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Protein- und KH-Analytik WS: 2012/2013 

14. LV 

Massenspektrometrie-2 

M. Gey: Protein-/KH-Analytik MS-2 

1


� 1. Einführung 

� 2. Aufbau eines Massenspektrometers 

� 2.1 Einlaßsysteme 

� 2.2 Ionenquelle 

� 2.3 Trennsystem/Auflösung 

� 2.4 Detektor 

� 2.5 Massenspektrum 

� 3. Harte Ionisationsarten 

� 4. Weiche Ionisationsarten 

� 4.1 Chemische Ionisation 

� 4.2 Fast Atom Bombardement 

� 5. Spektrometertypen 

� 5.1 Magnetfeld-Massenspektrometer 

� 5.2 Flugzeit-Massenspektrometer 

� 5.3 Quadrupol-Massenspektrometer 

� 5.4 Ionenfallen-Massenspektrometer 

� 6. Spektrenvergleich zwischen harter und weicher Ionisation 

� 7. “Anhang” Fragmentierungen in der MS, Applikationen 

M. Gey: Protein-/KH-Analytik MS-1/2 

2


� 1. Einführung 

• Analysenmethode zur Bestimmung chemischer 

Elemente od. Verbindungen. 

• Die Massenspektrometrie ist eine wichtige Methode der 

analytischen Chemie bei der Aufklärung der Struktur 

und Zusammensetzung von Verbindungen und 

Gemischen. 

• Bestimmung der Molmassen (Molekulargewichte). 

• Detektor für GC und HPLC. 

• Ermittlung der Isotopenverhältnisse der Atome in einer 

Probe. 


3

1. Einführung 

� Analyte werden in An- und Kationen ionisiert, 

die danach im gasförmigen Zustand vorliegen. 

• Die Ionen werden nach ihrem Masse-zu- 

Ladungsverhältnis (m/z) getrennt (“Abzisse”). 

• Für einen Analyten wird die Häufigkeit, mit der 

geladene Moleküle (Ionen) und deren Massen- 

fragmente auftreten, bestimmt. (“Ordinate”). 


4


� Atomare Masseneinheit: 

Sie wird bei der Angabe von Atom- und Molekülmassen 

verwendet. 

Einheitenzeichen: u oder amu (atomic mass unit) 

Im anglo-amerikanischen Raum wird das Dalton anstatt der 

amu benutzt, wobei gilt: 

1 amu = 1 Da 

u/amu/Da: gleich 1/12 der Masse von einem 

Atom 12C und entspricht in etwa der 

Masse eines H-Atoms (1,66 · 10-27 kg). 


5


� Dalton: (Da) ist eine nach dem englischen Naturforscher 

John Dalton benannte, nicht SI-konforme Masseneinheit 

(der Biochemie, organ. Chemie in den USA). 

Obwohl in Deutschland die atomare Masseneinheit eine 

gesetzliche Einheit im Meßwesen ist und das Dalton als 

besonderer Name hierfür betrachtet werden kann, ist 

das Dalton in Deutschland weder gesetzlich, noch 

normgerecht. 

Gebräuchlich ist vor allem das 1000-fache des Dalton: 

1000 Dalton = 1 Kilodalton = 1 kDa. 


6


� Der qualitative (Erkennung von unbekannten 

Substanzen) und der quantitative Nachweis 

sehr kleiner Substanzmengen (10 -15 g = 

femtogramm, fg) ist möglich. 

• Massenspektrometer dienen der Messung 

der Iosotopenzusammensetzung 

chemischer Elemente. 


