıdır.<br />

Birçok ülkede hayvan kullanımı ile ilgili yasal düzenlemeler,<br />

hükümetin kon<strong>tr</strong>olü altında yetkili kurumları tarafından yürürlüğe<br />

konup uygulanmaktadır.<br />

4. Alternatif yöntemler:<br />

<s<strong>tr</strong>ong>Deneysel</s<strong>tr</strong>ong> araştırma planlanırken ilk önce canlı hayvan kullanmak<br />

gerekliliği dikkatlice düşünülmelidir. Bir hayvan kullanılacaksa,<br />

mümkünse omurgalı hayvanlar yerine alternatif yöntemler tercih<br />

edilmelidir. Eğer canlı hayvan kullanılacaksa amacı bilimsel<br />

gerekçelerle açıklanmalıdır. Örneğin;<br />

• İncelenen süreçlerin karmaşıklığı nedeniyle daha basit sistemlerde<br />

oluşturulması ve model kurulmasının olanaksızlığı,<br />

• İncelenecek sistemin, canlı olmayan modellerde taklit edilebilmesi<br />

için yeterli bilgi birikiminin olmadığı,<br />

• Preklinik çalışmalarda, insan üzerinde denenmeden önce canlı<br />

hayvan üzerinde deney yapmanın zorunluluğu,<br />

• Ve diğer sebepler gibi açıklamalar yapılmalıdır.<br />

Alternatif yöntemleri kısaca ifade etmek gerekirse; hayvan deneylerinin<br />

yerine geçen, kullanılacak hayvan sayısını azaltan,<br />

hayvanların acısını azaltacak veya hayvanların gönencini artıracak<br />

uygulamalar olarak ifade edilmektedir. Örneğin; doku ve<br />

organ kültürleri, omurgasız hayvanların kullanılması, embriyonlu<br />

yumurtanın kullanılması, bir hücrelilerin kullanılması, bilgisayar<br />

ve veri bankalarının kullanılması, matematiksel yöntemler, gönüllü<br />

insan kullanımı ve epidemiyolojik çalışmalar, eğitimde yapay<br />

modellerin ve filmlerin kullanılması gibi.<br />

<s<strong>tr</strong>ong>Deneysel</s<strong>tr</strong>ong> araştırmalarda hayvanlara alternatiflerin aranmasında<br />

Russell ve Burch tarafından tanımlanan 3R kuralı önemli katkı<br />

sağlamıştır. Bu üç ilkenin yanı sıra The International Foundation<br />

for Ethical Research (IFER) 1985 yılında hem hayvanlarda<br />

hem de insanlarda yapılacak araştırmalarda “Sorumluluk” ilkesini<br />

oluşturarak ilkeleri 4R biçiminde geliştirmiştir. Böylelikle<br />

bir araştırmacı deneysel araştırmasını planlarken 4R kuralına<br />

uymalıdır.<br />

‘‘4R’’ kuralı: İngilizce kelimeler olan; reduction, refinement, replacement<br />

