coagulants of moringa oleifera lam. seeds purification ... - EPFL

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Table of Contents of Moringa oleifera Lam. Seeds . . . . . . . . . . 1 Coagulants Water Supply . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2 Global Treatment using Primary Coagulants . . . . . . . . . . . . . . . . . .3 Water Flocculants . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .4 Commercial . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 6 Aim . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 7 References of Flocculating Proteins Extraction M.oleifera Seeds . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 9 from . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 10 Abstract . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 10 Introduction and Methods . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .12 Materials Extraction . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 12 Seed Salt Solution: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 12 Multiple Extraction Buffer: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 12 Protein NaCl: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .13 1M Water: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 13 Demineralised Methods . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .13 Analytical . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 13 Chromatography / Western Blotting . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 13 SDS-PAGE and Discussion . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 14 Results Extraction procedures . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 14 Different of Protein Content during Storage . . . . . . . . . . . . . . . . 19 Evolution of Thermo-Precipitation . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 23 Effect . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 24 Conclusions References . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 27 of M.oleifera Seed Proteins Purification Sequence Determination . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 29 for . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 30 Abstract . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 30 Introduction Strategies . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 30 Purification . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 32 SDS-PAGE of Proteins upon Extraction . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 32 Modification and Methods . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .34 Materials Extraction . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 34 Seed . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 34 Chromatography . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 34 Analytics . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 35 SDS-PAGE Protein . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 35 Total Spectrometry (MS) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 35 Mass and Discussion . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 36 Results Reverse Phase HPLC . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 36 Semi-Preparative iii
iv Reverse Phase Chromatography . . . . . . . . . . . . . . . . 40 Preparative of the Thermo-Precipitation Step . . . . . . . . . . . . . . . . . 45 Influence Extraction Buffer . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 48 Protein of Non-Reduced Main Protein Component Prior Pooling Reduction. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 52 to Theoretical Plate Number . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 55 Increased . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 59 Conclusions Strategy . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 59 Purification Characteristics . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 60 Protein Modification and Non-Proteinaceous Components . . . . . 61 Protein References . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 63 of Non-Proteinaceous Components Characterisation in M.oleifera Extracts . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 65 Present . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 66 Abstract . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 66 Introduction of Secondary Metabolites that Interfere Presence Protein Purification from Seeds . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 66 with Compounds . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 66 Phenolic derivatives . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 67 Glucosinolate of Phenolics and Isothiocyanates Influence the Physicochemical Properties of Proteins . . . . . . . . . . . . . . 68 on of Secondary Metabolites in M.oleifera seed extracts 71 Determination and Methods . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 71 Materials . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 71 Chemicals material . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 71 Plant and isolation of 4(-α-L-rhamnopyranosyloxy)- Extraction (4RBGLS) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 71 benzylglucosinolate of 4RBGLS . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 72 Re-crystallization of isolated 4RBGLS . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 72 Characterization and isolation of 4-(α-L-rhamnopyranosyloxy)- Preparation (4RBITC) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 72 benzylisothiocyanate Extractions . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 73 Seed Extraction Procedure for All Different Media . . . . . . . 73 Modified Protein Extraction Procedures . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 73 Original methods . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 73 HPLC of secondary metabolites . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 73 Quantification and Discussion . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 74 Results of Standards for Glucosinolates Preparation Isothiocyanates present in M.oleifera . . . . . . . . . . . . . . . . . . 74 and Analysis of Different Extraction Media . . . . . . . . . . 76 Qualitative of Secondary Metabolites in Extracts Quantification M.oleifera seeds . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 84 of . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 85 Conclusions of the Results in Regard to Protein Extraction . . . . . 86 Importance . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 87 Acknowledgments References . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 88
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