7


� 2. Aufbau eines Massenspektrometers 

Steuer- und Auswerteeinheit 

Probeneinlaß Ionenquelle Analysator Detektor 

Moleküle Moleküle/Ionen Ionen Elektronen 

Vakuumsystem Vakuumsystem 

Vakuumsystem 


8

2. Aufbau einer Massenspektrometers 

Datensystem: 

Steuerung der Geräteparameter, 

Aufnahme und Auswertung der MS-Spektren 

Steuer- und Auswerteeinheit 

Probeneinlaß Ionenquelle Analysator Detektor 

Moleküle Moleküle/Ionen Ionen Elektronen 

Vakuumsystem Vakuumsystem 

Vakuumsystem 

Vakuumsystem: 

mittlere freie Weglänge (Ionen), 

Isolation für Hochspannung (Detektor, Quelle) 

Drehschieberpumpe: Vorvakuum (< 10 -1 mbar) 

Turbopumpen : Hochvakuum (


Trennsystem 

Magnet 

Probeaufgabe 

Einlaßsystem 

Probemoleküle 

Ionenquelle 

Ionen 

Beschleunigungsplatten 

100 

% 

0 

40 

Steuersystem-/ 

Auswerteeinheit 

Massenspektrum 

60 80 100 140 180 

Verstärkung, 

Detektion 


m/z 

10


� 2.1 Einlaßsysteme 

• Injektion der Probe, ohne dass das Vakuum 

verloren geht! 

• 3 Injektionsvarianten. 

� Indirekter Einlaß 

- Gase ins MS, Probenverdampfung (flüssig, fest) bei 

500°C (unzersetzt) im Vorratsgefäß – dann zur IQ. 

� Direkter Einlaß 

- Für Substanzen, die sich schlecht verdampfen lassen. 

- Substanzen werden mit Schubstange in die Ionenquelle 

(IQ) eingeschleust. 


11


• 3 Injektionsvarianten. 

� Trennmethode – MS (Die Chromatographie als 

Einlaßsystem für die Massenspektrometrie?). 

� GC-MS 

� LC-MS 

• Ander Methoden 

o CE-MS 

o ICP-MS. 


12


� 2.2 Ionenquelle (Ionenerzeugung) 

• Erzeugung von Ionen aus neutralen Molekülen oder 

Elementen. 

• Quelle der Ionisation: 

� Elektronen, 

� Ionen, 

� Moleküle, 

� Photonen, 

� Thermische Energie, 

� Elektrische Energie. 


13

Abstoßungselektrode 



Moleküle 

Elektronen 

Anode 

Glühkathode 

Ionen 

Ionen-Fokussierungselektroden 

Beschleunigungselektroden 

Ionenstrahl 


Analysator 

14



• Ionenquelle und Einlaßsystem bilden oft eine Einheit. 

• Am Ausgang der IQ resultieren meist positive Ionen. 

• Diese werden zum Anlysator hin beschleunigt. 

• Es werden in der MS unterschiedliche 

Ionisationsarten verwendet. 


15


�2.2 Ionenquelle (Ionisationsarten) 

MS-Ionisationsart Ionisationsquelle Reaktionsablauf 

• Elektronenstossionisation Elektronen M + e - M + + 2e - 

• Chemische Ionisation Reagenzgasionen M + CH 5 + MH + + CH 4 

• Fast Atom Bombardement Atome M + X (M + X) + 

• Sekundärionenanregung Ionen M + Ar + M + + Ar 

• Photoionisation UV-Strahlung M + h·ν M + + e - 


16


� 2.3 Trennsystem (Analysator) 

• Elektrisches Sektorfeld 

• Ionentrennung im Magnetfeld 

• Flugzeitanalysator (TOF) 

• Quadrupol 

• Elektrische Ionenfalle (ion trap) 


17


� 2.3 Trennsystem (Auflösung) 

• Vergleich mit Gitter in der Spektroskopie, 

• In der MS wird nicht nach der Wellenlänge bzw der 

Energie der Photonen zerlegt, sondern nach dem 

Masse-zu-Ladungsverhältnis. 

• Ziele: 

� Unterscheidung minimaler Massenunterschiede, 

� Hoher Durchfluss von Ionen ergibt einen gut 

auswertbaren Ionenstrom. 