ve responsibility kelimelerinin baş harfleridir. Bu kurallar<br />

hem hayvanların sağlığının korunması hem de bilimsel çalışmaların<br />

kalitesinin yükseltilmesini amaçlamaktadır. Sırasıyla kı-<br />

6 Journal of Clinical and Analytical Medicine<br />

2 | Journal of Clinical and Analytical Medicine<br />

5.<s<strong>tr</strong>ong>Hayvan</s<strong>tr</strong>ong> seçimi<br />

Deney materyalleri, araştırılacak konunun veya problemin en<br />

basit şekilde çözülebilmesine olanak verecek şekilde seçilmeli,<br />

yasal ve etik yönleri incelenmelidir. Günümüzde basit omurgalı<br />

hayvanlardan gelişmiş memeli hayvanlara kadar birçok hayvan<br />

türü deney materyali (denek) olarak kullanılmaktadır. Ancak,<br />

omurgasızların kullanımı oldukça sınırlı düzeylerde kalmaktadır.<br />

Son yıllarda bazı ilkel omurgalıların kullanımında artışlar olsa da,<br />

anatomik ve biyolojik fonksiyonları insana benzerliklerinden dolayı<br />

halen en fazla tercih edilenler memeli türleridir. Kullanımda<br />

üst grupları oluşturanları sınıflandırırsak, Dünya genelinde en<br />

fazla kullanılan deney hayvanlarının; sıçan, fare, balık ve tavşan,<br />

orta düzeyde kullanılanların ise domuz, kobay, hamster ve maymun<br />

olduğunu görürüz. Özellikle sıçan ve fare gibi küçük hayvanlar;<br />

yaşam sürelerinin kısalığı, kolay manipüle edilmeleri ve üretim<br />

kolaylığı gibi avantajlarından dolayı sık tercih edilirler. Bir<br />

dönem bazı alanlarda çok kullanılan kedi ve köpeklerin, yasalar<br />

gereği deneysel amaçlı kullanımı sınırlanmıştır. Bu hayvanlar, bu<br />

amaçla üretilmiş merkezlerde olmaları koşuluyla, deneye alınmalarına<br />

izin verilmektedir.<br />

Seçilecek hayvan hakkında bir karar verebilmek için aşağıdaki<br />

noktaları göz önünde bulundurmak gerekmektedir:<br />

a) Uygun bir hayvan seçmek için araştırmacı ilk önce ihtiyaç duyulan<br />

hayvan modelini belirlemelidir.<br />

<s<strong>tr</strong>ong>Hayvan</s<strong>tr</strong>ong> Modeli; normal biyoloji ya da davranışların çalışılabileceği,<br />

kendiliğinden ya da indüklenmiş bir patolojik durumun<br />

araştırılabileceği ve biyolojik işlev yönünden insan ya da diğer<br />

hayvan türlerine benzerlik gösteren hayvanların kullanıldığı model<br />

olarak tanımlanır. <s<strong>tr</strong>ong>Hayvan</s<strong>tr</strong>ong> modelleri her zaman gerçek durumu<br />

(hastalık, biyolojik gibi) tam olarak yansıtmaz, sadece yaklaşık<br />

bir sonuç-fikir verir. Diğer bir deyişle geniş anlamda, deneysel<br />

bilim yaklaşık bilgi edinme çalışmalarıdır.<br />

Bu modeller şunlardır:<br />

• İndüklenmiş model: Cerrahi ya da çeşitli ajanlarla hayvanlarda,<br />

hedef organizmada görülenlere benzer hastalık veya bozukluk<br />

oluşturulmasıdır. En fazla kullanılan modeldir. Örneğin, <strong>tr</strong>ansgenik<br />

fare üretimi, karbon te<strong>tr</strong>aklorür (CCl4) ile karaciğer yetmez-


<s<strong>tr</strong>ong>Deneysel</s<strong>tr</strong>ong> <s<strong>tr</strong>ong>Hayvan</s<strong>tr</strong>ong> <s<strong>tr</strong>ong>Araştırmalarının</s<strong>tr</strong>ong> <s<strong>tr</strong>ong>Planlamasında</s<strong>tr</strong>ong> Dikkat Edilecek Hususlar<br />

liği, s<strong>tr</strong>eptozotosin ile diyabetik sıçan oluşturmak gibi. Etiyolojisi<br />

bilinen hastalıklarda faydalı olmakla birlikte, hastalık birçok<br />

nedene ya da bilinmeyen faktörlere bağlı ise hayvanlarda bu tür<br />

hastalıkları taklit etmek zor olabilmektedir.<br />

• Spontan model: Genetik olarak kendiliğinden oluşan ve insanlardaki<br />

hastalığa benzer mekanizmalar gelişen modeldir. Örneğin,<br />

spontan diabetik kemirgen modellerindeki patoloji ve belirtiler<br />

insanlara benzer.<br />

• Negatif model: Belirli bir hastalığın kesinlikle gelişmediği hayvan<br />

türü, ırkı veya soylarıdır. Örneğin, tavşanda gonokok infeksiyonu<br />

gelişmez.<br />

• Olası modeller (Orphan modeller); Bazı hastalıklar öncelikle<br />

hayvanlarda tanımlanmış, daha sonra insanlarda benzeri tanımlanabilir<br />

amacı ile çalışılan modellerdir. Örneğin, marek ve deli<br />

dana hastalığı gibi. Eğer benzer bir hastalık insanlarda görülürse<br />

model adapte edilir.<br />

Araştırmanın planlamasında hangi modelin mümkün ve gerçekçi<br />

olduğu belirlenmelidir. Spesifik araştırma modellerini inceleyen<br />

çok sayıda kitap ve geniş bir hayvan modeli listesi vardır.<br />

Uygun bir model bulunmadığı zaman yeni bir modelin geliştirilmesi<br />

gerekebilir; ancak, yeni bir model geliştirmek oldukça zaman<br />

alıcı bir süreçtir.<br />

b) <s<strong>tr</strong>ong>Hayvan</s<strong>tr</strong>ong> türünün belirlenmesi için daha önce benzeri yapılan<br />

