MUELLER-HINTON 56137 - 63824 - 63901 - 64884 ... - Bio-Rad

MUELLER-HINTON 56137 - 63824 - 63901 - 64884 - 64888
MUELLER-HINTON + BLUT 63825 – 63902
MUELLER-HINTON + BLUT + β-NAD 63524
ISOLATIONSMEDIUM FÜR ANTIBIOGRAMME
1- VERWENDUNGSZWECK
Mueller-Hinton-Agar ist ein standardisiertes Medium, das für das Antibiogramme mittels Agardiffusion oder Agarverdünnung
empfohlen wird.
2- PRINZIP
Die Zusammensetzung des Mueller-Hinton-Mediums muss so standardisiert sein, dass ein verlässliches Antibiogramm mit
festgelegten Konzentrationen an CaCl 2 , MgCl 2 und ZnCl 2 erzielt wird, da schwankende Konzentrationen an Mg 2+ - und Ca 2+ -
Kationen bekannterweise die Ergebnisse für Pseudomonas aeruginosa mit Aminoglykosiden und für Staphylokokken mit
Tetracyclin beeinträchtigen (Durchmesser und Mindesthemmkonzentration, MHK) (3, 4, 5, 6) .
Eine niedrige Konzentration an Thymidin senkt ebenfalls das Phänomen des erneutes Wachstums um die Trimethoprim-
Sulfonamid und Trimethoprim-Blättchen.
3- DARREICHUNGSFORM
• Gebrauchsfertiges Medium:
- Packung mit 20 runden Petrischalen (90 mm) (MH) Art.-Nr. 63824
- Packung mit 10 quadratischen Petrischalen (120 mm) (MH) Art.-Nr. 63901
• Gebrauchsfertiges Medium (pipettierfertig):
- 6 x 200 ml-Fläschchen (MH) Art.-Nr. 56137
• Dehydriertes Medium:
- 500 g Art.-Nr. 64884
- 5 kg Art.-Nr. 64888
• Medium mit Blut:
- Packung mit 20 runden Petrischalen (90 mm) (MHB) Art.-Nr. 63825
- Packung mit 10 quadratischen Petrischalen (120 mm) (MHB) Art.-Nr. 63902
• Medium mit Pferdblut und β-NAD:
- Packung mit 20 runden Petrischalen (90 mm) (MHF) Art.-Nr. 63524
4- THEORETISCHE ZUSAMMENSETZUNG (g/l destilliertes Wasser)*
Mueller-Hinton, mit oder ohne Zugabe von Schafsblut, wird anhand der von der WHO beschriebenen Formel vorbereitet (1,2) .
Peptons 3
Casein-Hydrolysat 17,5
Agar 15
Ca 2+
20-25mg/L
Mg 2+
10-12,5 mg/L
End-pH-Wert: 7,4 ± 0,2
Supplements: + 5% Schafsblut (für MHB Medium) oder 5% Pferdblut
(für MHF Medium)
β-NAD (nur für MHF Medium)
β-NAD: β- Nicotinamid Adenin Dinucleotid
* optimierte Zusammensetzung für zuverlässige Ergebnisse.
20 mg/L
Vorbereitung des Mediums:
35 g des dehydrierten Mediums in 1 l frisches, destilliertes Wasser geben. Zum Kochen bringen, bis es sich vollständig aufgelöst hat.
In einem Autoklaven 15 Minuten bei 121°C ± 1°C sterilisieren. In sterile Röhrchen oder Petrischalen pipettieren.
Bei der Verwendung das Medium in einem kochenden Wasserbad schmelzen und den gesamten Inhalt des Gefäßes bzw.
Röhrchens in runde Petrischalen geben. Die Agarschicht muss 4 mm dick sein. Die Petrischalen 30 Minuten bei 37°C trocknen
lassen. Bei einer Agarschicht von genau 4 mm Dicke beträgt das Volumen des Mueller-Hinton-Mediums für eine 90 mm-
Petrischalen 25 ml, für eine quadratische 120 mm-Petrischale 60 ml und für eine runde 150 mm-Petrischale 70 ml.
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Bei Gebrauch und vor dem Pipettieren können dem Medium folgende Zusätze hinzugefügt werden:
• 5% Schafs- oder Pferdeblut für Mueller Hinton + Blutmedium,
• 5% Natriumchlorid (NaCl) für Mueller-Hinton + 5% NaCl-Medium.
5- LAGERUNG
• Gebrauchsfertiges Medium: bei +2 - 20°C.
• Gebrauchsfertiges Medium (pipettierfertig): bei +2 - 25°C.
• Gebrauchsfertiges Medium: bei +2 - 8°C.
• Dehydriertes Medium: in fest verschlossenen Gefäßen an einem trockenen Ort bei +15 - 25°C.
Das Verfallsdatum und die Chargennummer sind auf der Verpackung angegeben.
6- GEBRAUCHSANWEISUNG
Material:
Geliefertes Material: Mueller-Hinton-Medium mit oder ohne Zugabe von Schafsblut.
