زﻧﺒﻮر ﻋﺴﻞ اﯾﺮان ژﻧﻮم ﻣﯿﺘﻮﮐﻨﺪري در ﺟﻤﻌﯿﺖ ﺗﻨﻮع ﻣﻨﻄﻘﻪ ي C - دانشگاه تهران
زﻧﺒﻮر ﻋﺴﻞ اﯾﺮان ژﻧﻮم ﻣﯿﺘﻮﮐﻨﺪري در ﺟﻤﻌﯿﺖ ﺗﻨﻮع ﻣﻨﻄﻘﻪ ي C - دانشگاه تهران
زﻧﺒﻮر ﻋﺴﻞ اﯾﺮان ژﻧﻮم ﻣﯿﺘﻮﮐﻨﺪري در ﺟﻤﻌﯿﺖ ﺗﻨﻮع ﻣﻨﻄﻘﻪ ي C - دانشگاه تهران
Create successful ePaper yourself
Turn your PDF publications into a flip-book with our unique Google optimized e-Paper software.
مواد و روش ها<br />
نمونه گیر<strong>ي</strong> و استخراج :DNA زنبور ها<strong>ي</strong> کارگر بالغ از مناطق مختلف ایران شامل کرج (40نمونه)، چالوس<br />
(20)، گلستان<br />
،(20) اصفهان ،(40) کرمان (20)<br />
کارگر گرفته شد. زنبور ها<strong>ي</strong> عسل تا زمان استفاده برا<strong>ي</strong> استخراج<br />
سلسیوس نگهدار<strong>ي</strong> شدند.<br />
استفاده قرار گرفت.<br />
و قسمت جنوبی استان سیستان و بلوچستان(40) جمع آور<strong>ي</strong> شدند. از هر کلنی یک زنبور<br />
همچنین نمونه هایی از کلنی هایی<br />
DNA<br />
96 <strong>در</strong> اتانول<br />
<strong>در</strong>صد و <strong>در</strong> دما<strong>ي</strong><br />
-20<br />
(10)<br />
استخراج DNA<br />
از جفت پرایمر زیر تکثیر شد.<br />
از کل بدن هر زنبور بر اساس روش اسد<strong>ي</strong> و همکاران<br />
<strong>در</strong>جه <strong>ي</strong><br />
که ملکه <strong>ي</strong> آنها از کشور ترکیه وارد شده بود نیز مورد<br />
(2009)<br />
انجام گرفت. منطقه <strong>ي</strong><br />
COI-COII<br />
با استفاده<br />
Forward: 5' GGC AGA ATA AGT GCA TTG 3'<br />
Reverse: 5' CAA TAT CAT TGA TGA CC 3'<br />
برنامه <strong>ي</strong> PCR نیز به این صورت بود: مرحله <strong>ي</strong> واسرشت ساز<strong>ي</strong> اولیه<br />
چرخه شامل<br />
<strong>ي</strong> بسط نهایی<br />
آگارز<br />
دقیقه <strong>در</strong> دما<strong>ي</strong> 4<br />
94<br />
<strong>در</strong>جه <strong>ي</strong> سلسیوس، پس از آن<br />
35<br />
30 <strong>در</strong>جه برا<strong>ي</strong> 94<br />
ثانیه، دما<strong>ي</strong> اتصال46 <strong>در</strong>جه برا<strong>ي</strong><br />
45<br />
ثانیه و زمان بسط<br />
45<br />
ثانیه <strong>در</strong> دما<strong>ي</strong><br />
72<br />
دقیقه <strong>در</strong> دما<strong>ي</strong> 6<br />
72<br />
2<br />
<strong>در</strong>جه بود. مرحله<br />
<strong>در</strong>جه <strong>در</strong> نظر گرفته شد. محصولات PCR جهت اطمینان از تکثیر و کیفیت آن بر رو<strong>ي</strong> ژل<br />
<strong>در</strong>صد الکتروفورز شد و پس از رنگ آمیز<strong>ي</strong> با اتیدیوم بروماید تحت نور ماورا<strong>ي</strong> بنفش مشاهده شد.<br />
محصولات PCR<br />
صورت بود که<br />