çalışmalar incelenmeli, literatür araştırması yapılmalıdır.<br />

Birçok araştırmacı hayvan seçimini daha önce yapılan benzer<br />

araştırmalarda kullanılmış hayvan türüne göre yapar. Daha önce<br />

elde edilen verilerle karşılaştırma yapmayı olanaklı kılan geniş<br />

veritabanları bulunması hayvan türünün belirlenmesinde avantaj<br />

sağlayacaktır. Özellikle fare ve sıçan gibi sık ve çok kullanılan<br />

laboratuvar hayvanları bu açıdan kolaylık sağlamaktadır. Ancak<br />

araştırmalarda kullanılan hayvan türü mevcut koşullarda bulunmayabilir<br />

veya temin edilse bile laboratuvar koşulları uygun<br />

olmayabilir. Bundan dolayı benzer hayvan modelinin diğer hayvan<br />

türlerinde uygun olup olmayacağı araştırılmalıdır. Çalışmalar<br />

için en uygun hayvanın seçiminin önemi ile ilgili en iyi örnek<br />

vasküler restenoz (damarın tekrar daralması) çalışmalarıdır. Domuz<br />

ve maymunda anjiyoplasti sonrası “restenoz” ile ilgili sonuçlar,<br />

küçük hayvanlardan elde edilen verilere kıyasla insandakine<br />

daha yakındır.<br />

c) Çalışmada kullanılacak gereçler için lojistik desteğin listesi<br />

hazırlanmalıdır.<br />

– <s<strong>tr</strong>ong>Hayvan</s<strong>tr</strong>ong> barınakları<br />

Barındırma; hayvanın gönencini, araştırma sonuçlarının kalitesini,<br />

personelin güvenliğini ve sağlığını etkiler. Günümüzde laboratuvar<br />

hayvanı üretimi yapan birçok kuruluşta, bazı hususlara<br />

gereksinim duyulmayabilir, ancak araştırmacının mevcut barınma<br />

ve bakım koşullarını bilmesi fayda sağlayacaktır. Unutulmamalıdır<br />

ki, hayvan üretim tesisleri optimum kalitenin altında olsa<br />

dahi, iyi eğitilmiş ve motive personelin hayvanların yaşam koşullarında<br />

yüksek kalite sağladığı bilinmektedir.<br />

Kafesler; hayvanların kaçmasına engel olacak şekilde muhafazalı<br />

ve boyutları türe uygun olmalıdır. <s<strong>tr</strong>ong>Hayvan</s<strong>tr</strong>ong>ın türüne ve yaşına<br />

göre rahat edeceği kafes alanı ve yüksekliği sağlamak zorunluluktur.<br />

Kafes içi değişiklikler hayvanların fizyolojik, metabolik işlevlerini<br />

değiştirebilir, hastalıklara duyarlılaştırabilir. Dolaysıyla,<br />

araştırmacı hayvanlarını kafeslerken; tür, suş, yavrulama, bireysel<br />

özellikler (cinsiyet, yaş, davranış, sağlık.), sosyal formu (tek<br />

veya grup şeklinde barındırma), barınacak alanın zenginliği gibi<br />

faktörlere dikkat etmelidir.<br />

Farklı bir merkezden veya kaynağı bilinmeyen bir üretim yerinden<br />

getirilen hayvanların, hastalık taşıyıp taşımadığı incelenmelidir.<br />

Bu amaçla araştırma yapılacak alanda hayvanların gözet-<br />

3<br />

| Journal of Clinical and Analytical Medicine<br />

<s<strong>tr</strong>ong>Deneysel</s<strong>tr</strong>ong> <s<strong>tr</strong>ong>Hayvan</s<strong>tr</strong>ong> <s<strong>tr</strong>ong>Araştırmalarının</s<strong>tr</strong>ong> <s<strong>tr</strong>ong>Planlamasında</s<strong>tr</strong>ong> Dikkat Edilecek Hususlar<br />

lenmesine olanak sağlayacak karantina alanı bulunmalıdır.<br />

<s<strong>tr</strong>ong>Hayvan</s<strong>tr</strong>ong>ın bulunduğu ortamda hijyenik koşullar, havalandırma,<br />

ısı, nisbî nem, gürültü, ışık gibi barınma faktörleri türlere özgüleştirilmiş<br />

olmalıdır. Bu koşullara uygun davranılmadığı takdirde<br />

hem hayvanların sağlığı bozulacak, hem de deney sonuçları farklı<br />

olacaktır. Örneğin, havalandırma ve ısıtma sorunları ile hayvanlarda<br />

ciddi akciğer problemleri ortaya çıkabilir. Ayrıca farklı<br />

yerlerde yapılan benzer çalışma sonuçları da farklı olacaktır.<br />

<s<strong>tr</strong>ong>Hayvan</s<strong>tr</strong>ong>ların genellikle 30ºC ‘nin yukarısında ve 5 ºC nin altındaki<br />

