hyplex SuperBug ID

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13. Kontrollergebnisse des hyplex ® SuperBug ID-Testsystems Bei der Durchführung der Positivkontrolle wird ein Amplifikationsprodukt gebildet, das nach Durchführung der reversen Hybridisierung mit der spezifischen Positivkontrollsonde ein positives Signal mit einer OD 450 nm > 1,5 zeigt. Die Positivkontrolle ist im Falle von zweifelhaften negativen Ergebnissen auch als Amplifikationskontrolle einsetzbar. Durch Zugabe der Positivkontrolle des hyplex ® SuperBug ID PCR-Moduls zum PCR-Ansatz der zu untersuchenden Probe kann das Vorhandensein von die PCR inhibierenden Stoffen im Probenmaterial überprüft werden. Zeigt die Positivkontrollsonde kein Signal, so wurde in diesem Fall die PCR inhibiert und es ist keine Aussage über das Vorhandensein von relevanter DNS in der Probe möglich. Eine Wiederholung mit frisch gereinigter DNS wird empfohlen. Zeigt die Positivkontrollsonde ein positives Signal, so liegt kein systemischer Fehler in der PCR und der Hybridisierung vor, die zu untersuchende Probe ist als negativ einzustufen. Im Fall der Negativkontrolle sollte kein Amplifikationsprodukt und somit kein Hybridisierungssignal mit irgendeiner Sonde zu beobachten sein. 14. Troubleshooting Durchweg schwache oder gar keine Signale (inkl. Positivkontrolle) Temperatur der Stringenten Waschlösung deutlich über 50° C PCR-Produkte vor Hybridisierung nicht (ausreichend) denaturiert bzw. wieder renaturieren lassen Substrat nicht auf Raumtemperatur äquilibriert Falsche Mengen an Konjugat und/oder Substrat eingesetzt Schwache oder gar keine Signale mit Ausnahme der Positivkontrolle Qualität und/oder Quantität der isolierten DNS lassen keine effiziente Amplifikation zu. PCR-Produkte in einem 2%igem Agarosegel überprüfen. Gegebenenfalls DNS- Isolierung und –Amplifizierung wiederholen, evtl. andere DNS-Isolierungsmethode verwenden Bei Verwendung des hyplex Lysepuffers ungenügende thermische Lyse (zu kurz; Temperatur nicht 99° C) Bei Verwendung von Zell- bzw. Patientenmaterial mit Hilfe der Positivkontrolle die Anwesenheit von PCR-inhibierenden Stoffen überprüfen (siehe 13) oder DNS- Isolierung durchführen Allgemein hohe (Hintergrund)-Signale Die Verwendung von nicht ausreichend erwärmter Stringenter Waschlösung bzw. zu niedrige Temperatur des Inkubators kann zu unspezifischen Signalen führen. Spezifische, positive Signale werden im gleichen Maße verstärkt, so dass der Kontrast zwischen unspezifischen und spezifischen Signalen erhalten bleibt. Bei Zweifel an der Auswertbarkeit des Testlaufs (siehe 11) wird eine Wiederholung unter Verwendung der korrekten Durchführungsparameter empfohlen. 16
15. Leistungsdaten 15.1 Sensitivität und Spezifität: 96 verschiedene Carbapenemasen - negative Stämme folgender Spezies wurden mit dem hyplex ® SuperBug ID hinsichtlich der Spezifität des Systems getestet. Organismus Citrobacter brackii Citrobacter freundii Enterobacter aerogenes Enterobacter amnigenus Enterobacter cloacae Enterobacter gergoviae Enterobacter intermedius Enterobacter kobei Enterococcus asini Enterococcus avium Enterococcus casseliflavus Enterococcus cecorum Enterococcus columbae Enterococcus dispar Enterococcus durans Enterococcus faecalis Enterococcus faecium Enterococcus flavescens Enterococcus gallinarum Enterococcus hirae Enterococcus malodoratus Enterococcus mundtii Enterococcus pseudoavium Enterococcus raffinosus Enterococcus saccharolyticus Enterococcus seriolicida Enterococcus solitarius Enterococcus sulfreus Escherichia coli Klebsiella oxytoca Klebsiella pneumoniae Legionella pneumophila Morganella morganii Mycoplasma genitalium Mycoplasma hominis Pseudomonas aeruginosa Pseudomonas alcaligenes Pseudomonas fluorescens Serratia liquefaciens Serratia marcescens Staphylococcus arlettae Staphylococcus aureus Staphylococcus capitis Staphylococcus caprae Staphylococcus epidermidis Staphylococcus haemolyticus Staphylococcus hominis Staphylococcus saprophyticus Staphylococcus simulans Staphylococcus warneri Streptococcus agalacticae Streptococcus dysgalacticae Streptococcus mutans Streptococcus oralis Streptococcus pyogenes Streptococcus salivarius Streptococcus sanguinis Ureaplasma urealyticum Ergebnis: Es wurden keinerlei positive Signale mit einem der getesteten Referenzstämme beobachtet. Spezifität im Rahmen der getesteten Referenzstämme 100 % 17
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Page 35: 15.2 Clinical evaluation: Result: S

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