PLATELIAâ„¢ CANDIDA Ag - Bio-Rad

PLATELIA CANDIDA Ag
96 TESTS 62798
PLATELIA CANDIDA Ag IST EIN
IMMUNENZYMATISCHER SANDWICH-
MIKROTITERPLATTEN-ASSAY FÜR DEN NACHWEIS
VON CANDIDA -MANNAN-ANTIGEN IN SERUM.

1- VERWENDUNGSZWECK
Platelia Candida Ag ist ein immunenzymatischer Sandwich-Mikrotiterplatten-
Assay für den Nachweis von zirkulierendem Candida -Mannan-Antigen in
Serumproben.
2- VERWENDUNGSHINWEIS
Bei Verwendung von Platelia Candida Ag (Best.-Nr. 62798) in Kombination
mit Platelia Candida Ab/Ac/Ak (Best.-Nr. 62799) kann eine Diagnose früher
gestellt und die Sensitivität der Diagnose einer invasiven Candidiasis als
Teil einer vollständigen Diagnose mit klinischen und mykologischen Daten
und eine Beurteilung intrinsischer und iatrogener Risikofaktoren verbessert. 12
Die Kombination der Tests ist auch ein integraler Bestandteil der klinischen
und der Laborüberwachung als Hilfsmittel für Entscheidungen über die
Behandlung.
3- ZUSAMMENFASSUNG UND ERLÄUTERUNG DES
TESTS
Candida-Infektionen sind die häufigste Form von Nosokomialpilzinfektionen. 2
Invasive Formen stellen die ernsthaftesten Infektionen mit Mortalitätsraten
zwischen 30% und 70% bei Menschen mit geschwächtem Immunsystem
dar. 10 Obwohl auf diesem Gebiet in letzter Zeit beträchtliche Fortschritte
erzielt wurden, können invasive Candida-Infektionen aufgrund der geringen
Spezifität der klinischen Symptome und der niedrigen Sensitivität von
Kulturen nur schwierig diagnostiziert werden. Die Diagnose einer invasiven
Candidiasis und eine Einleitung einer entsprechenden Behandlung basieren
in der Regel auf einer Betrachtung der klinischen und mykologischen
Ergebnisse sowie der Risikofaktoren. 7 In diesem Zusammenhang muss die
Diagnose einer systemischen Candidiasis immer serologische und direkte
mykologische Methoden umfassen. Der Nachweis zirkulierender Antigene
im Serum scheint die Diagnose von Candida-Infektionen, insbesondere bei
Menschen mit geschwächtem Immunsystem, zu verbessern. Mannan, eines
von mehreren Candida-Antigenen, ein Polysaccharid, das nicht kovalent an
die Hefezellmembran gebunden ist, stellt über 7% des Trockengewichts von
C. albicans dar. 3 Dieses Antigen scheint einer der Hauptmarker einer
invasiven Candidiasis zu sein. 6
4- TESTPRINZIP
Platelia Candida Ag ist ein immunenzymatischer Ein-Phasen-Sandwich-
Mikrotiterplatten-Assay für den quantitativen bzw. qualitativen Nachweis des
zirkulierenden Mannan-Antigens in Humanserum. Bei diesem Assay wird der
monoklonale Ratten-Antikörper EBCA-1 gegen Candida α-1-5-Oligomannoside,
der in den früheren Studien 1,5,11 charakterisiert wurde, verwendet. Der
monoklonale Antikörper dient:
62

• der Beschichtung der Vertiefungen der Mikrotiterplatte und die Bindung des
Mannan-Antigens,
• dem Nachweis des an die sensibilisierte Mikrotiterplatte (Konjugatreagenz:
mit Peroxidase markierter monoklonaler Antikörper) gebundenen Antigens.
Die Serumproben werden in Anwesenheit von EDTA hitzebehandelt, um die
Immunkomplexe zu trennen und die Serumproteine, die mit dem Test
interferieren könnten, auszufällen.
Die hitzebehandelten Serumproben und das Konjugat werden in die mit
monoklonalem Antikörper beschichteten Vertiefungen gegeben und inkubiert.
In Anwesenheit von Mannan-Antigen wird ein monoklonaler Antikörper –
Mannan - monoklonaler Antikörper/Peroxidase-Komplex gebildet. Die
Teststreifen werden gewaschen, um ungebundenes Material zu entfernen.
Anschließend wird die Substratlösung zugesetzt, die mit den an die Vertiefung
gebundenen Komplexen reagiert und eine blaue Reaktionsfarbe erzeugt. Die
Enzymreaktion wird durch Zugabe von Säure gestoppt, so dass die Farbe von
blau in gelb wechselt. Die Extinktion (optische Dichte) der Proben, Kontrollen
und Bereichspunkte wird mit Hilfe eines Spektrophotometers bei einer
Wellenlänge von 450 und 620 nm bestimmt.
Der Test kann gemäß den folgenden zwei Verfahren durchgeführt werden:
• Quantitatives Verfahren: durch Erstellen einer Kalibrierungskurve aus
4 Bereichspunkten: 2,0 ; 1,0 ; 0,5 und 0,25 ng/mL. Die Ergebnisse der
Testproben werden in ng Mannan pro mL Serum ausgedrückt.
• Qualitatives Verfahren: Es werden nur die Bereichspunkte 0,25 ng/mL und
0,5 ng/mL verwendet. Ein Vergleich zwischen der Extinktion der Testproben
und der Extinktion der beiden Bereichspunkte ermöglicht eine Bestimmung
der Ergebnisse als negative, mäßige oder positive Seren.
5- REAGENZIEN
Platelia Candida Ag: Produkt Nr. 62798 (96 Tests)
Lagerung des Kits bei +2-8°C. Alle Reagenzien vor der Verwendung auf
Raumtemperatur (+18-25°C) bringen. Alle Reagenzien nach der Verwendung
sofort wieder bei +2-8°C aufbewahren. Unbenutzte Streifen/Platten wieder in
den Beutel stecken und den Beutel wieder verschließen. Das Trockenmittel
nicht entnehmen. Die Streifen sollten nach dem Öffnen und
Wiederverschließen des Beutels innerhalb von 5 Wochen verwendet werden.
Nach der Verdünnung kann die Arbeitswaschlösung 14 Tage lang bei +2-8°C
aufbewahrt werden. Alle anderen Reagenzien sind nach dem Öffnen bis zum
Verfallsdatum haltbar. Die mitgelieferten Reagenzien reichen für 96 Bestimmungen
in maximal 6 Messreihen aus.
63