sıcaklığa koruyucu mekanizmalar olmaksızın maruz kalması<br />

klinik etkiler yapabilir ve hayatı tehdit edebilir. <s<strong>tr</strong>ong>Hayvan</s<strong>tr</strong>ong>lar davranışsal,<br />

fizyolojik ve morfolojik mekanizmalarla bu sapmalara<br />

uyum sağlayabilir. Fakat böyle adaptasyonlar zaman alır ve performansı<br />

etkileyebildiği gibi sonucu da değiştirebilir. Sıcaklık değişimleri<br />

hayvanların; ilaca yanıtını, infeksiyonlara olan duyarlılıklarını,<br />

üremesini, yem ve su tüketimini, büyümesini, hematolojik<br />

parame<strong>tr</strong>elerini,..değiştirir.<br />

Laboratuvar hayvanlarının çoğu albino oldukları için, aşırı ışık<br />

katarakt ve s<strong>tr</strong>es gelişmesine neden olabilir. Bu nedenle, albino<br />

hayvanların bulunduğu odaların ışıkları çok parlak olmamalıdır.<br />

Dikkat edilmesi gereken önemli koşullardan biri de hayvanların<br />

bulunduğu odalarda gürültü 85 dB’den düşük olmalıdır. Özellikle<br />

gebe ve yeni doğurmuş hayvanlar, gürültüden rahatsız olup yavrularına<br />

zarar verebilirler. Ayrıca gürültünün oluşturacağı s<strong>tr</strong>es<br />

faktörleri de deney sonuçlarını olumsuz etkileyebilir. Örneğin,<br />

sürekli s<strong>tr</strong>es altında kalan sıçanlarda böbreküstü bezi hiperplazisi<br />

saptanmıştır.<br />

İnsan, diğer türler, kafes içindeki türdeşler, koku, zemindeki materyaller<br />

gibi faktörler hayvanın durumunu etkiler. Bundan dolayı<br />

çevresel faktörler standart hale getirilmeli ve sabit tutulmalıdır.<br />

– Teknisyenler<br />

Teknisyenler deneysel bölümün konforlu, etkin gerçekleşmesinde<br />

önemli rol oynayan personellerdir. Bu kişilerin görevleri; hayvanlara<br />

karşı iyi davranma, kuralına uygun tutma, operasyona<br />

hazırlama, ilaç uygulama, vücut sıvılarını toplama, davranışlarını<br />

inceleme, anestezi uygulama, aseptik bir operasyona yardımcı<br />

olma gibi tanımlanmıştır. Örneğin, bir teknisyen herhangi bir<br />

ilaç uygulamadan önce; hayvanın ve ilacın doğruluğunu, ilacın<br />

dozunu, uygulama yolu ve zamanının doğruluğunu ve ilacın son<br />

kullanma tarihini kon<strong>tr</strong>ol etmelidir. Bunlardan kaynaklanacak bir<br />

hata hayvana zarar verebilir, yanlış sonuca neden olabilir. Eğer<br />

araştırmacı bu uygulamaları kendi yapacaksa kon<strong>tr</strong>olleri benzer<br />

şekilde yapmalıdır.<br />

– Maliyet<br />

<s<strong>tr</strong>ong>Hayvan</s<strong>tr</strong>ong>ın boyutları küçüldükçe bakım ve satın alma maliyeti az<br />

olmaktadır. Operasyondan sonra hayvan uzun süre yaşatılacaksa<br />

bakım masrafları da yüksek olacaktır. Projeler hazırlanırken<br />

bu unsurlar göz önünde tutularak, maliyet hesaplamaları yapılmalıdır.<br />

– Beslenme<br />

Deney hayvanı seçerken; beslenme özellikleri iyi bilinen ve dengeli<br />

beslenmeleri için ticari yem bulunabilecek hayvanların seçilmesi<br />

tavsiye edilmektedir. Kaliteli yem ve içme suyu temin edilmelidir.<br />

Nadir bulunan türler seçildiği zaman beslenme problem<br />

yaratabilir.<br />

– <s<strong>tr</strong>ong>Hayvan</s<strong>tr</strong>ong> temini<br />

Araştırmayı planlarken hayvan temininde harcanacak süre göz<br />

önüne alınmalıdır. Bu süre hayvanın niteliği ve sayısı ile değişmektedir.<br />

Bazı türleri (maymun gibi) veya özellikli hayvanları<br />

(<strong>tr</strong>angenik, SPF hayvanlar gibi) mevcut koşullarda bulmak zor<br />

olabilir. Ülkemizde fare, sıçan, tavşan ve kobay gibi yaygın ve<br />

konvansiyonel olarak yetiştirilen hayvanların temininde genel-<br />

Journal of Clinical and Analytical Medicine 7


<s<strong>tr</strong>ong>Deneysel</s<strong>tr</strong>ong> <s<strong>tr</strong>ong>Hayvan</s<strong>tr</strong>ong> <s<strong>tr</strong>ong>Araştırmalarının</s<strong>tr</strong>ong> <s<strong>tr</strong>ong>Planlamasında</s<strong>tr</strong>ong> Dikkat Edilecek Hususlar<br />

