Telomere und Telomerase – ihre Bedeutung als prognostischer ...

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6 INHALTSVERZEICHNIS 2.2.2.1.4. Southern Blotting ..........................................................................................48 2.2.2.1.5. Markierung der Sonden ................................................................................49 2.2.2.1.6. Prähybridisierung und Hybridisierung...........................................................49 2.2.2.1.7. Detektion der Telomer-Restriktionsfragmente ..............................................50 2.2.2.1.8. Auswertung und Berechnung der mittleren Restriktionsfragmentlänge........51 2.2.2.2. Bestimmung der Telomeraseaktivität ..............................................................52 2.2.2.2.1. Aufarbeitung des Probenmaterials ...............................................................52 2.2.2.2.2. Bestimmung des Proteingehalts ...................................................................53 2.2.2.2.3. Bestimmung der alkalischen Phosphatase...................................................53 2.2.2.2.4. Telomeric Repeat Amplification Protocol (TRAP).........................................54 2.2.2.2.5. Zelllysatversuche mit Telomeraseinhibitoren................................................58 2.2.2.2.6. Auftrennung der Produkte im Polyacrylamidgel (TRAP-Gel)........................59 2.2.2.2.7. Auswertung der Telomeraseaktivität (TRAP-Gel).........................................60 2.2.2.3. Bestimmung der katalytischen Untereinheit der Telomerase (hTERT) ...........61 2.2.2.3.1. RNA-Isolierung und Bestimmung der RNA-Konzentration ...........................61 2.2.2.3.2. cDNA-Synthese ............................................................................................63 2.2.2.3.3. Real-time TaqMan ® PCR..............................................................................63 2.2.2.3.4. Auswertung der TaqMan ® -Daten der hTERT mRNA-Expression.................66 2.2.3. Immunhistochemische Methoden ..........................................................................67 2.2.3.1. Hämalaun-Eosin-Färbung ...............................................................................67 2.2.4. Statistik...................................................................................................................71 3. ERGEBNISSE...............................................................................................................72 3.1. Telomere, Telomeraseaktivität und hTERT mRNA-Expression als diagnostische bzw. prognostische Marker....................................................................................................72 3.1.1. Telomerlänge, Telomeraseaktivität und hTERT mRNA-Expression bei kindlichen Weichteilsarkomen.................................................................................................72 3.1.1.1. Telomerlänge von Weichteilsarkomzelllinien...................................................72 3.1.1.2. Telomeraseaktivität von Weichteilsarkomzelllinien .........................................78 3.1.1.3. hTERT mRNA-Expression von Weichteilsarkomzelllinien...............................82 3.1.2. Telomerlänge, Telomeraseaktivität und hTERT mRNA-Expression bei akuter lymphoblastischer Leukämie vom T-Zell-Typ (T-ALL) ...........................................86 3.1.2.1. Telomerlänge und T-ALL.................................................................................86 3.1.2.2. Telomeraseaktivität und T-ALL.....................................................................88 3.1.2.3. hTERT mRNA-Expression und T-ALL ..........................................................91 3.1.3. Telomeraseaktivität bei Patienten mit chronisch entzündlichen Darm- erkrankungen .........................................................................................................96 3.1.3.1. Telomeraseaktivität in Kolonbiopsien verschiedener Patientengruppen ......96 3.1.3.1.1. Immunhistochemische Charakterisierung der Kolonbiopsieproben..............96 3.1.3.1.2. Telomeraseaktivität in Kolonbiopsien verschiedener Patientengruppen ......97 3.1.3.1.3. Telomeraseaktivität und Patienten- bzw. Krankheitsfaktoren.......................99 3.2. Telomere und Telomerase als Angriffspunkte für pharmakologische Interventionen .105 3.2.1. Austestung von Telomeraseinhibitoren................................................................105 3.2.1.1. Effekte der Telomeraseinhibitoren im zellfreien TRAP-Assay.......................105 3.2.1.2. Effekte der Telomeraseinhibitoren in der Zellkultur.......................................106 3.2.2. Modellsysteme zur Untersuchung der Wirkung von Telomeraseinhibitoren ........110 3.2.2.1. Etablierung eines Zellmodells zur Testung von Telomeraseinhibitoren- A-549-Zellen als Testmodell..........................................................................110 3.2.2.1.1. Cisplatin und Proliferationsverhalten von A-549-Zellen..............................110 3.2.2.1.2. Telomeraseaktivität und Cisplatin...............................................................114 3.2.2.1.3. Telomerlänge und Cisplatin ........................................................................117 3.2.2.1.4. Morphologische Veränderungen der A-549-Zellen.....................................118 3.2.2.1.5. Zellzyklus und Cisplatin ..............................................................................119 3.2.2.2. p53-Status von Weichteilsarkomzellen .........................................................121