Komponente Inhalt Menge
R1 Microwell
Strip
Plate
Mikrotiterplatte :
- 96 Vertiefungen (12 Streifen mit jeweils 8
Vertiefungen), beschichtet mit monoklonalem
EBCA-1-Anti-Mannan-Antikörper
1 Platte /
12 x 8
Vertiefungen
R2
R3
R4
R5
Concentrated
Washing
Solution (10x)
Negative
Control
Serum
Calibrator
Serum
Positive
Control
Serum
Konzentrierte Waschlösung (10x) :
- Tris NaCl-Puffer pH 7,4
- 1% Tween ® 20
- Konservierungsmittel: 0,01% Thiomersal.
Negative Kontrollserum :
- Humanes Kontrollserum, negativ für Mannan,
verwendet als negative Kontrolle und
Verdünnungsmittel für das Standardserum bei
der Vorbereitung der 1,0-, 0,5- und
0,25 ng/mL -Bereichspunkte im quantitativen
Test und zur Vorbereitung des
Kalibratorserums im qualitativen Test (siehe
Abschnitt 10 „Testdurchführung“)
- Negativ für Antikörper gegen HIV-1, HIV-2 und
HCV sowie HBs-Antigen
- Konservierungsmittel: < 0,1% Natriumazid
Kalibratorserum :
- Humanserum mit 2,0 ng/mL Mannan,
verwendet zur Vorbereitung der 1,0-, 0,5- und
0,25 ng/mL-Bereichspunkte im quantitativen
Test und zur Vorbereitung des
Kalibratorserums im qualitativen Test (siehe
Abschnitt 10, Testverfahren).
- Negativ für Antikörper gegen HIV-1, HIV-2 und
HCV sowie HBs-Antigen
- Konservierungsmittel: < 0,1% Natriumazid
Positive Kontrollserum :
- Humanserum mit 0,5 und 1.5 ng Mannan
- Negativ für Antikörper gegen HIV-1, HIV-2 und
HCV und HBs-Antigen
- Konservierungsmittel: < 0,1% Natriumazid
R6 Conjugate Konjugat (gebrauchsfertig) :
- Monoklonaler Anti-Mannan-
Antikörper/Peroxidase markiert
- Konservierungsmittel: 0,01% Thiomersal.
1 x 100 mL
1 x 10 mL
2 x 2 mL
1 x 2 mL
1 x 8 mL
64

Komponente Inhalt Menge
R7 Serum
Treatment
Solution
Serumbehandlungslösung (gebrauchsfertig):
- EDTA-Säurelösung, ohne
Konservierungsmittel
1 x 10,5 mL
R8
R9
R10
TMB
Substrate
Buffer
Chromogen:
TMB
Solution
Stopping
Solution
TMB Substratpuffer (gebrauchsfertig) :
- Zitronensäure und Natriumacetatlösung
pH 5,2
- 0,009% Wasserstoffperoxid
- 4% Dimethylsulfoxid (DMSO)
Chromogen TMB-Lösung (konzentriert) :
- 90% Dimethylsulfoxid (DMSO)-Lösung mit
0,6% Tetramethylbenzidin (TMB)*
Stopplösung (gebrauchsfertig) :
- 1,5 N Schwefelsäure (H 2 SO 4 )
Plate sealers Klebefolien :
- Klebestreifen für Mikrotiterplatten
1 x 60 mL
1 x 1 mL
1 x 12 mL
1 x 4 Streifen
* Anmerkung: TMB (Tetramethylbenzidin) ist ein nicht-karzinogenes und nichtmutagenes
Chromogen für Peroxidase.
6- WARNHINWEISE FÜR DEN BENUTZER
1. In-vitro-Diagnostikum.
2. Nur zur Verwendung durch Fachpersonal.
3. Dieser Testkit sollte nur mit Humanserumproben verwendet werden.
4. Das Humanmaterial zur Herstellung der Reagenzien wurde getestet und als
negativ für Antikörper gegen HIV-1, HIV-2 und HCV sowie HBs-Antigen
befunden. Da keine Testmethode eine potentielle Infektionsgefahr mit
absoluter Sicherheit ausschließen kann, müssen alle Reagenzien und
Patientenproben als potentiell infektiös behandelt und mit entsprechender
Sorgfalt behandelt werden.
5. Bei der Arbeit mit Reagenzien und Patientenproben Schutzkleidung und
Einweghandschuhe tragen. Nach der Durchführung des Tests gründlich die
Hände waschen.
6. Nicht mit dem Mund pipettieren.
7. In Bereichen, in denen mit Proben oder Reagenzien gearbeitet wird, nicht
rauchen, essen oder trinken.
8. Verschütten von Proben oder probenhaltigen Lösungen vermeiden.
65

9. Nicht-säurehaltige verschüttete Flüssigkeiten biologischen Ursprungs
müssen sorgfältig mit einem effizienten Desinfektionsmittel abgewischt
werden. Als Desinfektionsmittel kann eine Lösung aus 10%iger Bleiche
(0,5% Natriumhypochloritlösung), 70% Ethanol oder 0,5% Wescodyne
verwendet werden. Verschüttete Säure muss mit Papiertüchern abgewischt
oder mit Natriumbicarbonat neutralisiert und mit einem chemischen
Desinfektionsmittel gereinigt werden. Das zum Reinigen verwendete
Material muss in einem Behälter für infektiösen Abfall entsorgt werden.
VORSICHT : Natriumhypochlorithaltige Lösungen nicht in den Autoklaven
stellen.
10. Alle Proben und Materialien, die für die Durchführung des Tests verwendet
wurden, müssen als potentiell infektiös behandelt werden. Die Abfälle
müssen entsprechend den geltenden Bestimmungen entsorgt werden.
11. Einige Reagenzien enthalten Natriumazid als Konservierungsmittel.
Natriumazid kann zur Bildung von Blei- oder Kupferaziden in Rohrleitungen
führen. Solche Azide können explosiv sein. Um die Azidbildung zu
vermeiden, Leitungen mit reichlich Wasser nachspülen, wenn die
azidhaltigen Lösungen nach Inaktivierung über den Abfluss entsorgt
werden.
12. VORSICHT :
Schwefelsäure (H 2 SO 4 ) 1,5 N und DMSO (Dimethylsulfoxid)
90%
R36/38 : Reizt die Augen und die Haut.
Xi-reizend S2-26-30 : Darf nicht in die Hände von Kindern gelangen. Bei
Berührung mit den Augen sofort gründlich mit Wasser
abspülen und Arzt konsultieren. Niemals Wasser hinzugießen.
13. Jeglicher Kontakt des TMB-Substratpuffers, Chromogens, der TMB-
Lösung und der Stopplösung mit den Augen, der Haut und den Schleimhäuten
ist zu vermeiden (Vergiftungs-, Reizungs- und Verbrennungsgefahr).
14. Das Materialsicherheitsdatenblatt (MSDS) ist auf Anfrage erhältlich.
7- VORSICHTSMASSNAHMEN FÜR BENUTZER
1. TIEFGEFRORENE SERUMPROBEN, DIE UNTER NICHT BEKANNTEN
BEDINGUNGEN AUFBEWAHRT WURDEN, KÖNNEN AUFGRUND EINER
KONTAMINATION MIT PILZEN BZW. BAKTERIEN ZU FALSCH POSITIVEN
ERGEBNISSEN FÜHREN.
2. Kits oder Kitreagenzien nach Ablauf des angegebenen Verfallsdatums nicht
mehr verwenden.
3. Mit Ausnahme der konzentrierten Waschlösung (R2) und der Stopplösung
(R10) dürfen keine Reagenzien anderer Kits mit unterschiedlichen
Chargennummern gemischt werden.
66