<s<strong>tr</strong>ong>Deneysel</s<strong>tr</strong>ong> <s<strong>tr</strong>ong>Hayvan</s<strong>tr</strong>ong> <s<strong>tr</strong>ong>Araştırmalarının</s<strong>tr</strong>ong> <s<strong>tr</strong>ong>Planlamasında</s<strong>tr</strong>ong> Dikkat Edilecek Hususlar<br />

likle bir sorun yaşanmaz. Bu hayvanlar genellikle araştırmaların kalitatif ve kantitatif uyarlanabilirliğine, yani uygun olup olma-<br />

yapıldığı kurumlarda yetiştirilir veya ticari hayvan yetiştiriciliği dığına dikkat edilmelidir. Zira hayvan deneylerindeki ‘’hayvan-<br />

yapan firmalardan satın alınabilir. Kayıtsız, belgesiz veya çevrelardan insanlara uyarlama’’ kavramı halen anlaşılmazlığını koden<br />

toplanan hayvanlar deneylerde kullanılamaz. Özellikle dışarumaktadır. Bazı bilim adamlarına göre hayvan deneyleri sonuçrıdan<br />

getirilecek hayvanlar sağlık durumları incelenmelidir. Sağları insanlara uyarlanabilirliği söylenmektedir. Örneğin bir ilalık<br />

durumu iyi olmayan hayvanlar deneylerde kesinlikle kullanılcın sıçan ve köpekte zararsız olması insanlarda da zararsız olmamalıdır.ması<br />

gibi. Bazı bilim adamları ise, özellikle hayvan karşıtı olan-<br />

<s<strong>tr</strong>ong>Hayvan</s<strong>tr</strong>ong>ların nakledilmelerinde; kafes niteliği ve boyutu, yöntemi, lar, hayvan deneylerinden elde edilen sonuçların yanıltıcı olduğu-<br />

yiyecek desteği gibi hususlara da dikkat edilmelidir.<br />

nu savunmaktadır. Örneğin, kobaylarda penisilinin öldürücü ol-<br />

d) Malzeme listesinin hazırlanması<br />

ması gibi. İnvi<strong>tr</strong>o yöntemlerle elde edilen sonuçların hayvanlara<br />

Türlerin seçimi<br />

ve insanlara uyarlamak çok daha zordur. Bu nedenlerle bu uyar-<br />

<s<strong>tr</strong>ong>Deneysel</s<strong>tr</strong>ong> araştırmalarında hayvan seçiminde tür ve soy bazında lamaların yapılmasına, açıklanmasına gerek yoktur. Sonuçların<br />

düşünmek gerekir. Çünkü her araştırmayı her hayvan türünde ya bir türden diğer türe aktarılmasında sadece homologunun se-<br />

da soyunda yapmak mümkün olmayabilir. Bu nedenle, çalışmaçilmesi ile olmamaktadır. Birden çok tür yaklaşımında da buluya<br />

başlamadan önce hangi hayvan türünün, hatta o türün içinnulmalıdır. Örneğin, toksikolojik çalışmalarda araştırılacak etkedeki<br />

hangi soyun çalışmaya en uygun olduğu saptanmalıdır. Senin kemirgen olmayan iki türde de (kedi ve köpek gibi) incelençilecek<br />

tür, insandaki durumu taklit etmek için çok uygun bir momesi gerekir.<br />

del oluşturmalıdır. Temin edilebileceği görüldükten sonra çalış- Uyarlamada türler arasında metabolik yapı ve hız uyumlu olmama<br />

projesi sunulmalıdır.<br />

lıdır. Örneğin kemirgenlerde metabolizma insanlardan oldukça<br />

hızlıdır. Metabolizmanın kon<strong>tr</strong>olü ve işleyişi vücut büyüdükçe<br />

azalır, ilaç dozları da buna göre hesaplanır.<br />

Türe özgü şu parame<strong>tr</strong>eler incelenmelidir:<br />

Fizyolojik özellikler; yaşam alanları, nabız ve soluk sayısı, toplam<br />

kan miktarları, deney süresince öldürmeden alınabilen kan miktarı<br />

ve bölgeleri, kan parame<strong>tr</strong>e özellikleri (biyokimyası gibi), injeksiyon<br />

bölgesi ve o bölgelere verilebilecek maksimum madde<br />

volümü, çıkardığı idrar miktarı, günlük içtiği su miktarı, dışkı<br />

özelliği, biyoloji ve üreme fonksiyonlarının iyi bilinmesi gerekir.<br />

<s<strong>tr</strong>ong>Hayvan</s<strong>tr</strong>ong>ların yaşam şekilleri ve davranışları dikkate alınmalıdır.<br />