Zusätzlich benötigtes Material:
• Opazitätsstandard entsprechend einem Mac Farland 0,5-Standard.
• Laborausstattung für Antibiogramm mittels Agardiffusionsmethode.
Vorsichtsmaßnahmen bei der Verwendung: Die Gebrauchsanweisung der aktuellen Richtlinien (CLSI 7,8 , CA-SFM 9 ,
EUCAST 10,11,12 ) befolgen. Beachten Sie stets die aktuellen Methoden und Vorsichtsmaßnahmen zum Schutz vor
mikrobiologischen Gefahren.
Beimpfung:
Mit einer frischen, auf Agarmedium gewachsenen Reinkultur eine Suspension mit einer Trübung entsprechend dem MacFarland
Standard 0,5 vorbereiten. Das Verfahren für die Standardisierung des Inokulums ist in den verschiedenen, von CLSI, CA-SFM
und EUCAST veröffentlichten Richtlinien für die Agardiffusionsmethode und Agarverdünnungsmethode beschrieben.
Wird das Medium bei 4°C aufbewahrt, muss es auf Raumtemperatur (18-30°C) gebracht werden.
Wird auf der Oberfläche übermäßige Feuchtigkeit beobachtet, sollten die Schalen vor der Verwendung in einem Inkubator bei
35°C 10 bis 30 Minuten getrocknet werden.
DIFFUSIONSMETHODE
Beimpfung durch Begießen (vom CA-SFM empfohlene Methode):
Mit dem standardisierten Inokulum das Verfahren des CA-SFM hinsichtlich Verdünnung der anfänglichen Suspension
entsprechend der zu testenden Bakterienspezies befolgen.
Die gewonnene Suspension auf die gesamte Schale gießen und anschließend überschüssige Suspension entfernen.
Beimpfung durch Ausstreichen (vom CLSI, CA-SFM, EUCAST empfohlene Kirby-Bauer-Methode):
Zur Beimpfung der Schale mit dem standardisierten Inokulum die CLSI, CA-SFM, EUCAST -Richtlinien befolgen:
• Einen sterilen, nicht-toxischen Tupfer in die Suspension eintauchen.
• Überschüssige Suspension durch leichtes Drehen des Tupfers gegen die Gefäßwand entfernen.
• Die Schale mit dem Tupfer beimpfen, um eine Kultur konfluenter Kolonien zu erhalten.
Die Blättchen mit einem Dispenser oder einer Pinzette durch leichtes Drücken auflegen.
AGARVERDÜNNUNGSMETHODE
Die Beimpfung und das Testverfahren sind in den CLSI- und CA-SFM-Richtlinien beschrieben.
Inkubation:
Die aktuellen CLSI, EUCAST und CA-SFM-Richtlinien befolgen.
Die Inkubationsbedingungen können je nach getesteter Bakterienspezies variieren.
7- INTERPRETATION DER ERGEBNISSE
Die Interpretation des Antibiogramms mittels Blättchendiffusionsmethode bzw. Agarverdünnungsmethode ist in den regelmäßig
veröffentlichten CA-SFM, EUCAST und CLSI-Richtlinien beschrieben.
8- LEISTUNG/QUALITÄTSKONTROLLE DES TESTS
• Erscheinung des gebrauchsfertigen Mueller-Hinton-Mediums: heller bis opaleszenter, bernsteinfarbener Agar.
• Erscheinung des dehydrierten Mueller-Hinton-Mediums: beigefarbenes Pulver.
• Erscheinung des gebrauchsfertigen Mueller-Hinton + Blut-Mediums: roter Agar.
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Die Leistungsmerkmale des Wachstums des Mueller-Hinton-Mediums mit oder ohne Zusatz von Schafsblut werden mit
folgenden Stämmen überprüft:
STÄMME KULTURERGEBNIS NACH 24 Stunden bei 37°C
Escherichia coli ATCC 25922
Zufriedenstellendes Wachstum
Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853
Zufriedenstellendes Wachstum
Staphylococcus aureus ATCC 25923
Zufriedenstellendes Wachstum
Streptococcus pneumoniae ATCC 49619
Zufriedenstellendes Wachstum
Haemophilus influenzae NCTC 8468/ CIP 54.94
Zufriedenstellendes Wachstum
Die Zusammensetzung des MH Mediums wird mit folgenden Stämmen und Blättchen überprüft (unvollständige Liste):
STÄMME
Escherichia coli ATCC 25922 / CIP 76.24
- Amikacin 30 µg
- Ampicillin 10 µg
- Tetracyclin 30 µg
Staphylococcus aureus ATCC 25923
- Amikacin 30 µg
- Cephalothin 30 µg
- Tetracyclin 30 µg
Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 / CIP 76110
- Amikacin 30 µg
- Cefotaxim 30 µg
- Ciprofloxacin 5 µg
ANTIBIOGRAMM
Entsprechend den aktuellen Spezifikationen für
Hemmhofdurchmesser
(CLSI bzw. CA-SFM) (8, 9) .