4. Alle Reagenzien mindestens 15 Minuten vor der Verwendung auf Raumtemperatur
bringen.
5. Die Reagenzien während der Rekonstitution sorgfältig unter Vermeidung
mikrobieller Kontamination mischen.
6. Den Test nicht durchführen, wenn Staub oder reaktive Dämpfe (saure,
alkalische, Aldehyd-Dämpfe) vorhanden sind, die zu Veränderungen der
Enzymaktivität des Konjugats führen können.
7. Zur Zubereitung der Substrat-Chromogen-Reaktionslösung saubere
Einweg-Polypropylen-Gefäße verwenden. Bei Verwendung von Glasgefäßen
diese sorgfältig mit 1N-Salzsäurelösung waschen, mit destilliertem Wasser
spülen und trocknen.
8. Zum manuellen Pipettieren von Kontrollen und Proben Einweg-Pipettenspitzen
zur Vermeidung einer Verschleppung von Proben verwenden.
9. Um adequate Waschgänge der Vertiefungen sicherzustellen, die
empfohlene Anzahl an Waschzyklen beachten. Es muss gewährleistet sein,
dass alle Vertiefungen vollständig befüllt und anschließend vollständig
geleert werden. Die Waschgänge sollten nicht mit einer Dosierflasche
durchgeführt werden.
10. Die Mikrotiterplatte darf nach dem Waschgang und vor der Zugabe der
Reagenzien nicht austrocknen.
11. Für die Konjugat- und Substratlösungen nicht das gleiche Gefäß
verwenden.
12. Die Konjugat- und die Substrat-Chromogen-Reaktionslösung dürfen nicht in
Berührung mit Metallen oder Metallionen kommen.
13. Chromogen, TMB-Lösung und Substrat-Chromogen-Reaktionslösung
während der Aufbewahrung und der Inkubation keiner starken
Lichteinstrahlung aussetzen. Die Chromogenlösungen nicht mit
Oxidationsmitteln in Berührung bringen.
14. Die Stopplösung nicht mit Oxidationsmitteln in Berührung bringen. Die
Stopplösung nicht mit Metallen oder Metallionen in Berührung bringen.
15. Exposition der Lösungen (Seren, Serumbehandlungslösung, Konjugat) oder
offener Gefäße (Platten, Röhrchen, Pipetten usw.) gegenüber der Luft auf
ein Minimum reduzieren.
16. Unbenutztes Konjugat nicht wieder in das Originalfläschchen zurückgeben.
17. Die Substrat-Chromogen-Reaktionslösung muss farblos sein. Ist nach der
Verdünnung eine Blaufärbung sichtbar, ist das Reagenz kontaminiert und
darf nicht verwendet werden. Das Reagenz entsorgen und frisches
zubereiten.
67

8- VORBEREITUNG UND LAGERUNG DER REAGENZIEN
Streifenplatte mit Mikrovertiefungen (R1)
Nach dem Öffnen des Plattenbeutels sind die Streifen mit den Mikrovertiefungen
5 Wochen haltbar, sofern sie in dem sorgfältig wieder verschlossenen
Originalbeutel mit Trockenmittel bei +2-8°C aufbewahrt werden.
Waschlösung (R2)
Ein ausreichendes Volumen an Arbeitswaschlösung durch Zugabe von 1 Teil
konzentrierter Waschlösung zu 9 Teilen sterilem entionisiertem oder destilliertem
Wasser geben. Für die Durchführung der Messreihe ein ausreichendes
Volumen an Arbeitswaschlösung zubereiten (80 ml für einen Streifen: 8 ml R2
+ 72 ml destilliertes Wasser).
Die Arbeitswaschlösung kann bis zu 14 Tage bei +2-8°C aufbewahrt werden.
Nach den Öffnen ist die Arbeitswaschlösung bei einer Lagerung bei +2-25°C
ohne Kontamination bis zu dem auf dem Etikett angegebenen Verfallsdatum
haltbar.
Substrat-Chromogen-Reaktionslösung (R8+R9)
Die Substrat-Chromogen-Reaktionslösung durch Zugabe eines Teils
konzentrierter Chromogen: TMB-Lösung, R9, zu 50 Teilen TMB-Substratpuffer,
R8, zubereiten. 2 ml Substrat-Chromogen-Reaktionslösung pro Streifen
zubereiten: 40 µl R9 + 2 ml R8.
Die Lösung ist bei lichtgeschützter Lagerung bei Raumtemperatur (+18-25°C)
6 Stunden haltbar. Nach dem Öffnen sind die bei +2-8°C gelagerten
Reagenzien R9 ohne Kontamination bis zu dem auf dem Etikett angegebenen
Verfallsdatum haltbar.
Negatives Kontrollserum (R3), Kalibratorserum (R4), Positives
Kontrollserum (R5), Konjugat (R6), Serumbehandlungslösung (R7)
und Stopplösung (R10)
Nach dem Öffnen sind die bei +2-8°C gelagerten Reagenzien R3, R4, R5, R6,
R7 und R10 ohne Kontamination bis zu dem auf dem Etikett angegebenen
Verfallsdatum haltbar.
9- PROBENGEWINNUNG
Die Gewinnung der Blutproben erfolgt gemäß der Standardlaborvorgehensweise.
Der Test darf nur mit Serum durchgeführt werden. Die Serumproben
dürfen nicht mit Pilzsporen bzw. Bakterien kontaminiert sein. Die Proben
dürfen beim Transport und der Lagerung in versiegelten Röhrchen nicht der
Luft ausgesetzt werden. Die Proben können vor dem Test bis zu 24 Stunden
bei +2-8°C gelagert werden. Für eine längere Lagerung das Serum bei -70°C
lagern.
68