18


� 2.3 Trennsystem (Auflösung) 

Relative Intensität, % 

100 

80 

60 

40 

20 

0 

Δm 

50 % 

m m + Δm 

10 % 

m/z 


19


� 2.4 Detektor (“Auffänger”) 

• Photomultiplier 

• SEV 

• Faraday-Auffänger 


20


� 2.5 Massenspektrum 

50 

Relative Intensität [%] 100 

Fragmentionenpeak 

15 

Basispeak 31 

Fragmentionenpeak 

29 

M +. 

Molekülpeak 

32 

Isotopenpeak 

10 20 30 40 

Masse/Ladung [m/z] 


21

3. Harte Ionisation 

� Elektronenstoßionisation, EI: electron impact 

• Gase, verdampfbare Flüssigkeiten Feststoffe können 

durch Elektronen-Stoß-Ionisation ionisiert 

werden. 

• Elektronen mit einer Energie von ca. 5 bis 200 eV 

werden verwendet (aus Stabilitätsgründen 

verwendet man oft 70 eV). 

• M + e - → M + + 2 e - 


22

3. Harte Ionisation 

� Elektronenstoßionisation, EI: electron impact 

• Durch den Zusammenstoß der Elektronen mit den 

Molekülen wird Energie auf die Moleküle übertragen 

und es werden primäre positive Ionen erzeugt. 

• Diese primären Ionen sind meistens sehr 

instabil und zerfallen ganz oder teilweise zu 

kleineren geladenen Massenfragmenten. 

• Bei der Ionisation einer Substanz fragmentiert diese 

in ein vorhersehbares Ionen-Muster. 


23

4. Weiche Ionisationsarten 

� CI, 

� FAB, 

� ESI, 

� MALDI u.a. 

• Bildung von Quasimolekülionen. 


24


Bildungsprozesse von Quasimolekülionen 

Prozess-Bezeichnung Reaktionsablauf 

• Protonierung M + H + [M + H] + 

• Deprotonierung M [M – H] - + H + 

• Kationisierung M + K + [M + K] + od. Na 

• Hybridabstraktion M [M – H] + + H - 


25


4.1 Chemische Ionisation, CI: chemical ionisation 

• Bei der CI wird ein Gas zugeführt, das durch EI 

angeregt / ionisiert wird. 

• Die aus dem Gas gebildeten Ionen reagieren dann 

mit dem Analyten und ionisieren ihn. 

• Der Fragmentierungsgrad ist geringer als bei der 

Elektronen-Ionisation. 

• M + CH 5 + → MH + + CH4 

• Reagenzgasionen 


26


� 4.1 Chemische Ionisation 

Primärelektronenstrahl 

Reaktionsgas 

Kathode 

Ionisierung 

Ionenstrom 


Analysator 

27


� 4.2 Fast Atom Bombardement 

FAB- 

Kanone 

Target 

Probe 

Xenonstrahl 

Ionenstrom 

Analysator 


28

5. Spektrometertypen 

5.1 Magnetfeld-Sektorfeld-Massenspektrometer 

• Grundlage der Probeionentrennung ist ihre 

Ablenkung in einem magnetischen Feld, 

• Die Ionisierung der Moleküle erfolgt mit Hilfe von 

Beschleunigungsplatten auf hohe Geschwindigkeiten. 

• Das erfolgt durch Umwandlung der in einem 

elektrischen Feld von einigen Kilovolt erzeugten 

potentiellen Energie in kinetische Energie. 

• Die beschleunigten Ionen gelangen in das Magnetfeld, 

in dem sie durch die Lorenzkraft auf eine 

Kreisbahn gelenkt werden. 


29



Ionisation Beschleunigung Ablenkung im Magnetfeld 

Zentrifugalkraft 

r 

m 1 > m 2 > m 3 


Lorenzkraft 

30



Dabei ist die Bewegung, die durch die Zentrifugalkraft F Z 

(1) entsteht, der Lorenzkraft F L (2) in einem bestimmten 

Maß entgegen gerichtet (siehe vorheriges Bild). 