Die Zusammensetzung des MHB Mediums wird mit folgenden Stämmen und Blättchen überprüft (unvollständige Liste):
STÄMME
Streptococcus pneumoniae ATCC 49619
- Erythromycin 15 µg
- Penicillin 10 UI
- Tetracyclin 30 µg
Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853
- Amikacin 30 µg
- Cefotaxim 30 µg
- Ciprofloxacin 5 µg
ANTIBIOGRAMM
Entsprechend den aktuellen Spezifikationen
für Hemmhofdurchmesser (CLSI) (8) .
Die Zusammensetzung des MHF Mediums wird mit folgenden Stämmen und Blättchen überprüft (unvollständige Liste):
STÄMME
Streptococcus pneumoniae ATCC 49619
- Erythromycin 15 µg
- Penicillin 10 UI
- Tetracyclin 30 µg
Haemophilus influenzae NCTC 8468/ CIP 54.94
- Ampicillin 2 µg
- Cefaclor 30 µg
- Tetracycline 30 µg
ANTIBIOGRAMM
entsprechend den aktuellen EUCAST Spezifikationen
für Hemmhofdurchmesser (12) .
9- QUALITÄTSKONTROLLE DES HERSTELLERS
Alle von der Firma Bio-Rad hergestellten Reagenzien unterliegen einem Qualitätssicherungssystem vom Rohstoffeingang bis
zur Vermarktung der Fertigprodukte. Jede Fertigproduktcharge wird einer Qualitätskontrolle unterzogen und nur dann verkauft,
wenn sie den Freigabekriterien entspricht. Die Unterlagen bezüglich Herstellung und Kontrolle der einzelnen Chargen werden
bei Bio-Rad aufbewahrt.
10- GRENZEN DES TESTS
Um interpretierbare Ergebnisse zu erhalten, müssen immer frische Reinkulturen verwendet werden.
Aufgrund spezifischer Anforderungen an die Nährstoffe wachsen manche Stämme auf diesem Medium unter Umständen nicht.
In folgendem Fall sollte ein entsprechendes Medium verwendet werden: HTM für Haemophilus, Mueller-Hinton mit Zugabe von
5% Schafsblut für Streptococcus pneumoniae und hämolytische Streptokokken, GC-Agar für Neisseria gonorrhoeae.
Manche Faktoren können die Ergebnisse beeinflussen (Menge des Inokulums, Inkubationszeit und -atmosphäre, etc.). Daher ist
es unerlässlich, das in den aktuellen Richtlinien beschriebene Protokoll (CLSI, CA-SFM, EUCAST) zu befolgen.
Mueller-Hinton-Frischblut-Agar wird nicht für das Antibiogramm von S. pneumoniae gegen Cotrimoxazol empfohlen (7) .
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11- LITERATUR
1- World Heath Organization Expert Committee on Biological Standardization. 1981. Technical report series 673 (Révision
1981). W.H.O., Geneva – p156-192.
2- World Heath Organization Expert Committee on Biological Standardization. 1992. Technical report series 822. W.H.O.,
Geneva.
3- Casillas, E.,Kenny, M.A., Minshew B.H., Schoenknecht, F. 1981. Effect of ionized calcium and soluble magnesium on the
predictability of the performance of Mueller-Hinton agar susceptibility testing of Pseudomonas aeruginosa with
Gentamicin. Antimicrob. Agents Chemother. 19:987-992.
4- Murray, P.R., Zeitinger, J. R. 1983. Evaluation of Mueller-Hinton agar for disk diffusion susceptibility tests. J. Clin.
Microbiol. 18: 1269-1271
5. D’Amato, R.F., Thornsberry C., Baker C.N., Kirven, L.A. 1976. Effect of calcium and magnesium ions on the susceptibility
of Pseudomonas species to Tetracycline, Gentamicin Polymyxin B, and Carbenicillin. Antimicrob. Agents Chemother. 7:
596-600.
6. D’Amato, R.F., Thornsberry C. 1979. Calcium and Magnesium in Mueller-Hinton agar and their influence on disk diffusion
susceptibility results. Current Microbiol.2:135-138
7. Clinical and Laboratory Standards Institute. 2010. Approved standard M2-A10. Performance standards for antimicrobial
susceptibility tests, 10th ed. CLSI, Wayne, Pa.
8. Clinical and Laboratory Standards Institute. 2010. CLSI document M100-S19. Performance standards for antimicrobial
susceptibility testing, 20th informational supplement, Wayne, Pa.
9. Comité de l’antibiogramme. 2010. French Society of Microbiology.
10. European Committee on Antimicrobial susceptibility testing (EUCAST). 2009. Media preparation for disc diffusion testing
V1.0.
11. European Committee on Antimicrobial susceptibility testing (EUCAST). 2009. EUCAST disk diffusion antimicrobial
susceptibility testing method summary - V1.0.
12. European Committee on Antimicrobial susceptibility testing (EUCAST). 2010. EUCAST QC Tables V1.1.
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