Die Serumproben können maximal dreimal eingefroren und wieder aufgetaut
werden. Zuvor tiefgefrorene Proben sollten nach dem Auftauen und vor dem
Test gründlich gemischt werden.
Proben mit einem Albumingehalt bis 90 g/L, Bilirubingehalt bis 200 mg/L,
lipämische Proben mit einem Trioleingehalt (Triglyzerid) bis 360 g/L sowie
hämolytische Proben mit einem Hämoglobingehalt bis 200 g/L beeinträchtigen
die Ergebnisse nicht.
Die Seren nicht dekomplementieren.
10- TESTDURCHFÜHRUNG
Geliefertes Material
Siehe Abschnitt “Reagenzien”.
Zusätzlich benötigtes Material
1. Steriles destilliertes oder entionisiertes Wasser für die Verdünnung der
konzentrierten Waschlösung.
2. Saugfähige Papiertücher
3. Einweghandschuhe.
4. Schutzbrille.
5. Natriumhypochlorit und Natriumbicarbonat.
6. Einstellbare oder feste Pipetten oder Multipipetten zum Abmessen und
Pipettieren von 50 µL, 100 µL, 300 µL und 1000 µL.
7. 1,5 ml Polypropylen-Mikrozentrifugen-Röhrchen mit luftdichtem
Verschluss, hitzebeständig für 120°C (Heizblock) oder 100°C (Heißwasserbad):
• Röhrchen mit Schraubverschluss: Konische 1,5 mL-Röhrchen, Bio-Rad
Kat. Nr. 224-0010 oder Ähnliche.
ODER
• Röhrchen mit Schnappverschluss: EZ-Mikroteströhrchen, 1,5 mL,
Bio-Rad Kat. Nr. 223-9480 oder Ähnliche.
• Verschlüsse für Mikroröhrchen mit Schnappverschluss: VWR Kat.
Nr. 6054001 oder Ähnliche. Diese Verschlüsse verschließen die Röhrchen
mit Schnappverschluss sicher, so dass sich die Schnappverschlüsse bei
Temperatur- oder Druckänderung nicht öffnen können. Darüber hinaus
können die Röhrchen leicht aus dem Heizblock oder Heißwasserbad
entnommen werden.
8. Labortischzentrifuge für 1,5 mL-Polypropylen-Röhrchen für 10.000g
9. Bei Verwendung eines Heizblocks für die Behandlung der Seren:
• Heizblock. Es werden folgende Heizblockmodelle empfohlen:
- 1-Block-Modell: Grant Kat. Nr. QBD1 (VWR Kat. Nr. 460-0074)
- 2-Block-Modell: Grant Kat. Nr. QBD2 (VWR Kat. Nr. 460-0076)
69

• Block für Heizblock: Beide Heizblocks (QBD1 und QBD2) müssen mit dem
Grant-Block Kat. Nr. QB-E1 (VWR Kat. Nr. 460-8517) verwendet werden.
Bei Verwendung eines Heißwasserbades für die Behandlung der Seren:
• Rundes, schwimmendes Mikrozentrifugen-Rack für 1L-Becherglas.
• Heißwasserbad, auf 100°C eingestellt.
10. Vortex-Mischer.
11. Mikrotiterplatten-Inkubator, auf 37 ± 1°C eingestellt.
12. Halbautomatisches oder automatisches Waschsystem für Mikrotiterplatten.
13. Mikrotiterplatten-Lesegerät, ausgestattet mit 450 nm- und 620 nm-Filtern.
14. Behälter für infektiösen Abfall.
Anmerkungen zur Testdurchführung
Um die Testergebnisse zu validieren, müssen die negativen und positiven
Kontrollen sowie die Bereichspunkte in jeder Messreihe mitgetestet werden.
Vorbereitung der Bereichspunkte
Quantitatives Verfahren :
R3
Negatives
Kontrollserum
Für 1 Serie Für 6 Serien (*)
R4
2 ng/mL
Kalibratorserum
R3
Negatives
Kontrollserum
R4
2 ng/mL
Kalibratorserum
2 ng/mL-Punkt - 300 µL - 2000 µL
1 ng/mL-Punkt 150 µL 150 µL 1000 µL 1000 µL
0,5 ng/mL-Punkt 225 µL 75 µL 1500 µL 500 µL
0,25 ng/mL-Punkt 262,5 µL 37,5 µL 1750 µL 250 µL
(*) Ein für 6 Serien ausreichendes Reagenzvolumen kann im Voraus vorbereitet
werden: für jeden Bereichspunkt in Aliquoten von 300 µL aufteilen und bei -
20°C lagern.
Die Reagenzien vor der Verwendung auf Raumtemperatur (18 - 25°C) bringen.
Qualitatives Verfahren:
Wie in der vorangegangenen Tabelle beschrieben, die 0,5 ng/mL-
(Kalibratorserum) und 0,25 ng/mL-Bereichspunkte vorbereiten.
Behandlung der Seren
Alle Kontrollseren: negatives (R3), positives (R5) und die 2,0-, 1,0-, 0,5- und
0,25 ng/mL-Bereichspunkte müssen gleichzeitig mit den Testproben wie folgt
behandelt werden:
70

