HPLC für Neueinsteiger - bei NOVIA

Checkliste für die RP-HPLCWas muss ich vor Beginn der Messung beachten?Elektrische VerkabelungKapillarenSchläuche undEluentengefäßePumpenEluentInjektor• Hat sich nichts gelockert?• Tropft es irgendwo?• Luftblasen aus den Einlassschläuchen entfernen,indem man das Lösungsmittel mit einer Spritzeansaugt, dabei „Purgeventil“ öffnen.• Abdeckbares Eluentengefäß verwenden, damitnichts hineinfallen kann und die Verdunstung desEluenten minimiert wird.• Pumpe einschalten und einen Blick auf dasAbfallgefäß werfen. Tropft es dort hinein? Wenndies nicht der Fall ist, überprüfen Sie, ob derEluent durch den Einlassschlauch fließt.Häufigste Ursache für fehlenden Fluss ist Luft inder Pumpe.• Tropft es irgendwo oder ist es feucht (Dichtstellenanfassen), sieht man Kristallablagerungen beipufferhaltigen Eluenten? Sind diePumpengeräusche die gewohnten?• Immer mit HPLC-grade Lösungsmittel ansetzen.• Genügende Menge vorbereiten.• Pufferkonzentrationen sollten in der Regelzwischen 20 und 50 mMol liegen.• Eluenten mit Puffer immer membranfiltrieren, mitHelium entgasen oder Degasser verwenden.• Möglichst keine aggressiven Komponenten (z. B.Trichloressigsäure) dem Eluenten zusetzen.• Beim manuellen Injektor sicherstellen, dass einGefäß unter dem Überlauf steht.Injektionsspritzen sauber halten, umKontaminationen zu vermeiden, ggf. mit Iso-OHspülen.• Bei manchen Probengebern (Autosampler) musseine Waschflüssigkeit angeschlossen sein. BeiRP-Trennungen am besten 10 – 20 % Methanolin das Wasser zusetzen, um Pilzwachstum zuverhindern.Säule • Immer nach einem konstanten Schemaeinfahren.Detektor• Wenn Sie mit einem UV-Detektor arbeiten,© by NOVIA, Alle Rechte bei NOVIA GmbH 16