F Z ist proportional der Masse m des Ions und dem Quadrat 

seiner Geschwindigkeit v und indirekt dem Radius r der 

Flugbahn. 

F 

Z 

m⋅ν 

2 

= 

r 


31


5.1. Magnetfeld-Sektorfeld-Massenspektrometer 

F L ist direkt proportional der Elementarladung e (e = 

1,6 × 10 −19 C) und der Geschwindigkeit des Ions sowie 

der angelegten Magnetfeldstärke H. 

F = e⋅ν ⋅ H 

L 


32



Beide Kräfte gelangen in einen Gleichgewichtszustand, 

dessen mathematischer Zusammenhang aus folgender 

Gleichung hervorgeht: 

m⋅ 

ν 

r 

2 

ν 

= e⋅ 

⋅ 

H 


33



Schwere Ionen werden bei konstanten 

Magnetfeldbedingungen auf kleinere und 

Ionen geringerer Massen auf größere 

Kreisbahnen abgelenkt. 

Ionen mit identischem Masse-zu- 

Ladungsverhältnis befinden sich auf 

identischen Flugbahnen und werden am 

gleichen Punkt des Detektors registriert. 


34



Ionisation Beschleunigung Ablenkung im Magnetfeld 

Zentrifugalkraft 

r 

m 1 > m 2 > m 3 


Lorenzkraft 

35


5.2 Flugzeit-Massenspektrometer 

Kathode Flugrohr 

Ionenquelle 

Beschleunigungsgitter 

schwere 

langsame 

Ionen (M2) 

leichte 

schnelle 

Ionen (M1) 

Detektor 

100 

% 


10 000 


0 

M1 

M2 

20 000 

m/z 

36


5.3 Quadrupol-Massenspektrometer 


37

5.4 Ionenfalle 

Ringelektrode 

Abstandshalter 

Austrittslinse 

Ionenauslass 

eingeschlossene 

Ionen 

VerschlusselektrodeEinlassfokussierung 

Ioneneinlass 


38

Relative Intensität, % 

6. Spektrenvergleich harte/weiche Ionisation 

100 

80 

60 

40 

20 

0 

40 

60 

61 

73 

Mannose 

M Mannose 

50 60 70 80 90 100 120 140 160 180 200 

m/z 


39

(Relative Intensität, %) 

6. Spektrenvergleich harte/weiche Ionisation 

100 

80 

60 

40 

20 

0 

40 

Mannose 

162 

+ 

[M+NH 4 ] 

180 

50 60 70 80 90 100 120 140 160 180 200 

198 

m/z 


40

7. Anhang 

7. Fragmentierungen in der Massenspektrometrie 

� 7.1 Benzylspaltung 

• Homolytische Spaltung einer Bindung. 

• Ausbildung eines Tropyl-Kations. 

. 

+ 

CH2 R R 

CH2 M. Gey: Protein-/KH-Analytik MS-2 

Tropylium-Kation 

41


� 7.2 Allylspaltung 

• Homolytische Fragmentierung einer Allylbindung. 

• Bildung eines stabilisierten Kations. 

CH CH CH 2 CH 2 

+ 

. 

CH CH CH2 CH CH CH2 CH3 42


� 7.3 Alkylspaltung 

• Spaltungen an Verzweigungspunkten der Kohlenstoffkette 

sind favorisiert. 

• Die positive Ladung verbleibt bevorzugt am 

höchstsubstituierten Kohlenstoffatom. 

CH 2 CH 2 C 

CH 3 

CH 3 

. 

+ 

. 

CH2 CH2 C 

CH 3 

CH 3 

43


� 7.4 α-Spaltung 

R 

• Positive Ladungen können durch benachbarte Heteroatome 

stabilisiert werden. Hier wird die Bindung in α-Stellung 

zum Heteroatom bevorzugt gespalten. Dabei erfolgt meist 

die Eliminierung der schwereren Substituenten. 