Anatomik özellikler; yapılacak çalışmaya anatomik yapı olarak<br />

uygunluk, hayvan büyüklüğü, organ yapısı ve modele uygunluk,<br />

türler arası anatomik farklılıklar, özel anatomik eksiklerden faydalanma<br />

(sıçanda safra kesesi olmaması) gibi özellikler incelenmelidir.<br />

Küçük hayvanların; maliyeti, tutulmaları, bakım ve barındırma,<br />

üretim kolaylıkları açısından birçok avantajları vardır. Büyük<br />

hayvanlar ise cerrahi teknikler, i.v. injeksiyon, kan alma, örnek<br />

alma gibi durumlarda avantaj sağlamaktadır.<br />

<s<strong>tr</strong>ong>Hayvan</s<strong>tr</strong>ong> Tipinin Belirlenmesi<br />

Genetik homojenitesi yüksek olan hayvanların seçilmesi (inbred);<br />

büyüme hızı, vücut ağırlığı ve biyolojik özellikler açısından daha<br />

birörnektir. Eğer bir araştırmada inbred hayvanlar kullanılırsa,<br />

denekler arası bireysel farklılıklar azalacağı için ölçülen veriler<br />

benzer yakınlıkta olacaktır. Bu özellik deneyde daha az hayvan<br />

kullanmamızı sağlayacak, istatistiksel açıdan da sorun yaratmayacaktır.<br />

Ancak bazı deneysel araştırmalarda, toksisite testlerinde<br />

olduğu gibi, belirli derecede genetik farklılığın olması istenir<br />

(outbred).<br />

Belirlenen her gruba özgü yaş ve cinsiyetleri (erkek ya da dişi)<br />

benzer olan hayvanlar seçilmelidir.<br />

Bizı durumlarda enzim noksanlığı, immün yetersizliği olan ya da<br />

dalağı, timusu, tiroidi, hipofizi alınmış ya da diabetik hayvanlara<br />

gereksinim duyulabilir ve seçilebilir.<br />

Cerrahi girişimler için seçilecek bir hayvanda; operasyona uygun<br />

olması, büyük hayvanlar için mevcut olan cerrahi tekniklerin<br />

küçük hayvanlara uygulanabilmesi, ya da hayvana sürekli kanül<br />

takılabilmesi, NMR, radyografi, anjiografi, teleme<strong>tr</strong>i (nabız, kan<br />

basıncı, EKG, vücut ısısı, lokomotor aktivite gibi) gibi deney izleme<br />

yollarına uygun olması, uzun sürebilecek genel anesteziye<br />

dayanabilmesi gibi özellikler değerlendirilmeli ve seçilen hayvanın<br />

uygunluğunu belirlemek için ön çalışma yapılması gereklidir.<br />

Seçilecek türlerle elde edilecek verilerin (sonuçların), insanlara<br />

8 Journal of Clinical and Analytical Medicine<br />

4 | Journal of Clinical and Analytical Medicine<br />

Bazı türlerin en fazla kullanıldığı araştırma alanları:<br />

Fare: Kanser, antikor, ilaç, aşı…<br />

Sıçan (rat): Temel tıp, ilaç, gıda, davranış, toksisite…<br />

Kobay (guinea-pig): Duyarlılık, aşı, immünoloji, otoloji, diyet…<br />

Tavşan: Toksisite, antiserum üretimi, göz ve deri irritasyon testleri,<br />

damar sertliği…<br />

Hamster: Tümör, kan dolaşımı, üreme ve fötüs bozuklukları, bazı<br />

deneysel enfeksiyonlara (leptospiroz, influenza, köpek gençlik<br />

hastalığı) duyarlık, hipotermi (kış uykusuna yatar)…<br />

Gerbil: Epilepsi, kolesterol metabolizması ve damar sertliği, obezite,<br />

filarya, beyin infarktüsleri…<br />

Kedi: İlaç geliştirmesinde, kalp-damar hastalıkları, nöroloji…<br />

Köpek: Aşı ve ilaç testleri, cerrahi tekniklerin geliştirilmesi, kalpdamar<br />

hastalıkları…<br />

Domuz:, Deri, pankreas, gas<strong>tr</strong>ointestinal sistem, kardiyovasküler<br />