1. 300 µL jedes Testserums, jeder Kontrolle und jedes Bereichspunktes in
jeweils ein 1,5 mL-Polypropylen-Röhrchen geben.
2. 100 µL Serumbehandlungslösung (R7) in jedes Röhrchen geben.
3. Die Röhrchen gründlich (durch kräftiges Mischen oder auf dem Vortex)
mischen. Das Röhrchen fest verschließen, um ein Öffnen des Röhrchens
während des Erhitzens zu vermeiden. Den Verschluss nicht durchstechen.
4. Im Fall eines Heizblocks :
Die Röhrchen 6 Minuten lang in einem Heizblock bei 120°C erhitzen. Die
Röhrchen müssen bei Erreichen der vorgeschriebenen Temperatur in den
Block eingesetzt werden. (*)
ODER
Im Fall eines Wasserbades :
Bei Verwendung eines Heißwasserbades die Röhrchen 3 Minuten lang bei
100°C erhitzen. Die Röhrchen müssen bei Erreichen der vorgeschriebenen
Temperatur in das Wasserbad eingesetzt werden. (*)
5. Die heißen Röhrchen vorsichtig aus dem Heizblock bzw. dem
Heißwasserbad entnehmen und in eine Zentrifuge einsetzen. Die
Röhrchen bei 10.000 x g 10 Minuten lang zentrifugieren. Für den Nachweis
des Mannan-Antigens wird der Überstand verwendet.
6. Die Überstände wie folgt testen. Nach der Behandlung des Serums muss
der Test so bald wie möglich durchgeführt werden. Falls nach der Analyse
der Ergebnisse eine Wiederholung des Tests erforderlich ist, muss ein
weiterer Serumaliquot für den Test vorbehandelt werden.
(*) Die Einhaltung der vorgeschriebenen Temperatur und Verweilzeiten sowie
die Verwendung der empfohlenen Materialien ist für eine erfolgreiche
Durchführung des Tests von entscheidender Bedeutung. Verlassen Sie sich
nicht auf die vom Gerät angezeigte Temperatur. Überprüfen Sie mit Hilfe eines
kalibrierten Thermometers, das in ein Röhrchen, das Mineralöl enthält,
eingeführt wird, ob die Temperatur den Spezifikationen entspricht: In einem
Röhrchen eines Heizblocks müssen 120°C und in einem Röhrchen eines
Heißwasserbades müssen 100°C erreicht werden.
Bitte beachten :
- Alle gemäß diesem Verfahren behandelten Serumproben können zur
Durchführung des Platelia Aspergillus EIA-Tests verwendet werden, da die
Verfahren zur Vorbehandlung des Serums für beide Tests identisch sind.
- Die Seren (Kontrollen, Bereichspunkte und Testproben) nach der
Behandlung nicht lagern.
71

72
EIA-VerfahrenA
Bitte das Testverfahren strikt befolgen.
Es sollten die GLP-Richtlinien beachtet werden.
1. Alle Reagenzien mindestens 15 Minuten vor der Verwendung auf
Raumtemperatur (18-25°C) bringen.
2. Arbeitswaschlösung, Substrat-Chromogen-Reaktionslösung und negative
und positive Kontrollen sowie die Bereichspunkte vorbereiten.
3. Zur Identifizierung der Testseren, Kontrollen und Bereichspunkte in der
Mikrotiterplatte ein Pipettierschema erstellen.
Quantitatives Verfahren :
Die Kontrollseren und Bereichspunkte (0,25, 0,50, 1,0 und 2,0 ng/mL) können
gemäß folgendem Plan pipettiert werden:
• A1: Negatives Kontrollserum (R3)
• B1: 0,25 ng/mL-Bereichspunkt
• C1: 0,50 ng/mL-Bereichspunkt
• D1: 1,0 ng/mL-Bereichspunkt
• E1: 2,0 ng/mL-Bereichspunkt (R4)
• F1: Positives Kontrollserum (R5)
• G1: Positives Kontrollserum (R5)
Qualitatives Verfahren :
Die Kontrollseren und Bereichspunkte (0,25 und 0,5 ng/mL) können gemäß
folgendem Plan pipettiert werden:
• A1: Negatives Kontrollserum (R3)
• B1: 0,25 ng/mL-Bereichspunkt
• C1: 0,5 ng/mL-Bereichspunkt (Kalibratorserum)
• D1: 0,5 ng/mL-Bereichspunkt (Kalibratorserum)
• E1: Positives Kontrollserum (R5)
4. Plattenhalter und Streifen der Mikrotiterplatte (R1) aus dem Schutzbeutel
nehmen. Streifen, die nicht verwendet werden, wieder in den Beutel mit
Trockenmittel stecken und den Beutel wieder verschließen.
5. Vor der Verwendung den Inhalt des Konjugatfläschchens (R6) durch
Umdrehen homogenisieren. 50 µL Konjugat in jede Vertiefung geben.
Anschließend wie oben beschrieben 50 µL behandelten Serumüberstand in
jede Vertiefung geben. Vor Zugabe des Konjugats keine Serumproben in die
Vertiefungen geben.
6. Die Platte mit Folie oder Ähnlichem abdecken, um eine Verdunstung zu
vermeiden. Sicherstellen, dass die gesamte Oberfläche wasserdicht
abgedeckt ist.
7. Die Mikrotiterplatte bei 37°C (± 1°C) in einem Trockeninkubator für die
Dauer von 90 ± 5 Minuten inkubieren.

8. Folie abnehmen. Den Inhalt aller Vertiefungen in einen Behälter für infektiöse
Abfälle (mit Natriumhypochlorit) absaugen. Die Platte fünfmal mit
mindestens 370 µL Arbeitswaschlösung waschen. Nach dem letzten
Waschgang die Mikrotiterplatte umdrehen und vorsichtig auf Saugpapier
ausklopfen, um die verbleibende Flüssigkeit zu entfernen.
9. Rasch 200 µL Substrat-Chromogen-Reaktionslösung (R8 + R9), abseits von
starker Lichteinwirkung, in jede Vertiefung pipettieren.
10. Die Mikrotiterplatte lichtgeschützt bei Raumtemperatur (18 - 25°C)
30 ± 5 Minuten lang inkubieren. Während diesem Inkubationsschritt keine
Klebefolie verwenden.
11. 100 µL Stopplösung (R10) in der gleichen Reihenfolge wie die Substrat-
Chromogen-Reaktionslösung zusetzen. Gründlich mischen.
12. Den Boden jeder Platte sorgfältig abwischen.
13. Die optische Dichte (OD) jeder Vertiefung bei 450 nm ablesen (Referenzfilter
620/630 nm). Die Mikrotiterplatten müssen innerhalb von 30 Minuten nach
Zugabe der Stopplösung abgelesen werden.
11- QUALITÄTSKONTROLLE (GÜLTIGKEITSKRITERIEN)
Quantitatives Verfahren
Für jeden Test auf jeder Mikrotiterplatte Kontrollseren und Bereichspunkte
verwenden. Für einen gültigen Test müssen folgende Kriterien erfüllt sein:
• Extinktionswert:
0,300 < OD des 0,5 ng/ml-Bereichspunktes < 1,100
• Verhältnis:
OD (2,0 ng/mL-Bereichspunkt) / OD (0,5 ng/mL-Bereichspunkt) > 2,1
OD (1,0 ng/mL-Bereichspunkt) / OD (0,5 ng/mL-Bereichspunkt) > 1,25
OD (0,25 ng/mL-Bereichspunkt) / OD (0,5 ng/mL-Bereichspunkt) < 0,85
OD (R3) / OD (0,25 ng/mL-Bereichspunkt) ≤ 0,80
• Mannan-Konzentration:
R5-Konzentration gleich der auf dem Fläschchen angegebenen
Konzentration ± 20%.
Qualitatives Verfahren
• Berechnung des Grenzwerts (GW)
Die Extinktionswerte jeder Vertiefung, die den 0,5 ng/mL-Bereichswert
enthält, addieren und durch 2 dividieren.
73