• Die α-Spaltungen treten oft in Carbonyl-Verbindungen 

und Ethern sowie in Nachbarschaft zu Thiol-, Amino- oder 

Hydroxylgruppen auf. 

O 

CH 2 C R´ 

. 

+ 

R 

O 

. 

CH2 C R´ 

O 

C R´ 

44


� 7.5 Decarbonylierung 

• Der Fragmentierungsprozess der Decarbonylierung ist 

meist eine Folgereaktion nach der α-Spaltung. 

O 

C R´ 

CO R´ 

45


� 7.6 Onium-Spaltung 

• Diese Fragmentierungsprozesse sind Folgereaktionen der 

bei der α-Spaltung gebildeten Oxonium- oder auch 

Ammonium-Kationen. 

• Bei einer Onium-Spaltung wird ein Wasserstoffatom aus 

einem an das Heteroatom gebundenen Rest unter 

Abspalten dieses Restes auf das Heteroatom übertragen. 

H 

CH 2 

N 

C 3H 6 

H 

CH 2 

N 

46


� 7.7 Retro-Diels-Alder-Reaktion 

• Diese Spaltung tritt auf, wenn Sechsringe eine 

Doppelbindung im Molekül besitzen. 

• Die Fragmentierung kann als eine Art Umkehrung der 

Diels-Alder-Reaktion aufgefasst werden, jedoch entsteht 

hier eine Radikal-Kation. 

. 

+ 

. 

+ 

47


� 7.8 McLafferty-Umlagerung 

• Bei dieser Umlagerungsreaktion wird ein Wasserstoffatom 

über einen „Sechsring-Übergangszustand“ auf eine 

Doppelbindung übertragen. 

• Zeitgleich erfolgt die Abspaltung eines Ethenmoleküls. 

C 3 

C 2 

H 

C 1 

X 

. 

+ C 3 

C 2 

H . 

X + 

C 1 

Y 

X = O, S, NR, CH2 Y = H, Alkyl, OH, SH, SR, NHR, NH2, NR2 Y 

48

� 7.9 Fragmentierung von Propyldiethylamin 

α−Spaltung 

H 3C 

- C 2 H 5 

CH 3 

M = 115 

N 

- CH 3 

CH 3 

CH 3 

H2C N + N+ 

86 

CH3 H3C H 

Onium-Reaktion 

- C 3 H 6 

Propyldiethylamin 

α−Spaltung 

H 

CH 2 

100 

CH 2 

CH 3 

N+ 

N 

+ 

58 H2C 72 

CH 3 

H 2C 

H 

McLafferty- 

Umlagerung 

CH 2 

N 

+ 

CH 3 

- C 2 H 4 

CH 3 

CH 3 

49


� 7.10 MS von Propyldiethylamin 

50 


58 

72 

86 

100 

115 

M +. 

m/z 50 100 150 

50


� 7.11 n-Propylbenzol: Fragmentierung und MS-Spektrum 

50 


51 

77 

65 

91 

M +. 

120 

m/z 50 100 150 

77 

CH 2 CH 2 CH 3 

91 

51


� 7.12 n-Hepten: Fragmentierung und MS-Spektrum 

50 


41 

57 

M +. 

98 

m/z 50 100 150 

57 

H 3C CH 2 

41 

52

Protein- und KH-AnalytiK WS: 2012/13 

15. LV 

Kopplungstechniken-2 

M. Gey: Protein-/KH-Analytik KT-2 

1


1. Problem der LC-MS-Kopplung 

HPLC-Säule 

Flußrate : 

~1 ml/min 

Säuleneluat 

E 

Probemoleküle 

E 

E 

Interface 

E E 

E E 

E E 

E E 

E E 

Reduzierung der Elutionsmittelvolumens 

(Relative Intensität, %) 

100 

80 

60 

40 

20 

0 

Hochvakuum 

MS 


60 61 

40 50 60 70 80 90 100 120 140 160 180 200 

m/z 

145 

163 

181 

2

1. Interfacing (Conversion process) 

State-ofmatter: 