INHALTSVERZEICHNIS 7 4. DISKUSSION..............................................................................................................123 5. ZUSAMMENFASSUNG ..............................................................................................144 6. LITERATURVERZEICHNIS........................................................................................147 EIGENE VERÖFFENTLICHUNGEN....................................................................................158 DANKSAGUNG....................................................................................................................159 LISTE DER AKADEMISCHEN LEHRER .............................................................................161 LEBENSLAUF ......................................................................................................................162
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Seite 12 und 13: 12 EINLEITUNG Telomere natürliche
Seite 14 und 15: 14 EINLEITUNG Telomere und das „E
Seite 16 und 17: 16 EINLEITUNG 1.1.2. Telomerase Auf
Seite 18 und 19: 18 EINLEITUNG Telomerase bindet. Na
Seite 20 und 21: 20 EINLEITUNG durchgeführt. Zusät
Seite 22 und 23: 22 EINLEITUNG Telomere, sondern auc
Seite 24 und 25: 24 EINLEITUNG Eine weitere Möglich
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Seite 34 und 35: 34 MATERIAL und METHODEN Maleinsäu
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Seite 38 und 39: 38 MATERIAL und METHODEN 2.1.4. Bio
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Seite 44 und 45: 44 MATERIAL und METHODEN bestimmen.
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58 MATERIAL und METHODEN TRAP-Assay
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60 MATERIAL und METHODEN während d
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62 MATERIAL und METHODEN darstellt,
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64 MATERIAL und METHODEN Diese Meth
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68 MATERIAL und METHODEN Die Auswer
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70 MATERIAL und METHODEN Patient Al
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72 ERGEBNISSE 3. Ergebnisse 3.1. Te
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74 ERGEBNISSE TRF [bp] 9500 9000 85
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78 ERGEBNISSE Patientenalter* Gesch
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80 ERGEBNISSE Zellliniennr. Zellli
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82 ERGEBNISSE Abb. 3.7: Bestimmung
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84 ERGEBNISSE hTERTN 11000 10000 10
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86 ERGEBNISSE 3.1.2. Telomerlänge,
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88 ERGEBNISSE Abb. 3.12 sind die er
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90 ERGEBNISSE Patientennr. Kontroll
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92 ERGEBNISSE hTERTN 4.5×10 05 4.3
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94 ERGEBNISSE hTERTN 500000 400000
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96 ERGEBNISSE 3.1.3. Telomeraseakti
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98 ERGEBNISSE Es wurden nur die Bio
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100 ERGEBNISSE Zu den Arzneistoffen
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102 ERGEBNISSE Medikation Colitis u
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104 ERGEBNISSE Telomeraseaktivität
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106 ERGEBNISSE K BRACO19 SW-OH1 K B
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108 ERGEBNISSE Telomeraseinhibitor
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110 ERGEBNISSE durch eine unzureich
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118 ERGEBNISSE eingesetzte Cisplati
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120 ERGEBNISSE Zellzahl A B Zellen
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126 DISKUSSION bereits genannten St
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128 DISKUSSION OH1-Zellen zwar mali
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134 DISKUSSION (Nicht)Ansprechen ei
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136 DISKUSSION Colitis ulcerosa-Pro
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138 DISKUSSION Ein Grund für die D
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146 ZUSAMMENFASSUNG Anhand eines Ze
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148 LITERATURVERZEICHNIS Corey, D.
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156 LITERATURVERZEICHNIS van Steens
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158 EIGENE VERÖFFENTLICHNUNGEN Eig
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