• Gültigkeitskriterium:
0,300 < GW < 1,100
OD R5 > GW
OD R3 < 0,7 GW
OD (0,25 ng/mL-Bereichspunkt) < 0,85 GW
12- INTERPRETATION DER ERGEBNISSE
QUANTITATIVES VERFAHREN
Erstellung der Standardkurve
Die Standardkurve wird durch die 4 mit dem Kalibratorserum R4 erstellten
Bereichspunkte 2,0, 1,0, 0,5 und 0,25 ng/mL gezogen. Die positiven (R5) und
negativen (R3) Kontrollen werden nicht für die Kurve berücksichtigt. Um eine
maximale Präzision zu erreichen, eine S-Kurve mit Extrapolation durch
Auftragen der Mannan-Konzentration in ng/ml auf der x-Achse (logarithmische
Skala) und der optischen Dichte auf der y-Achse (lineare Skala) erstellen.
Ermöglicht der Plattenleser diese Art der Darstellung nicht, die Kurve durch
Verbinden der verschiedenen Bereichspunkte erstellen.
Bestimmung der Mannan-Konzentration in den Testseren
Die Kalibrierungskurve kann zur Bestimmung der Mannan-Antigen-
Konzentration, ausgedrückt in ng/mL, für jede Testprobe verwendet werden.
Interpretation der Ergebnisse
• Seren mit einer Mannan-Konzentration unter 0,25 ng/mL (K < 0,25)
werden als "negativ" für das Vorliegen von Mannan-Antigen betrachtet.
• Seren mit einer Mannan-Konzentration zwischen 0,25 und 0,5 ng/mL
(0,25 ≤ K < 0,5) werden als "mäßig" für das Vorliegen von Mannan-
Antigen betrachtet.
• Seren mit einer Mannan-Konzentration gleich oder über 0,5 ng/mL
(K ≥ 0,5) werden als "positiv" für das Vorliegen von Mannan-Antigen
betrachtet.
• Die zur Erstellung der Kalibrierungskurve verwendeten Bereichspunkte
ermöglichen keine präzise Bestimmung von Konzentrationen über
2,5 ng/mL. Der Test sollte nach Verdünnung des Serums im Verhältnis
1/5 mit negativem Serum (R3) wiederholt werden, um eine präzisere
Bestimmung der Konzentration in stark positiven Seren zu erreichen.
Hinweis: Platelia Candida Ag ist als Hilfsmittel für die Diagnose einer
invasiven Candidiasis vorgesehen. Mit Platelia Candida Ag erzielte positive
Ergebnisse sollten in Verbindung mit anderen diagnostischen Verfahren wie
mikrobiologischen Kulturtests, histologischen Untersuchungen von
Biopsieproben und bildgebenden Verfahren betrachtet werden.
74

Zur Erhöhung der Sensitivität und um gegebenenfalls möglichst früh ein
positives Ergebnis zu erzielen, wird eine regelmäßige Überwachung von
Patienten mit hohem Risiko empfohlen.
QUALITATIVES VERFAHREN
Interpretation der Ergebnisse
• OD der Probe < OD des 0,25 ng/mL-Bereichspunktes: Die Seren werden
als "negativ" für das Vorliegen von Mannan-Antigen betrachtet.
• OD des 0,25 ng/mL-Bereichspunktes ≤ OD der Probe < GW: Die Seren
werden als "mäßig" für das Vorliegen von Mannan-Antigen betrachtet.
• OD der Probe ≥ GW: Die Seren werden als "positiv" für das Vorliegen von
Mannan-Antigen betrachtet.
Hinweis: Platelia Candida Ag ist als Hilfsmittel für die Diagnose einer
invasiven Candidiasis vorgesehen. Mit Platelia Candida Ag erzielte positive
Ergebnisse sollten in Verbindung mit anderen diagnostischen Verfahren wie
mikrobiologischen Kulturtests, histologischen Untersuchungen von
Biopsieproben und bildgebenden Verfahren betrachtet werden.
Zur Erhöhung der Sensitivität und um gegebenenfalls möglichst früh ein
positives Ergebnis zu erzielen, wird eine regelmäßige Überwachung von
Patienten mit hohem Risiko empfohlen.
Bitte beachten:
Um die Intensität positiver Ergebnisse zu bestimmen, kann ein Index (I)
berechnet werden:
I = OD des positiven Serums / GW
Über den Index können Ergebnisse im semiquantitativen Verfahren
ausgedrückt werden.
13- GRENZEN DES VERFAHRENS
1. Aufgrund der sehr geringen Konzentration und dem raschen Verschwinden
von Mannan während der Infektion kann durch ein negatives
Testergebnis eine Diagnose einer invasiven Candidiasis nicht völlig
ausgeschlossen werden.
2. Ein negatives Testergebnis für Mannan-Antigen muss in Zusammenhang
mit den Ergebnissen von Mannan-Antikörper-Tests interpretiert werden:
Selbst bei invasiver Candidiasis ist das Antigen nur sehr schwierig bei für
Anti-Mannan-Antikörper positiven Patienten nachzuweisen (siehe
Abschnitt 14: Spezifische Leistungsmerkmale).
75