LC Conversion Process MS 

Liquidphase 

Pressure: Atmospheric 

Charge 

State: 

Neutral 

(ionic) 

Evaporation 

Pressure Reduction 

Gasphase 

High 

Vacuum 

Ionization Ionic 

3


2. “LC-MS-Interfacing 

2.1 Moving-belt interface (MPI) 

(Transportband zwischen HPLC-Säule und MS) 


4


HPLC- 

Säule 

Flußrate : 

~1 ml/min 

E 

Erhitzen der Moleküle 

auf dem Band 

E E E E 

MS 

Transportband 

Vakuum 

Verdampfung 

des Elutionsmittels 


E 

5


2.2 Direct Liquid Introduction (DLI) 

(Direkteinlass des Säuleneluates in 

das MS) 


6

A: Microbore-Säule 

1-2 mm I.D. 

Fluss : ~ 0, 1 ml/min 

Säulen-Eluat und Probemoleküle 

Fluss: 0.1-0,01 ml/min 

B: Kapillare 

50-500 µm I.D. 

E Splitter 

E 

E 

Splitter 

E 

E 

E E 


MS 

7


2.3 Particle-Beam Interface (PBI) 

(Partikelstrahl-Interface) 


8

LC- 

Eluat 

Fused-Silica- 

Kapillare 

Nebulizer 

Particle-Beam-Interface 

Helium 

Partikel 

Desolvatationskammer 

Momentum- 

Separator 

Lösungsmitteldampf 

Transfer- 

Kapillare 

Ionenquelle 


MS 

MS 

9

LC-MS Particle Beam Interface, PBI 

1. HPLC-Säule 

hochverdünnte Probemoleküle 

in der 

mobilen Phase (Eluat) 

4. Separation 

Dampf MS 

Dampf 

Vakuum 

PM 

PM 

Trennung der Probe- und 

Eluatmoleküle bei erhöhter 

T und niedrigem Druck 

2. Vernebelung 3. Desolvatisierung 

Helium 

Aerosolbildung mit Helium 

und durch Thermospray 

oder Pneumatikspray 

Konzentrierung der Probemoleküle 

bei erhöhter Temperatur 

und Niederdruck 

5. Ionisierung 6. MS-Analyse 

Ionisierung der Probemoleküle 

durch Chemische 

Ionisation (CI) oder EI 

Heizung Vakuum 


Desolvatationskammer 

100 

80 

60 

40 

20 

0 


10 000 

m/z 

Trennung und Analyse 

der Ionen nach ihrem 

m/e-Verhältnis 

B 

A 

M 

10


2.4 Thermospray (TSP) 

(Zerstäubung in der erhitzten Kapillare) 


11

LC-MS Thermospray, TSP 



in der 


4. Vakuum 

Desolvatisierung der 

Droplets, keine Beeinflussung 

der Probemoleküle 

2. Verdampfer- 

Rohr 

Überführung des Eluates 

in eine geheizte Kapillare 

3. Vernebelung 

Bildung von Droplets beim 

Enspannen der Flüssigkeit 

aus der Kapillare 

5. Ionisierung 6. MS-Analyse 

Filament Entladungs-Elektrode 

Entstehung von Probeionen 

durch CI, Discharge- 

Elektrode, Filament 

100 

80 

60 

40 

20 

0 


10 000 





� 

B 

A 

M 

m/z 

12


2.5 Electrospray (ESI) 

(Zerstäubung im elektrischen Feld) 


13

LC-MS-IV HPLC - Electrospray - MS-MS 

O 2 

HPLC 

5 KV 

760 Torr 

Atmosphärendruckionenquelle 

Fused 

Silica 

Kapillare 

( ~75 µm ) 

Stickstoff 

geladene 

Tröpfchen 

Stickstoff 

Öffnung (100 µm i.D.) 

