Повний текст (PDF) - Ivan Franko National University of L'viv

ВПЛИВ МУТАГЕНІВ НА АНТИБІОТИЧНУ АКТИВНІСТЬ ... 17
Номер
дослі-
ду
Кількість
клонів N
Антибіотична активність штаму S. nogalater IMET43360
на різних агаризованих середовищах
Середнє
значення
ІП, М±m
Частка “плюс“варіантів,
%
Частка “мінус“варіантів,
%
Таблиця 1
Коефіцієнт
варіації CV,
%
1 130 3,3±0,2 0 0 21,2
2 96 3,9±0,3 0 0 20,5
3 89 4,1±0,4 1,2 2,3 31,7
4 112 2,4±0,2 0 3,6 20,8
5 90 3,6±0,3 2,2 1,2 25,0
7 91 4,4±0,4 1,1 4,4 31,8
9 124 4,9±0,5 4,1 1,6 26,5
14 132 5,6±0,7 4,5 2,3 26,8
Примітка. рН середовищ 7,5-8,0. Склад середовищ, г: №1: вівсяна крупа – 40, глюкоза – 10, агар –
15; №2: вівсяна крупа – 40, кукурудзяне борошно – 20, NaCl – 5, глюкоза – 10, агар – 15; №3: кукурудзяна
крупа – 20, NaCl – 5, глюкоза – 10, агар – 15; №4: курудзяна крупа – 20, триптозний
агар – 40; №5: кукурудзяна крупа – 40, триптозний агар – 40, глюкоза – 10; №7: курудзяна крупа –
20, пептон – 4, NaCl – 5, агар – 15; №9: соєва крупа – 40, триптозний агар – 40, глюкоза – 10, агар
– 15; №14: соєва крупа – 20, NaCl – 5, глюкоза – 10, агар – 15. В усіх середовихах вода водопровідна
– до 1 л.
шляхом інкубації спорової суспензії з мутагеном у концентраціях від 3 до 10 мг/мл протягом
10–30 хв. Дію мутагену припиняли відмиванням спор від НГ у цьому ж буфері
(рН 7). Спори досліджуваного штаму обробляли ультрафіолетовими (УФ) променями з
довжиною хвилі 260–280 нм. Джерелом УФ-променів була лампа Medicor BLM-12. Тривалість
обробки коливалася від 10 до 100 с. Антибіотичну активність окремих клонів на
різних поживних середовищах визначали за індексом продуктивності (ІП) – відношенням
діаметра зони пригнічення росту тест-культури до діаметра колоній за допомогою тесткультури
Sarcina lutea. Антибіотик екстрагували з агаризованого середовища за допомогою
суміші хлороформ:ацетон (2:1) протягом 24 год. Із середовища з шестиденною культурою
вирізали агарові блоки діаметром 10 мм, висотою 5 мм, подрібнювали й екстрагували
з них антибіотик у пробірках фірми Eppendorf (Німеччина) об’ємом 1,5 мл. Екстракт
переносили в нові пробірки, висушували і розчиняли в 100 мкл етанолу. Кількісно антибіотик
в екстрактах визначали спектроскопічно при довжині хвилі 480 нм за допомогою
заздалегідь побудованої калібрувальної кривої.
Рівень антибіотичної активності актиноміцетів значно залежить від складу поживних
середовищ, на яких їх вирощують [6, 9]. Перший етап роботи був присвячений підбору
таких середовищ, на яких би штам S. nogalater IMET 43 360 добре ріс і виявляв високий
рівень антибіотичної активності. Для цього ми модифікували типові склади середовищ
[6] і розробили вісім повноцінних середовищ на основі вівсяних, кукурудзяних і соєвих
круп (див. табл. 1). Ці крупи відрізняються між собою за вмістом білків, вуглеводів і
мінеральних речовин (калій, кальцій, фосфор та ін.) [6]. Зокрема, соєва крупа містить
утричі більше білка (34,9 г/100 г), який слугує джерелом азоту, ніж кукурудзяна чи вівсяна
крупи. Також у цій крупі вдвічі більше фосфору, та більше в шість разів кальцію. Калію
соєва крупа містить у чотири рази більше, ніж вівсяна і в п’ять разів більше ніж кукурудзяна
крупи. Натомість вівсяна крупа містить майже в п’ять (48,5 г/100 г), а кукурудзяна
– у сім разів (70,4 г/100 г) більше крохмалю (джерело вуглецю), ніж соєва крупа. Сере-