<strong>در</strong> مرحله <strong>ي</strong> بعد با استفاده از آنزیم<br />
(TTTAAA) DraI<br />
7<br />
میکرولیتر محصول<br />
استفاده از آب مقطر استریل به<br />
2 ،PCR<br />
20<br />
مورد هضم قرار گرفتند. شرایط واکنش هم به این<br />
میکرولیتر بافر و یک میکرولیتر آنزیم استفاده شد و حجم نهایی واکنش با<br />
میکرولیتر رسانده شد. مخلوط واکنش به مدت<br />
12<br />
سلسیوس قرار داده شد. محصولات هضم برا<strong>ي</strong> مشاهده <strong>ي</strong> قطعه <strong>ي</strong> بزرگتر رو<strong>ي</strong> ژل آگارز<br />
قطعات کوچک تر بر رو<strong>ي</strong> ژل اکریل آمید<br />
نتایج و بحث<br />
آنزیم<br />
ساعت <strong>در</strong> حمام آب گرم<br />
37<br />
2/5<br />
12<br />
<strong>در</strong>صد الکتروفورز شد.<br />
نتایج حاصل از هضم محصول PCR <strong>در</strong> شکل ها<strong>ي</strong> یک و دو نشان داده شده است. <strong>در</strong> شکل یک قطعه <strong>ي</strong><br />
نشان داده شده است و <strong>در</strong> شکل شماره <strong>ي</strong> دو نیز قطعات کوچک تر نشان داده شده اند.<br />
<strong>در</strong>جه<br />
<strong>در</strong>صد و برا<strong>ي</strong> مشاهده <strong>ي</strong><br />
420<br />
DraI<br />
(185 غالب بود<br />
قطعاتی با اندازه ها<strong>ي</strong><br />
جفت باز<strong>ي</strong><br />
دارا<strong>ي</strong> سه مکان برش <strong>در</strong> منطقه <strong>ي</strong> تکثیر شده بود و دو الگو<strong>ي</strong> هضمی ایجاد نمود. <strong>در</strong> الگو<strong>ي</strong> اول که دارا<strong>ي</strong> فراوانی<br />
نمونه)، قطعاتی با طول<br />
420 و 64 ،41 ،47<br />
تولید شد و <strong>در</strong> الگو<strong>ي</strong> دوم<br />
5)<br />
39 و 47 ،64 ،420<br />
ایجاد شد. که این الگوها ویژگی خط<br />
مربوط به کشور ترکیه نیز دارا<strong>ي</strong> الگو<strong>ي</strong> باند<strong>ي</strong> مشابه با الگو<strong>ي</strong> اول بودند.<br />
پیش جنگ و همکاران<br />
C<br />
92 (2011)<br />
زنبور کارگر جمع آور<strong>ي</strong> شده از<br />
15<br />
بررسی قرار دادند. هضم این منطقه با DraI چهار قطعه <strong>ي</strong> بریده شده با طول ها<strong>ي</strong><br />
هیچ تنوعی <strong>در</strong> بین نمونه ها مشاهده نشد. جبار<strong>ي</strong> فرهود و کنس<br />
نمونه از نمونه ها<strong>ي</strong> چالوس و کرج)<br />
مدیترانه است. الگو<strong>ي</strong> هضمی نمونه ها<strong>ي</strong><br />
منطقه <strong>ي</strong> مختلف ایران به عنوان ماده <strong>ي</strong> آزمایشی مورد<br />
64 ،47 ،41<br />
(2005)<br />
و 420 جفت باز حاصل نمود.<br />
با انجام مطالعه ا<strong>ي</strong> بر رو<strong>ي</strong> نمونه ها<strong>ي</strong> زنبور عسل
Change language