3. Die Leistung des Mannan-Antigen-Nachweises im Serum steht im Zusammenhang
mit der Häufigkeit der vorgenommenen Test bei jedem Patienten. 4
Zur Erhöhung der Sensitivität und um gegebenenfalls möglichst früh ein
positives Ergebnis zu erzielen, wird eine regelmäßige Überwachung von
Patienten mit hohem Infektionsrisiko und die Analyse auf Anti-Mannan-
Antikörper empfohlen.
4. Beim Nachweis von Mannan-Antigen muss das Verfahren des Platelia
Candida Ag und der Interpretation der Ergebnisse befolgt werden. Vor der
Durchführung des Tests sollten Benutzer dieses Kits die Packungsbeilage
sorgfältig lesen. Insbesondere muss das Testverfahren für die Pipettierung
der Proben und Reagenzien, der Plattenwaschgänge und der
Inkubationszeiten genau beachtet werden.
5. Wird die Probe oder das Reagenz nicht gemäß der Testanleitung
zugegeben, kann dies zu einem falsch negativen Ergebnis führen. Bei
Verdacht auf eine invasive Candidiasis oder einen Fehler im Verfahren
sollte erneut getestet werden.
6. Bei einer schlechten Handhabung der Mikrotiterplatte oder einem
schlechten Pipettieren der Reagenzien kann es zu einer Kontamination der
Vertiefungen mit negativer Probe durch Flüssigkeitsspritzer mit positiver
Kontrolle/Patientenprobe aus anderen Vertiefungen kommen.
7. Es wurde von Kreuzreaktionen bei Patienten berichtet, die Infusionen mit
gewissen Serien an Hydroxyethylstärke-Plasmaexpandern erhielten (z. B.
Hesteril 6%), die bei der Behandlung von Kreislaufschwäche eingesetzt
werden: Hypovolämie, Blutungsschock, septischer Schock.
14- SPEZIFISCHE LEISTUNGSMERKMALE
14.1 QUANTITATIVES VERFAHREN
A) Reproduzierbarkeitsstudien
• Intraassay-Varianz:
4 Seren (1 negatives, 1 mäßig positives mit 0,48 ng/mL und zwei positive
Seren mit Konzentrationen von 0,69 ng/mL und 1,39 ng/mL) wurden 30 fach
getestet. Die Variationskoeffizienten lagen bei 3,1%, 6,9%, 9,1% bzw. 7,0%.
• Interassay-Varianz:
8 negative Seren und 4 positive Seren wurden in 5 Serien über 5 Wochen
getestet. Die Variationskoeffizienten waren für die Konzentrationen der
positiven Seren < 20% und für die OD der negativen Seren < 13%.
76

B) Klinischer Test
SPEZIFITÄT
In der folgenden Tabelle ist die Spezifität angegeben:
Patientenkategorie
Anzahl der
Patienten
(Anzahl der
Seren)
Konzentration (ng/mL)
C < 0,25 0,25 ≤ C < 0,5 C ≥ 0,5
Nicht hospitalisiert 184 (184) 183 (99,5%) 1 (0,5%)
Hospitalisiert, nicht
kolonisiert mit : 151 (200) 140 (92,8%) 7 (4,6%) 4 (2,6%)
- Morbus Crohn 52 (52) 49 (98,1%) 3 (1,9%)
- Ulzeröse Kolitis 43 (43) 41 (95,4%) 1 (2,3%) 1 (2,3%)
- Aspergillose 26 (35) 23 (88,5%) 1 (3,8%) 2 (7,7%)
- Pneumocystose 4 (4) 4 (100%)
- Kryptokokkose 13 (13) 12 (92,3%) 1 (7,7%)
Hospitalisiert, kolonisiert
mit Candida:
41 (160) 35 (85,3%) 4 (9,8%) 2 (4,9%)
SENSITIVITÄT
Der klinische Test zur Evaluierung der Sensitivität des Platelia Candida Ag
wurde in drei Universitätskliniken in Frankreich durchgeführt. Die Studie wurde
retrospektiv unter Verwendung von insgesamt 366 Serumproben von 106
Patienten unterschiedlicher Stationen durchgeführt: Chirurgie, Hämatologie,
Intensivstation, Verbrennungen...
Candida -Hefen wurden aus Blutkulturen oder tiefen Proben dieser Patienten
isoliert. 8, 9
In dieser Patientenpopulation lag die Gesamt-Sensitivität von Platelia
Candida Ag bei 51,5% (ausschließlich der Seren mit einer Mannan-Antigen-
Konzentration zwischen 0,25 und 0,5 ng/mL, die als mäßig für das Vorliegen
von Mannan-Antigen betrachtet werden: 6,6% der Patienten).
77

Je nach isolierter Candida-Spezies variierte die Sensitivität gemäß der
folgenden Tabelle:
Isolierte
Candida-Spezies
Anzahl der Patienten
(Anzahl der Seren)
C ≥ 0,5
Sensitivität
C ≥ 0,5 et
0,25 ≤ C < 0,5
C. tropicalis 10 (72) 70,0 % 70,0 %
C. glabrata 12 (31) 58,3 % 58,3 %
C. albicans 64 (208) 52,5 % 60,3 %
C. kefyr 2 (5) 50,0 % 50,0 %
C. parapsilosis 10 (29) 37,5 % 57,5 %
C. krusei 8 (21) 20,0 % 20,0 %
Die Sensitivität hängt von der Anzahl und der Häufigkeit der Tests der
Proben ab. 13
Durch diese klinischen Studien wurde auch die Bedeutung der Kombination
des Nachweises von Mannan-Antigen mit Platelia Candida Ag mit dem
Nachweis von Anti-Mannan-Antikörper durch Platelia Candida Ab/Ac/Ak
gezeigt.
Die Patienten können in 2 signifikant unterschiedliche Populationen unterteilt
werden (Chi-Quadrat-Test, p < 0,0005), wie durch die Ergebnisse der
folgenden Tabelle dargestellt:
• Patienten mit negativem Nachweis von Anti-Mannan-Antikörper: Bei
vorliegenden C. albicans-Infektionen liegt die Sensitivität von Platelia
Candida Ag bei 78,8% und für kombinierte Candida -Spezies bei 66,6%.
• Patienten mit positivem Nachweis von Anti-Mannan-Antikörper: Der
Nachweis von Mannan-Antigen ist schwieriger.
Infizierende Spezies
(Anzahl der Patienten)
Kombinierte Candida-Spezies
(106)
Sensitivität von Platelia Candida Ag
Für Anti-Mannan- Für Anti-Mannan-
Antikörper Antikörper
negative Patienten positive Patienten
Alle Patienten
66,6 % 17,5 % 51,5 %
C. albicans (64) 78,8 % 16,1 % 52,5 %
Daher müssen bei der Interpretation des Ergebnisses des Platelia Candida
Ag-Tests Informationen zum Immunstatus des Patienten in Bezug auf Candida
-Mannan berücksichtigt werden.
78