sistem, iskelet gibi pek çok organları insanlarınkine benzerlik<br />

gösterir. Aşı, gıda…<br />

Koyun ve keçi: Antikor geliştirme, cerrahi tekniklerin geliştirilmesi…<br />

Maymun: Aşı ve ilaç, davranış, insanlara özgü enfeksiyon hastalıkları…<br />

Kanatlılar (tavuk, güvercin, bıldırcın): Tavuklar; genellikle beslenme,<br />

aşılama, bağışıklık, embriyoloji ve toksikoloji, güvercin ve<br />

kumrular; fizyoloji ve davranış, farmakokinetik ve toksikoloji,<br />

Soğukkanlı omurgalılar: Sürüngenler zooloji ve karşılaştırmalı<br />

çalışmalarda, amfibiler organ gelişimi ve moleküler genetik, balıklar<br />

çevre kirliliği ve genetik araştırmalarında kullanılırlar.<br />

6. <s<strong>tr</strong>ong>Hayvan</s<strong>tr</strong>ong> deneylerinin standartlaştırılması:<br />

Standartlaşma bir deneyden elde edilen verilerin ortalamasının,<br />

deney tekrarlandığında benzer yakınlıkta olmasını amaçlar. Dolayısıyla,<br />

hayvan deneylerinin standartlaştırılması; deneyde kullanılacak<br />

hayvanların, çevresel ve deneysel koşullarının sabit tutulması<br />

veya kon<strong>tr</strong>ol altına alınması anlamına gelir. Standartlaşmada<br />

metabolizmayı etkileyen değişkenler kon<strong>tr</strong>ol edilmelidir.<br />

Bunlar arasında beslenme şekilleri, cins, yaş, madde uygulama<br />

yolu-zamanı-miktarı, örnek alma yolu-hacmi-zamanı, mevsim,<br />

biyoloji gibi birçok özellik sayılabilir.<br />

Standartlaştırma aynı zamanda deneyde kullanılacak hayvanların<br />

ölçülebilir parame<strong>tr</strong>eleri arasındaki varyasyonu azaltacağı


<s<strong>tr</strong>ong>Deneysel</s<strong>tr</strong>ong> <s<strong>tr</strong>ong>Hayvan</s<strong>tr</strong>ong> <s<strong>tr</strong>ong>Araştırmalarının</s<strong>tr</strong>ong> <s<strong>tr</strong>ong>Planlamasında</s<strong>tr</strong>ong> Dikkat Edilecek Hususlar<br />

için daha az sayıda hayvan kullanımı sağlar. Beslenmenin standardizasyonu<br />

(yemler ve yemleme şekli gibi), genetik olarak birörnek<br />

hayvanların kullanılması (inbred), mikrobiyolojik kalitenin<br />

sağlanması (kontaminasyonların etkisini en aza indirmek veya<br />

tamamen ortadan kaldırmak için, spesifik patojen free, gnotobiyotik<br />

veya germfree hayvan üretim teknikleri) ve hayvanların<br />

çevresel ortamın standardizasyonu önemlidir.<br />

Mikrobiyolojik durumları birbirinden farklı hayvanların fizyolojileri<br />

ve çeşitli etkenlere karşı yanıtları farklı olacaktır. Örneğin,<br />

bazı patojenlerden arındırılmış (SPF) fareler ile geleneksel yetiştirilmiş<br />

farelerin bir maddeye karşı yanıtı bu özellikten dolayı<br />

farklı olabilir.<br />

Araştırmacı, bakıcı ve diğer personellerin tutum ve davranışları<br />

da hayvanları etkilediği için, bunlar sonuçlara deney dışı faktörler<br />

olarak yansımaktadır.<br />

Kısacası hayvanların refahını bozan her faktör deney sonuçlarını<br />

etkilemektedir. Bundan dolayı belirlenen standartların sağlanması<br />

ve sürdürülmesi etik, araştırma sonuçları, finans ve işgücü<br />

açısından oldukça önemlidir.<br />

Kaynaklar<br />

1. Altuğ T. Biyolojik Araştırmalarda Deney <s<strong>tr</strong>ong>Hayvan</s<strong>tr</strong>ong>ı Kullanılmasının Ana İlkeleri. II.<br />

Ulusal Moleküler Biyoloji ve Genetik Öğrenci Kış Okulu Kitabı, Mart 2005, İstanbul,<br />

s. 97-101<br />

2. Altuğ T. <s<strong>tr</strong>ong>Hayvan</s<strong>tr</strong>ong> Deneyleri Etiği. Türk Tıp Dizini. Sağlık Bilimlerinde Süreli Yayıncılık<br />

