Повний текст (PDF) - Ivan Franko National University of L'viv

More documents

Recommendations

Info

ВПЛИВ МУТАГЕНІВ НА АНТИБІОТИЧНУ АКТИВНІСТЬ ... 19 Отже, для вирощування штаму S. nogalater IMET 43 360 у наступних експериментах ми використали соєве середовище № 14 (СС-14), на якому він виявив найвищу антибіотичну активність. Для отримання спор цей штам вирощували на мінімальному середовищі (МС). Ми дослідили вплив УФ і НГ – мутагенів, які спричинюють виникнення широкого спектра мутацій в актиноміцетів, на виживання штаму S. nogalater IMET 43 360. Близько 50% спор штаму S. nogalater IMET 43 360 гинуло лише після 40 с опромінення УФ (рис. 1). Збільшення часу опромінення на кожні 10 с поступово й незначно знижувало його виживання, а після 90 і 100 с обробки виживало близько 1,2 і 0,4% спор цього штаму, відповідно. Для обробки штаму 43 360 ми використали 3–10 мг/мл НГ. Термін обробки становив 10–30 хв (рис. 2). Після 10 хв обробки НГ в концентрації 3 мг/мл виживання спор штаму знижувалося майже на 50%. Збільшення часу обробки до 20–30 хв знижувало виживання культури до 44,0 і 27,3%, відповідно. Подальше підвищення концентрації мутагену також знижувало виживання спор штаму незначно. Найвища доза НГ, яку ми використали у роботі (10 мг/мл; 30 хв), спричинювала 14,5% виживання. В літературі описані оптимальні дози мутагенів для пошуку різноманітних мутантів у бактерій [7]. УФ ефективний у дозах, які знижують виживання культури до 0,1– 1,0%. Натомість НГ індукує високу частоту мутацій у таких дозах, за яких виживання знижується до 10–50%. Такими дозами УФ для штаму 43360 було опромінення протягом 90 і 100 с, за якого виживало 1,2 і 0,4% спор, відповідно. У випадку НГ усі перевірені нами дози можна використати для пошуку мутантів, оскільки виживання за них становило 14,5–54,1%. Отримані дані свідчать про значно вищий рівень стійкості S. nogalater до НГ і УФ порівняно з раніше нами вивченими штамами S. globisporus, S. peucetius subsp. caesius [5], S. kanamyceticus [2]. Ми дослідили зміни антибіотичної активності штаму 43 360 після опромінення УФ протягом 90 і 100 с (табл. 2). За 100% брали середнє значення антибіотичної активності клонів вихідного штаму, неопроміненого УФ, що виросли на середовищі СС-14. Серед 342 клонів штаму 43360 виявили 2,6% “плюс“- і 1,2% “мінус“-варіантів. Коефіцієнт варі- lg % виживання 2,0 1,5 1,0 0,5 -0,5 0 0 20 40 60 80 100 -1,0 Час обробки, с Рис. 1. Вплив обробки УФ на виживання спор штаму S. nogalater IMET 43 360. 2,0 1,5 1,0 0,5 0 0 5 10 15 20 25 30 Час обробки, хв Рис. 2. Вплив обробки НГ у концентраціях 3 (1), 5 (2) і 10 мг/мл (3) на виживання спор штаму S. nogalater IMET 43 360. 1 2 3
20 О. Громико, В. Федоренко Таблиця 2 Вплив УФ-опромінення на антибіотичну активність штаму S. nogalater IMET 43 360 Показники Контроль Час опромінення, с 90 100 Кількість досліджених клонів, N 342 282 194 Середнє значення ІП, М±m,% 100* 91,9±1,8 90,8±2,1 Частка “плюс“- варіантів, % 2,6 2,5 0 Частка “мінус“- варіантів, % 1,2 2,7 3,2 Коефіцієнт варіації, СV,% 23,6 25,6 21,4 * За 100% брали середнє значення ІП спонтанних клонів штаму 43 360 на середовищі СС-14. ації ознаки антибіотикоутворення (CV) становив 23,6%. Середнє значення антибіотичної активності досліджуваного штаму після опромінення знизилося майже на 10%. “Плюс“-варіанти виникали лише після 90 с опромінення, їхня частка становила 2,5%. “Мінус“-варіанти ми виявляли після обох термінів опромінення в кількості близько 3%. Коливання коефіцієнта CV були не суттєвими і наближалися до значення контролю. Зміни рівня антибіотичної активності штаму 43 360 вивчали після обробки НГ у концентраціях 5 мг/мл протягом 20 хв (виживання 39,6%) і 10 мг/мл протягом 20-30 хв (виживання 20,1 і 14,5%, відповідно) (табл. 3). Після 20 хв обробки при концентрації НГ 5 і 10 мг/мл середнє значення ІП клонів IMET 43 360 становило близько 87%, а після 30 хв обробки 10 мг/мл НГ цей показник був меншим ще на 20% порівняно з вихідним штамом. “Плюс“-варіанти виникали у всіх варіантах експерименту, але найбільше (4,4%) їх було після обробки мутагеном у концентрації 10 мг/мл протягом 20 хв. Також після цієї дози НГ значно зріс коефіцієнт CV (39,2%). Ми виконали кількісний аналіз рівня синтезу ногаламіцину індукованими мутантами, ІП яких перевищував середнє значення ІП S. nogalater IMET 43 360. Для цього використали 32 УФ- і 29 НГ-індукованих мутантів. За 100% брали рівень синтезу ногаламіцину вихідної кільтури. Виявили, що 50% УФ-індукованих мутантів перевищувало рівень синтезу антибіотика вихідної культури на 30–50%, а майже третина мутантів (28,1%) синтезувала на 60–100% більше. Рівень синтезу решти індукованих УФ мутантів становив 110% щодо штаму 43 360. Серед НГ-індукованих мутантів більшість (55,2%) синтезували ногаламіцину на 10% більше від вихідної культури, а решта мутантів синтезували антибіотика на 30–50% більше. Таблиця 3 Вплив обробки НГ на антибіотичну активність штаму S. nogalater IMET 43 360 Показники Контроль Концентрація, мг/мл /час обробки, хв 5 / 20 10 / 20 10 / 30 Кількість досліджених клонів N 342 342 293 280 Середнє значення ІП, M±m, % 100* 86,4±0,3 88,2±0,4 68,8±0,3 Частка “плюс“-варіантів, % 2,6 0,6 2,7 0 Частка “мінус“-варіантів, % 1,2 3,1 4,4 2,2 Коефіцієнт варіацій CV,% 23,6 24,5 39,2 26,9 * За 100% брали середнє значення ІП спонтанних клонів штаму 43360.
Page 1 and 2: ВІСНИК ЛЬВІВ. УН-ТУ
Page 3: 18 О. Громико, В. Федо
Page 7: 22 О. Громико, В. Федо

Повний текст (PDF) - Ivan Franko National University of L'viv

Create successful ePaper yourself

Delete template?

Save as template?