Durch Kombination des serologischen Nachweises von Mannan-Antigen und
Anti-Mannan-Antirkörper wird eine Sensitivität von 84,8% erzielt
(ausschließlich der 6,6% Patienten mit mäßiger Konzentration an Mannan-
Antigen).
Einige Patienten weisen jedoch eine positive Reaktion bei beiden Markern zu
verschiedenen Zeitpunkten während des gleichen Infektionsstadiums auf. Die
Prognose einer Infektion kann mit dem Verhältnis zwischen Mannanämie und
der Reaktion auf Anti-Mannan-Antikörper im Zusammenhang stehen 13 .
14.2 QUALITATIVES VERFAHREN
A) Reproduzierbarkeitsstudien
• Intraassay-Varianz:
4 Seren (1 negatives, 1 mäßig positives mit 0,95 index und zwei positive Seren
mit index von 1,24 und 2,00) wurden 30fach getestet. Die prozentualen
Variationskoeffizienten (CV%) lagen bei 3,1%, 7,2%, 5,9% und 5,9%.
• Interassay-Varianz:
10 positive Seren und 4 mäßige Seren wurden in 6 Messreihen getestet. Die
prozentualen Variationskoeffizienten (CV%) lagen < 15% für die
Konzentrationen positiver und mäßiger Seren.
B) Klinischer Test
SPEZIFITÄT - SENSITIVITÄT
In Anbetracht der Tatsache, dass Konzentrationen ≥ 0,5 ng/mL oder
< 0,25 ng/mL für Seren im quantitativen Verfahren den positiven bzw.
negativen Seren im qualitativen Verfahren entsprechen, stimmt die Leistung
des Tests im qualitativen Verfahren mit der im Kapitel “Quantitatives
Verfahren” aufgeführten Leistung überein.
15- QUALITÄTSKONTROLLE DES HERSTELLERS
Alle von der Firma Bio-Rad hergestellten Reagenzien unterliegen einem
Qualitätssicherungssystem vom Rohstoffeingang bis zur Vermarktung der
Fertigprodukte.
Jede Fertigproduktcharge wird einer Qualitätskontrolle unterzogen und nur
dann verkauft, wenn sie den Freigabekriterien entspricht.
Die Unterlagen bezüglich Herstellung und Kontrolle der einzelnen Chargen
werden bei Bio-Rad aufbewahrt.
79

16- BIBLIOGRAPHY
1. FAILLE, C., D. W. MACKENZIE, J. C. MICHALSKI, and D. POULAIN.
1992. Evaluation of an enzyme immunoassay using neoglycolipids
constructed from Candida albicans oligomannosides to define the
specificity of anti- mannan antibodies. Eur. J. Clin. Microbiol. Infect. Dis.
11: p. 438-46.
2. FRIDKIN, S. K. and W. R. JARVIS. 1996. Epidemiology of nosocomial
fungal infections. Clin. Microbiol. Rev. 9: p. 499-511.
3. FUKAZAWA, Y. 1989. Antigenic structure of Candida albicans.
Immunochemical basis of the serologic specificity of the mannans in
yeasts. Immunol. Ser. 47: p. 37-62.
4. HERENT, P., D. STYNEN, F. HERNANDO, J. FRUIT, and D. POULAIN.
1992. Retrospective evaluation of two latex agglutination tests for
detection of circulating antigens during invasive candidosis. J. Clin.
Microbiol. 30: p. 2158-64.
5. JACQUINOT, P. M., Y. PLANCKE, B. SENDID, G. STRECKER, and
D. POULAIN. 1998. Nature of Candida albicans-derived carbohydrate
antigen recognized by a monoclonal antibody in patient sera and
distribution over Candida species. FEMS Microbiol. Lett. 169: p. 131-8.
6. PONTON, J., M. MORAGUES, and G. QUINDOS. 2002. Non-Culture-
Based Diagnostics, p. 395-425. In R. Calderone (ed.), Candida and
Candidiasis. ASM Press, Washington, D.C.
7. RUHNKE, M. and G. MASCHMEYER. 2002. Management of mycoses in
patients with hematologic disease and cancer - review of the literature.
Eur. J. Med. Res. 7: p. 227-235.
8. SENDID, B., J. L. POIROT, M. TABOURET, A. BONNIN, D. CAILLOT,
D. CAMUS, and D. POULAIN. 2002. Combined detection of
mannanaemia and antimannan antibodies as a strategy for the
diagnosis of systemic infection caused by pathogenic Candida species.
J. Med. Microbiol. 51: p. 433-442.
9. SENDID, B., M. TABOURET, J. L. POIROT, D. MATHIEU, J. FRUIT, and
D. POULAIN. 1999. New enzyme immunoassays for sensitive detection
of circulating Candida albicans mannan and antimannan antibodies:
useful combined test for diagnosis of systemic candidiasis. J. Clin.
Microbiol. 37: p. 1510-1517.
19

10. TIRABOSCHI, I. N., J. E. BENNETT, C. A. KAUFFMAN, J. H. REX, C.
GIRMENIA, J. D. SOBEL, and F. MENICHETTI. 2000. Deep Candida
infections in the neutropenic and non-neutropenic host: an ISHAM
symposium. Med. Mycol. 38 Suppl 1: p. 199-204.
11. TRINEL, P. A., C. FAILLE, P. M. JACQUINOT, J. C. CAILLIEZ, and D.
POULAIN. 1992. Mapping of Candida albicans oligomannosidic
epitopes by using monoclonal antibodies. Infect. Immun. 60: p. 3845-
51.
12. VERWEIJ, P. E., D. POULAIN, T. OBAYASHI, T. F. PATTERSON, D. W.
DENNING, and J. PONTON. 1998. Current trends in the detection of
antigenaemia, metabolites and cell wall markers for the diagnosis and
therapeutic monitoring of fungal infections. Med. Mycol. 36 Suppl 1:
p. 146-155.
13. YERA, H., B. SENDID, N. FRANCOIS, D. CAMUS, and D. POULAIN.
2001. Contribution of serological tests and blood culture to the early
diagnosis of systemic candidiasis. Eur. J. Clin. Microbiol. Infect. Dis. 20:
p. 864-870.
20

102

103

Bio-Rad
3, boulevard Raymond Poincaré
92430 Marnes-la-Coquette France
Tel. : +33 (0) 1 47 95 60 00 03/2008
Fax.: +33 (0) 1 47 41 91 33 code: 880018