PDF-format - Miljøstyrelsen

Donorkammeret vaskes så med 1 ml 50% AcCN (skylles ned langs glasvæggenmed pipette); væsken opsamles med pipette og overføres til glas medskruelåg. Glascellen skilles ad; huden forbliver på metalgitteret påreceptordelen; epidermis skrabes forsigtigt af med en skalpel i det område,hvor teststoffet har ligget på huden (ca. 2,12 cm 2 ); v.h.a. en pincet overføresepidermis til store tælleglas; huden tages herefter af metalgitteret og den hårdekant klippes af med en saks, den resterende bløde del kommes ligeledes over istore tælleglas. Til både epidermis og dermis sættes 3 ml 100 % AcCN;glassene whirli-mixes i få sekunder og henstår i mindst 72 timer til ekstraktion.Ekstrakter samt opsamlede væsker analyseres herefter for indhold afteststoffer.1.5 Variabilitet og statistikAnvendelsen af hud fra forskellige donorer betinger en naturlig heterogenicitetmed deraf følgende interindividuel variation, der kan estimeres til omkring60%. Med en power på 90%, et signifikansniveau på 5% og en standarddeviation på 60% kan den krævede gruppestørrelse anslås til 13-15. Denintraindividuelle variation er imidlertid mindre end den interindividuelle ogved at sikre repræsentation af samme donor i både eksperimentel ogkontrolgruppe, kan vi opnå valide resultater med gruppestørrelser på 6-8diffusionsceller per stof (Nielsen and Nielsen 2000, Nielsen 2004, Nielsen etal. 2004) samtidig med at alle eksperimenter gentages to gange. For atillustrere den intereksperimentelle forskel, primært betinget af forskelligedonorer, er resultaterne fra det første delstudie præsenteret som individuelleforsøg såvel som samlet. Tidligere forsøg har vist, at huden opretholdernormal barrierefunktion i over 72 timer, hvilket muliggør både kortere oglængere eksponeringsperioder.1.6 Kemiske analyserUdgangspunktet for analyser er enten HPLC (Nielsen and Nielsen 2000,Nielsen 2004, Nielsen et al. 2004) eller betatælling. Måling af mængden afpesticid i en prøve sker ved spektrofotometrisk måling i forhold til enstandardkurve efter en primær separation ved hjælp af et HPLC apparatur.Separationen på HPLC sker, ved at stofferne presses gennem en kolonne,hvor stofferne tilbageholdes i forskellig grad afhængig af deres polaritet. I denanvendte opsætning betyder det, at jo mere polært et stof er, jo længere tidtager det om at passere. En del af de anvendte teststoffer forefindes sommærkede stoffer. At et stof er radioaktivt mærket betyder, at man har udskiftetet specificeret atom i molekylet, enten et 12 C-atom eller et 2 H-atom, medhenholdsvis et 13 C- eller 3 H-atom. Det vil sige, at en fraktion af det samledeantal molekyler teststof udsender beta-stråling. De radioaktive teststoffer kanderfor kvantificeres ved hjælp af betatælling.20