SERION ELISA classic Liquordiagnostik ... - virion\serion

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2. BESTIMMUNG DES QUOTIENTEN FÜR ERREGERSPEZIFISCHE ANTIKÖRPER 2.1 SERION ELISA classic TESTDURCHFÜHRUNG Die erregerspezifischen Antikörper im Serum und im Liquor werden mit dem jeweiligen SERION ELISA classic IgG/IgM/IgA nachgewiesen. Bitte folgen Sie der im Kit enthaltenen Arbeitsanleitung, wobei im Fall der Liquordiagnostik nachfolgende Verdünnungen für Serum und Liquor gewählt werden sollten. 2.1.1 Probenverdünnung Aufgrund der hohen Ansprüche an die Exaktheit der Antikörperquantifizierung für den Bereich der Liquordiagnostik muß der dynamische Bereich streng auf den pseudolinearen Abschnitt der Standardkurve beschränkt werden (siehe kitspezifische Standardkurve) . Zusätzlich ist zu empfehlen, OD- Wertepaare, die möglichst dicht beisammen liegen, für die Berechnung zu verwenden. Bei Einhaltung der empfohlenen Verdünnungen für Liquores und Seren werden in der Regel - sofern Antikörper nachweisbar sind - OD- Werte erhalten, die in diesen Bereich fallen. Bis im Labor genügend Erfahrungen bzgl. Liquordiagnostik vorliegen, sollten, wenn möglich, Serum- und Liquorproben jeweils in 2 Verdünnungen ausgetestet werden. AI- Berechnungen können dann in allen Kombinationen erfolgen. Bei gegebener Verdünnungslinearität werden übereinstimmende AI erhalten. (Bestätigung des Ergebnisses). Fallen einzelne OD- Werte in den oberen oder unteren abflachenden Bereich der Standardkurve, können allerdings größere (>30%) Unterschiede der berechneten Werte auftreten; die Verdünnungslinearität ist hier nicht mehr optimal. Serumverdünnung: 1 : 400 je 10 µl Patientenserum zu je 4000 µl Verdünnungspuffer (= 1 + 400) Liquorverdünnung: 1 : 2 je 100 µl Liquores zu je 100 µl Verdünnungspuffer (= 1 + 1) Bei höheren Antikörperkonzentrationen in Seren und Liquores haben sich folgende Verdünnungen für beide Materialien in zahlreichen Austestungen bewährt: Serumverdünnung: 1 : 1000 je 10 µl Patientenserum zu je 1000 µl Verdünnungspuffer (= 1 + 100) je 20 µl aus der ersten Verdünnung zu je 180 µl Verdünnungspuffer (1 + 9) Liquorverdünnung: 1 : 10 je 20 µl Liquores zu je 180 µl Verdünnungspuffer (= 1 + 9) 7
Die verdünnten Proben sollten sorgfältig gemischt und in Doppelbestimmung im ELISA gemessen werden. Anmerkung: Häufig liegen Liquorproben nicht in ausreichenden Mengen vor, so daß höhere Verdünnungen gewählt werden müssen. In diesen Fällen sollte auch eine höhere Serumverdünnung gewählt werden. Eine höhere Verdünnung kann allerdings in manchen Fällen mit einem Verlust an Sensitivität einhergehen. 2.1.2 Rheumafaktor-Absorption Bei IgM-Bestimmungen kann für Serum und Liquorproben eine Rheumafaktor (Rf) Absorption durchgeführt werden. Die nachfolgende Anleitung bezieht sich auf das Produkt SERION Rf- Absorbens (Best. Nr. Z100 (5 ml) bzw. Z200 (20 ml)). Durchführung Rf-Absorption für Serum: 1. 10 µl Serumprobe mit 200 µl Rf- Absorbens und 800 µl SERION ELISA classic Verdünnungspuffer gut mischen (ergibt Serumverdünnung 1:100). 2. 15 Minuten bei Raumtemperatur oder über Nacht bei +2 bis +8 o C inkubieren; nochmals gut mischen 3. Den zweiten Verdünnungschritt (1:4 bzw. 1:10) mit SERION ELISA classic Verdünnungspuffer durchführen. Nun 100 µl dieser 1:400 bzw. 1:1000 Serumverdünnung für den Testansatz im SERION ELISA classic verwenden. Durchführung Rf-Absorption für Liquores: 1. SERION Rf- Absorbens 1:5 mit SERION ELISA classic Verdünnungspuffer vorverdünnen, z.B. 100 µl Rf-Absorbens + 400 µl SERION ELISA classic Verdünnungspuffer; den Ansatz gut mischen. 2. Liquorprobe mit dieser Rf-Absorbens-Vorverdünnung 1:2 oder 1:10 verdünnen, z.B.: 100µl Vorverdünnung + 100 µl Liquores (1:2) oder 180 µl Vorverdünnung + 20 µl Liquores (1:10); den Ansatz gut mischen. 3. 15 Minuten bei Raumtemperatur oder über Nacht bei +2 bis +8 ° C inkubieren; nochmals gut mischen. 4. 100 µl des Gemisches für einen Testansatz im SERION ELISA classic verwenden. 8
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Seite 7: 1.4 LIMES-QUOTIENTEN-BERECHNUNG: Ve
Seite 11 und 12: 2.2. Auswertung Der Testpackung lie
Seite 13 und 14: 3. BERECHNUNG DES ANTIKÖRPER-INDEX
Seite 15 und 16: SERION ELISA classic HSV IgG: Verd
Seite 17: Tragen Sie nun die in den Messungen

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