MUELLER-HINTON 56137 - 63824 - 63901 - 64884 ... - Bio-Rad

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Bei Gebrauch und vor dem Pipettieren können dem Medium folgende Zusätze hinzugefügt werden: • 5% Schafs- oder Pferdeblut für Mueller Hinton + Blutmedium, • 5% Natriumchlorid (NaCl) für Mueller-Hinton + 5% NaCl-Medium. 5- LAGERUNG • Gebrauchsfertiges Medium: bei +2 - 20°C. • Gebrauchsfertiges Medium (pipettierfertig): bei +2 - 25°C. • Gebrauchsfertiges Medium: bei +2 - 8°C. • Dehydriertes Medium: in fest verschlossenen Gefäßen an einem trockenen Ort bei +15 - 25°C. Das Verfallsdatum und die Chargennummer sind auf der Verpackung angegeben. 6- GEBRAUCHSANWEISUNG Material: Geliefertes Material: Mueller-Hinton-Medium mit oder ohne Zugabe von Schafsblut. Zusätzlich benötigtes Material: • Opazitätsstandard entsprechend einem Mac Farland 0,5-Standard. • Laborausstattung für Antibiogramm mittels Agardiffusionsmethode. Vorsichtsmaßnahmen bei der Verwendung: Die Gebrauchsanweisung der aktuellen Richtlinien (CLSI 7,8 , CA-SFM 9 , EUCAST 10,11,12 ) befolgen. Beachten Sie stets die aktuellen Methoden und Vorsichtsmaßnahmen zum Schutz vor mikrobiologischen Gefahren. Beimpfung: Mit einer frischen, auf Agarmedium gewachsenen Reinkultur eine Suspension mit einer Trübung entsprechend dem MacFarland Standard 0,5 vorbereiten. Das Verfahren für die Standardisierung des Inokulums ist in den verschiedenen, von CLSI, CA-SFM und EUCAST veröffentlichten Richtlinien für die Agardiffusionsmethode und Agarverdünnungsmethode beschrieben. Wird das Medium bei 4°C aufbewahrt, muss es auf Raumtemperatur (18-30°C) gebracht werden. Wird auf der Oberfläche übermäßige Feuchtigkeit beobachtet, sollten die Schalen vor der Verwendung in einem Inkubator bei 35°C 10 bis 30 Minuten getrocknet werden. DIFFUSIONSMETHODE Beimpfung durch Begießen (vom CA-SFM empfohlene Methode): Mit dem standardisierten Inokulum das Verfahren des CA-SFM hinsichtlich Verdünnung der anfänglichen Suspension entsprechend der zu testenden Bakterienspezies befolgen. Die gewonnene Suspension auf die gesamte Schale gießen und anschließend überschüssige Suspension entfernen. Beimpfung durch Ausstreichen (vom CLSI, CA-SFM, EUCAST empfohlene Kirby-Bauer-Methode): Zur Beimpfung der Schale mit dem standardisierten Inokulum die CLSI, CA-SFM, EUCAST -Richtlinien befolgen: • Einen sterilen, nicht-toxischen Tupfer in die Suspension eintauchen. • Überschüssige Suspension durch leichtes Drehen des Tupfers gegen die Gefäßwand entfernen. • Die Schale mit dem Tupfer beimpfen, um eine Kultur konfluenter Kolonien zu erhalten. Die Blättchen mit einem Dispenser oder einer Pinzette durch leichtes Drücken auflegen. AGARVERDÜNNUNGSMETHODE Die Beimpfung und das Testverfahren sind in den CLSI- und CA-SFM-Richtlinien beschrieben. Inkubation: Die aktuellen CLSI, EUCAST und CA-SFM-Richtlinien befolgen. Die Inkubationsbedingungen können je nach getesteter Bakterienspezies variieren. 7- INTERPRETATION DER ERGEBNISSE Die Interpretation des Antibiogramms mittels Blättchendiffusionsmethode bzw. Agarverdünnungsmethode ist in den regelmäßig veröffentlichten CA-SFM, EUCAST und CLSI-Richtlinien beschrieben. 8- LEISTUNG/QUALITÄTSKONTROLLE DES TESTS • Erscheinung des gebrauchsfertigen Mueller-Hinton-Mediums: heller bis opaleszenter, bernsteinfarbener Agar. • Erscheinung des dehydrierten Mueller-Hinton-Mediums: beigefarbenes Pulver. • Erscheinung des gebrauchsfertigen Mueller-Hinton + Blut-Mediums: roter Agar. 2