Vakuum 

Quadropol - 

MS 1 

Stoßkammer 

10 - 6 Torr 

Quadropol - 

MS 2 


Detektor 

14

LC-MS-IV Vorgänge beim Electrospray 



in der 


2. Fused-silica 

Kapillare 




15


3. Spannung 

~5 kV 

Bildung von geladenen 

Droplets bei einem Potential 

um 5kV i.d. Gasphase 

4. Desolvatisierung 

Reduzierung der mobilen 

Phase innerhalb 

geladener Droplets 


16


5. "Eruption" 

Rückstand 

Austreten (Eruption) der 

Probeionen aus den 

Droplets in der Gasphase 

6. MS-Analyse 

100 

80 

60 

40 

20 

0 


1 000 

m/z 

Trennung der Ionen 

nach m/z-Verhältnis 


B 

A 

M 

17

LC-MS Electrospray, ESI 



in der 


4. Desolvatisierung 

Reduzierung der mobilen 

Phase innerhalb 

geladener Droplets 


Kapillare 



5. "Eruption" 

Rückstand 

Austreten (Eruption) der 

Probeionen aus den 

Droplets in der Gasphase 

3. Spannung 


~5 kV 

Bildung von geladenen 

Droplets bei einem Potential 

um 5kV i.d. Gasphase 

6. MS-Analyse 

100 

80 

60 

40 

20 

0 


10 000 

m/z 

Trennung der Ionen 

nach m/e-Verhältnis 

B 

A 

M 

18

LC-MS-MS: Application, MS-MS-Spectra of sugars 


19


2.6 Continuous-flow fast atom bombardment 

(CF-FAB) 

(Bombardierung mit energiereichen 

Atomen) 


20

LC-MS Continuous Flow-FAB, CF-FAB 

1. Mikro-HPLC 

verdünnte Probemoleküle 

in der mobilen Phase 

(Eluat) aus der µ-LC-Säule 

4. Atombeschuß 

Target 

A 

Beschuß der Moleküle auf 

dem Target in der Ionenquelle 

mittels FAB-Kanone 

A 

FAB-kanone 

2. Glyzerinzufuhr 3. FAB-Target 

Zumischen von 10-15 % 

Glyzerin zum Eluat in einer 

Fused-silica Kapillare 

Überführung des "Glyzerineluates" 

über eine Fusedsilica 

Kapillare zum Target 

5. Ionisation 6. MS-Analyse 

Target 

Ionisation der Moleküle 

nach Beschuß mit der 

FAB-Kanone 


100 

80 

60 

40 

20 

0 


10 000 

m/z 




B 

A 

M 

Target 

21


2.7 Atmospheric-Pressure Chemical Ionisation 

(APCI) 

(Chemische Ionisierung unter 

Normaldruck) 


22

LC-MS Atmospheric Pressure Chemical Ion., APCI 



in der 


4. Gaszufuhr, CI 

Gas 

Zufuhr von Gas zu der 

Mischung aus Eluat- und 

Dampf-Droplets, APCI 


Kapillare 



3. Heated-Nebulizer 

5. Entladung, API 6. MS-Analyse 


� 

Corona-Nadel 

Entladung der Droplets 

unter Atmosphärendruck 

mittels "Corona-Nadel" 


Verdampfung des Eluates 

in der geheizten Fused-silica 

Kapillare (Spray-Technik) 

100 

80 

60 

40 

20 

0 

10 000 

m/z 




B 

A 

M 

23

LC-MS - Collision-induced Dissociation, CID 

MS spectrum of sulfamethazine without CID 

Only little fragmentation 

Applikationen, Firma Agilent KT-2 

24

LC-MS - without CID 

MS spectrum of sulfamethazine with CID 

More fragmentation 

= more structural 

information 


25

LC-MS-II - Collision-induced Dissociation, CID 


Sulfamethazine 

fragmentation 

26

3. Applications (Figure 23) 

Molecular Weight Determination (green fluorescent protein) 

MW = 26.828,84 


27

LC-MS-II - Environmental-Applications (Figure 36) 

MS spectra of phenylurea herbicides, 


28

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