Biochemie Praktikum I

Praktikumsskript Biochemie für Biologen-Bachelor SS2011
Michaelis-Menten-Kinetik
Der Test wird in 1 ml Plastikküvetten am Eppendorf-Photometer bei 366 nm und
Raumtemperatur durchgeführt.
Die Testlösung enthält: 67 mM Phosphatpuffer pH 7.2 950 µl
Pyruvatlösg (2.75 mg/ml) 20 µl
Enzymlösg. (25 µg/ml) 10 µl
NADH-Lösg. aus Verdünnungsreihe 20 µl
Stammlösung vorbereiten: 67 mM Phosphatpuffer pH 7.2 9.5 ml
Pyruvatlösg (2.75 mg/ml) 200 µl
Enzymlösg. (25 µg/ml) 100 µl
Start der Reaktion durch Zugabe der NADH-Lösung.
Verdünnungsreihe:
NADH-Stammlösg: 15,5 mM (11 mg/ml)
Verdünnungsfaktor: 1 2 4 8 10 20 30 40
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Schreiberempfindlichkeit
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NADH-Konz. [mM]:
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NADH-Konz. im Test [mM]:
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Reaktionsgeschw. V [U/ml]:
Bestimmumg der Reaktionsgeschwindigkeit (d.h. Volumenaktivität)
Extinktionskoeffizient: 3.3 l/(mmol⋅cm)= 3.3 ml/(µmol⋅cm)
Schichtdicke d= 1 cm
∆E
V T ⋅ n
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