Die Leistungsmerkmale des Wachstums des Mueller-Hinton-Mediums mit oder ohne Zusatz von Schafsblut werden mit folgenden Stämmen überprüft: STÄMME KULTURERGEBNIS NACH 24 Stunden bei 37°C Escherichia coli ATCC 25922 Zufriedenstellendes Wachstum Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 Zufriedenstellendes Wachstum Staphylococcus aureus ATCC 25923 Zufriedenstellendes Wachstum Streptococcus pneumoniae ATCC 49619 Zufriedenstellendes Wachstum Haemophilus influenzae NCTC 8468/ CIP 54.94 Zufriedenstellendes Wachstum Die Zusammensetzung des MH Mediums wird mit folgenden Stämmen und Blättchen überprüft (unvollständige Liste): STÄMME Escherichia coli ATCC 25922 / CIP 76.24 - Amikacin 30 µg - Ampicillin 10 µg - Tetracyclin 30 µg Staphylococcus aureus ATCC 25923 - Amikacin 30 µg - Cephalothin 30 µg - Tetracyclin 30 µg Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 / CIP 76110 - Amikacin 30 µg - Cefotaxim 30 µg - Ciprofloxacin 5 µg ANTIBIOGRAMM Entsprechend den aktuellen Spezifikationen für Hemmhofdurchmesser (CLSI bzw. CA-SFM) (8, 9) . Die Zusammensetzung des MHB Mediums wird mit folgenden Stämmen und Blättchen überprüft (unvollständige Liste): STÄMME Streptococcus pneumoniae ATCC 49619 - Erythromycin 15 µg - Penicillin 10 UI - Tetracyclin 30 µg Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 - Amikacin 30 µg - Cefotaxim 30 µg - Ciprofloxacin 5 µg ANTIBIOGRAMM Entsprechend den aktuellen Spezifikationen für Hemmhofdurchmesser (CLSI) (8) . Die Zusammensetzung des MHF Mediums wird mit folgenden Stämmen und Blättchen überprüft (unvollständige Liste): STÄMME Streptococcus pneumoniae ATCC 49619 - Erythromycin 15 µg - Penicillin 10 UI - Tetracyclin 30 µg Haemophilus influenzae NCTC 8468/ CIP 54.94 - Ampicillin 2 µg - Cefaclor 30 µg - Tetracycline 30 µg ANTIBIOGRAMM entsprechend den aktuellen EUCAST Spezifikationen für Hemmhofdurchmesser (12) . 9- QUALITÄTSKONTROLLE DES HERSTELLERS Alle von der Firma Bio-Rad hergestellten Reagenzien unterliegen einem Qualitätssicherungssystem vom Rohstoffeingang bis zur Vermarktung der Fertigprodukte. Jede Fertigproduktcharge wird einer Qualitätskontrolle unterzogen und nur dann verkauft, wenn sie den Freigabekriterien entspricht. Die Unterlagen bezüglich Herstellung und Kontrolle der einzelnen Chargen werden bei Bio-Rad aufbewahrt. 10- GRENZEN DES TESTS Um interpretierbare Ergebnisse zu erhalten, müssen immer frische Reinkulturen verwendet werden. Aufgrund spezifischer Anforderungen an die Nährstoffe wachsen manche Stämme auf diesem Medium unter Umständen nicht. In folgendem Fall sollte ein entsprechendes Medium verwendet werden: HTM für Haemophilus, Mueller-Hinton mit Zugabe von 5% Schafsblut für Streptococcus pneumoniae und hämolytische Streptokokken, GC-Agar für Neisseria gonorrhoeae. Manche Faktoren können die Ergebnisse beeinflussen (Menge des Inokulums, Inkubationszeit und -atmosphäre, etc.). Daher ist es unerlässlich, das in den aktuellen Richtlinien beschriebene Protokoll (CLSI, CA-SFM, EUCAST) zu befolgen. Mueller-Hinton-Frischblut-Agar wird nicht für das Antibiogramm von S. pneumoniae gegen Cotrimoxazol empfohlen (7) . 3
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