2009 7.Ulusal Sempozyum Bildirileri. S.53-68<br />

http://www.ulakbim.gov.<strong>tr</strong>/cabim/vt/uvt/tip/sempozyum7/altug.pdf<br />

3. Dokuz Eylül Üniversitesi [homepage on the Internet]. Dokuz Eylül Üniversitesi<br />

<s<strong>tr</strong>ong>Hayvan</s<strong>tr</strong>ong> Deneyleri Yerel Etik Kurulu.<br />

http://www.deu.edu.<strong>tr</strong>/DEUWeb/Icerik/Icerik.php?KOD=6664<br />

4. Dikensoy O. Neden <s<strong>tr</strong>ong>Deneysel</s<strong>tr</strong>ong> Araştırmalar? Ülkemizde <s<strong>tr</strong>ong>Deneysel</s<strong>tr</strong>ong> Araştırmalarda<br />

Mevcut Durum. Türk Toraks Derneği 13. Yıllık Kongre, 5-9 Mayıs 2010, İstanbul.<br />

5. Hughes HC, Lang CM. Basic Principles İn Selecting Animal Species For Research<br />

Project. Clınıcal Toxıcology. 1978;13; 611-621.<br />

6. Kaya M. <s<strong>tr</strong>ong>Hayvan</s<strong>tr</strong>ong> çalışmalarında planlama ve uygun model ve denek seçimi nasıl<br />

yapılmalı? Türk Toraks Derneği 13. Yıllık Kongre, 5-9 Mayıs 2010, İstanbul.<br />

7. Lipman NS, and Perkins SE. Factors That May Influence Animal Research. Fox<br />

JG, Anderson LC, Loew FM, Quimby FW. Editors, Laboratory Animal Medicine, Second<br />

Edition, London: Academic Press, 2002. p. 1143-1165.<br />

8. Planning the Experiment. nefrsef.org [homepage on the Internet]. Northeast Florida<br />

Regional Science and Engineering Fair, Inc; c2005 Available from: http://www.<br />

nefrsef.org/students/plan.html<br />

9. Poyraz Ö. Laboratuar <s<strong>tr</strong>ong>Hayvan</s<strong>tr</strong>ong>ları Bilimi. Kardelen Ofset Ankara, 2000.<br />

10. Quimby FW. Animal Models in Biomedical Research. Fox JG, Anderson LC, Loew<br />

FM, Quimby FW. Editors, Laboratory Animal Medicine, Second Edition, London:<br />

Academic Press, 2002. p. 1185-1214.<br />

11. Russell. WMS, Burch RL.. The Principles of Humane experimental Technique.<br />

London: Methuen. 1959<br />

12. Utkan NZ, Cantürk NZ. Deney hayvanlarının ve deney modellerinin seçimi. In;<br />

Cantürk ZF, Sayek İ, Editörler. Cerrahi Araştırma “Araştırma planlama, Değerlendirme<br />

ve sunum, Deney hayvanları, Özgül deneysel modeller”. Birinci basım. İstanbul:<br />

Nobel Tıp Basımevi, 2005. s. 125-129.<br />

13. von Zutphen LFM, Baumans V, Beynen AC. Laboratuvar <s<strong>tr</strong>ong>Hayvan</s<strong>tr</strong>ong>ları Biliminin<br />

Temel İlkeleri. Çeviri Editörü. Tayfun İde, Medipres Ankara 2003.<br />

14. Yavru N, Yavru S. Deney <s<strong>tr</strong>ong>Hayvan</s<strong>tr</strong>ong>ları. Konya: Selçuk Üniversitesi Veteriner Fakültesi<br />

Yayını; 1996.<br />

15. Yeğen BÇ, Gören Z. Biyomedikal Araştırmalarda Deney <s<strong>tr</strong>ong>Hayvan</s<strong>tr</strong>ong>ı “Temel Bilgiler<br />

ve Etik İlkeler” Yüce Yayım Tavaslı Matbaası, İstanbul, 2005.<br />

5<br />

| Journal of Clinical and Analytical Medicine<br />

<s<strong>tr</strong>ong>Deneysel</s<strong>tr</strong>ong> <s<strong>tr</strong>ong>Hayvan</s<strong>tr</strong>ong> <s<strong>tr</strong>ong>Araştırmalarının</s<strong>tr</strong>ong> <s<strong>tr</strong>ong>Planlamasında</s<strong>tr</strong>ong> Dikkat Edilecek Hususlar<br />

Journal of Clinical and Analytical Medicine 9

Hooray! Your file is uploaded and ready to be published.

Saved successfully!

Ooh no, something went wrong!