1 1. Leuchtbakterientest nach DIN 38412 Prinzip: Bestimmung der ...

Studiengang Ingenieurökologie Praktikum Umweltbiotechnologie Dr. Uta Langheinrich
Durchführung:
Teil A:
- Herstellen einer Verdünnungsreihe bis zur Stufe 10 -5
- 1 ml Bodensuspension, z.B. der Verdünnungsstufe 10 –5 werden in eine Petrischale
pipettiert und mit einer dünnen Schicht sterilem Nähragar (2-5 mm) überschichtet
- mit 10 –4 , 10 –3 und 10 –2 genau so verfahren
- (Inkubation: 6 Tage bei 30 °C )
Teil B:
- eine Platte gießen und erstarren lassen
- Beimpfen der Stärkeplatte mit Stamm A, B, C mit einfachem Ausstrich
- 6 Tage bei 30 °C bebrüten (Vorsicht, Agar ist sehr weich!)
Auswertung:
Nach Überschichten der Platte mit einigen Tropfen Lugolscher Lösung kann man verschiedene
Abbauphasen feststellen:
Um die Kolonien der stärkehydrolysierenden Mikroorganismen bilden sich farblose oder
rotbraun gefärbte Zonen. Die farblosen Zonen zeigen eine Stärkehydrolyse zu Zuckern,
die rotbraunen zu Erythrodextrin (Zwischenstufe des Abbaus) an.
Bewerten Sie die Reaktion auf der Platte und das Stärkeabbaupotenzial der Bodenmikroorganismen
allgemein (Teil A) und der Teststämme (Teil B).
5.5. Bestimmung der Konzentration von Fettspaltern in einem Boden
Fettspaltung durch Teststämme
Prinzip:
In diesem Versuch sollen Mikroorganismen, die Lipasen bilden, nachgewiesen werden.
Lipasen sind Enzyme, die Fette in Glycerin und Fettsäuren spalten. Dadurch verursachen
sie Ranzigkeit von Speisefetten oder fetthaltigen Cremes. Auf diesem Wege werden
im Boden Mineralölkontaminationen abgebaut.
Geräte und Chemikalien:
Bodenprobe bzw. Verdünnungen aus V 5.4, Stämme A, B, C
sterile Röhrchen und Petrischalen (5), Spatel, Pipetten
Tributyrin – Agar, steril, flüssig
1 Platte DEV – Nährboden zur Stammhaltung
Durchführung:
Teil A:
- analog V 5.4 1 ml der entsprechenden Konzentration in die Petrischale pipettieren
- 10 min auf 37 °C erwärmen (Brutschrank)
- in die vorgewärmten Petrischalen etwa 6 ml Tributyrin – Agar gießen (nicht höher als
2 mm) und durch vorsichtiges Schwenken mit der Probe vermischen
- Achtung: Wegen der geringen Agarmenge und der niedrigen Temperatur des Agars
muß zügig gearbeitet werden, um ein vorzeitiges Erstarren zu vermeiden. Das
Durchmischen von Probe und Agar muß jedoch gründlich erfolgen, damit die in der
Probe enthaltenen MO gleichmäßig verteilt werden.
Bebrütung: 3 Tage, aerob, dunkel
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