1 1. Leuchtbakterientest nach DIN 38412 Prinzip: Bestimmung der ...

Studiengang Ingenieurökologie Praktikum Umweltbiotechnologie Dr. Uta Langheinrich
Durchführung
1. Oberflächenwasser
Stellen Sie eine Verdünnungsreihe aus dem Oberflächenwasser bis 10 –2 her. (9 ml steriles Wasser und 1
ml Probe bzw. vorhergehende Konzentration).
1.1 Ermitteln Sie Koloniezahlen (22°C, 36°C) durch das Plattenverfahren.
Beschriften Sie 3 Platten PC – Nährmedium: Name / Vers. 1.1 / 22°C / 10 0 (bzw. 10 –1 u. 10 –2 ).
Beschriften Sie 3 Platten PC – Nährmedium: Name / Vers. 1.1 / 36°C / 10 0 (bzw. 10 –1 u. 10 –2 ).
Beimpfen Sie die Platten mit je 0,1 ml der entsprechenden Konzentration und spateln Sie die Flüssigkeit
mittels Drigalsky – Spatel aus.
1.2 Bestimmen Sie Gesamtcoliforme und E. coli mittels MPN-Verfahren.
Je 3 Röhrchen Fluorocult – Bouillon mit 10 0 beschriften und mit je 1 ml dieser Konzentration beimpfen.
Mit den Konzentrationen 10 – 1 und 10 –2 genauso verfahren.
Ein 10. Röhrchen als Kontrolle aufstellen und mit 1 ml sterilem Wasser beimpfen.
1.3 Bestimmen Sie die Zahl der intestinalen Enterokokken mittels Filtrationsverfahren und Azid-
Agar-NKS
Beschriften Sie die Schale mit der Nährkartonscheibe (NKS: Azid-Agar nach SLANETZ und BARTLEY)
(Name, Vers. 1.3).
Pipettieren Sie ca. 3 ml steriles Wasser auf die Nährkartonscheibe, so dass diese gut angefeuchtet ist.
Legen Sie mit einer sterilen Pinzette einen sterilen Filter in das aufgeschraubte Filtrationsgerät ein und
bauen dieses wieder zusammen.
Entnehmen Sie mittels Vollpipette 100 ml Probe, pipettieren Sie diese in das Filtrationsgerät und filtrieren
Sie die Probe durch das Gerät. Nach dem Belüften („Abzug“ an Pumpe betätigen) wird mit etwas sterilem
LW gespült und wiederum filtriert. Nach erneutem Belüften wird der Filter entnommen und mit der karierten
Seite nach oben auf die NKS gelegt.
1.4 Verwenden Sie für weitere Bestimmungen das Dip-Stick-Verfahren:
Für Koloniezahlen, Gesamtcoliforme und E. coli: Envirocheck Contact C
Den Deckel des Röhrchens abschrauben und den Nährbodenträger entnehmen, ohne die Agarflächen zu
berühren.
Den Nährbodenträger 5 – 10 Sekunden in die Testflüssigkeit tauchen, so dass beide Agarflächen vollständig
benetzt sind. Überschüssige Flüssigkeit abtropfen lassen.
Den Nährbodenträger zurück in das Röhrchen geben und den Deckel zuschrauben, beschriften.
2. Trinkwasser
Entnehmen Sie mittels steriler Flasche ca. 400 ml Trinkwasser aus einem desinfizierten Wasserhahn.
(Nach DIN 38411 Teil 1 und DIN EN 25667 müssen Hähne abgeflammt werden. Hier: Desinfektion)
2.1 Ermitteln Sie Koloniezahlen (22°C, 36°C) durch das Filtrationsverfahren.
Beschriften Sie 2 PC-Platten: Name / Vers. 2.1. / 22°C bzw. 36 °C.
Legen Sie mit einer sterilen Pinzette einen sterilen Filter in das aufgeschraubte Filtrationsgerät ein und
bauen dieses wieder zusammen.
Messen Sie im Meßzylinder 100 ml Trinkwasser Ihrer Probe ab und pumpen Sie es durch das Gerät.
Nach dem Belüften („Abzug“ an Pumpe betätigen) wird der Filter entnommen und mit der karierten Seite
nach oben auf einen PC – Nährboden gelegt.
Für die 2. Inkubationstemperatur den gesamten Vorgang wiederholen.
2.2 Bestimmen Sie Gesamtcoliforme und E. coli mittels Filtrationsverfahren unter Verwendung einer
ENDO-Nährkartonscheibe.
Beschriften Sie die Schale mit der ENDO-Nährkartonscheibe (Name, Vers. 2.2.).
Pipettieren Sie ca. 3 ml steriles Wasser auf die Nährkartonscheibe, so daß diese gut angefeuchtet ist.
Filtrieren Sie 100 ml Trinkwasser (wie bei 2.1.) und legen Sie den Filter auf die Nährkartonscheibe.
Inkubation:
Koloniezahlen bei 22°C und 36 °C: 68 ± 4 h
Gesamtcoliforme, E. coli und int. Enterobakterien bei 36 °C: 24 bis max. 72 h
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