1 1. Leuchtbakterientest nach DIN 38412 Prinzip: Bestimmung der ...
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Studiengang Ingenieurökologie Praktikum Umweltbiotechnologie Dr. Uta Langheinrich<br />
6.Gram-Färbung: <strong>der</strong> Stämme A, B, C<br />
Wirkungsweise:<br />
Anilinfarbstoffe werden in <strong>der</strong> Zellwand von Mikroorganismen bei <strong>nach</strong>folgen<strong>der</strong><br />
Jodeinwirkung zu einem Farbe-Jod-Komplex gebunden.<br />
Bei grampositiven Mikroorganismen kann <strong>der</strong> Farbe-Jod-Komplex nicht mehr durch Entfärbemittel<br />
wie Alkohol o<strong>der</strong> Aceton aus <strong>der</strong> Zelle gelöst werden. Die Zelle bleibt blauviolett<br />
angefärbt.<br />
Bei gramnegativen Mikroorganismen wird <strong>der</strong> Farbe-Jod-Komplex gelöst und die Zelle<br />
durch Gegenfärbung rosa bis rot angefärbt.<br />
Vorbereitung - Herstellung eines Ausstriches:<br />
Auf einen sauberen (fettfreien) Objektträger wird ein sehr kleiner Tropfen Leitungswasser<br />
aufgebracht (im Becherglas).<br />
Mittels <strong>der</strong> ausgeglühten Impföse wird eine kleine Menge Koloniematerial im Tropfen<br />
verstrichen.<br />
Dann den Ausstrich lufttrocknen lassen (dauert ca. 10 min !, auf die Heizung legen)<br />
Den getrockneten Ausstrich hitzefixieren, indem man den Ausstrich (Ausstrichseite<br />
<strong>nach</strong> oben) dreimal langsam durch den oberen Teil <strong>der</strong> Bunsenbrennerflamme zieht.<br />
Dazu Holzklammer benutzen! Da<strong>nach</strong> erkalten lassen und färben.<br />
Färbung:<br />
<strong>1.</strong> Ausstrich mit einigen Tropfen Kristallviolett (Lsg. I) vollständig bedecken,<br />
2. 2 min färben, abgießen<br />
3. Reste kurz mit Lugols-Lösung (II) abspülen<br />
4. Ausstrich völlig mit Lugols-Lsg. (II) bedecken und 5 min einwirken lassen<br />
5. mit dest. Wasser etwa 5 sec. vorsichtig abspülen<br />
6. Ausstrich mit Entfärbelösung (Ethanol, III) mittels Tropfpipette solange abspülen, bis<br />
keine Farbwolken mehr abgehen und <strong>der</strong> Ausstrich graublau erscheint<br />
7. mit dest. Wasser etwa 5 sec. vorsichtig abspülen<br />
8. Ausstrich mit Safraninlösung (IV) bedecken , 1 min färben<br />
9. mit dest. Wasser etwa 5 sec. vorsichtig abspülen<br />
10.trocknen lassen, mikroskopieren: ohne Deckglas bei 40-Objektiv Bild einstellen<br />
1<strong>1.</strong>Objektiv wegdrehen, 1 Tropfen Immersionsöl auf beleuchtete Stelle im Ausstrich geben<br />
12.Immersionsobjektiv (100x) in den Tropfen hineindrehen<br />
Auswertung:<br />
Welche gram-Reaktion zeigen die Zellen?<br />
Zum Abschluss <strong>der</strong> Versuche 3 – 6: Stellen Sie in einer Tabelle alle untersuchten<br />
Stoffwechselleistungen Ihrer 3 Stämme dar und beschreiben Sie wichtige Eigenschaften.<br />
Versuch Stamm A Stamm B Stamm C<br />
5.<strong>1.</strong>1 Teil B Celluloseabbau<br />
5.2 Hemmung durch Aktinomyceten<br />
5.3 Umsatz von Zuckern<br />
5.4 Teil B Stärkeabbau<br />
5.5 Teil B Fettabbau<br />
5.6 Gelatineverflüssigung<br />
6. Gram-Reaktion<br />
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