Nghiên cứu phương pháp xác định hàm lượng IgG trong sữa và các sản phẩm sữa bằng sắc ký lỏng hiệu năng cao (2018)

SEC đã thành công trong việc tách whey protein với <strong>IgG</strong> và <strong>định</strong> <strong>lượng</strong> trên cột Sepharose
[6]. Tuy nhiên, các vấn đề trong việc <strong>xác</strong> <strong>định</strong> <strong>IgG</strong> của SEC cũng đã được ghi nhận, đặc
biệt trong trường hợp có casein, một protein chính trong sữa làm ảnh hưởng tới khả năng
chia tách. Phương <strong>pháp</strong> này cũng có khả năng <strong>xác</strong> <strong>định</strong> được nguồn gốc của <strong>IgG</strong>.
1.2.2.3. Sắc ký ái lực (Affinity chromatography AC)
Phương <strong>pháp</strong> này kết hợp giữa sự tách và tương tác của <strong>IgG</strong> với protein G hoặc A. Các
loại protein này là protein mà bề mặt tế bào có liên kết đặc biệt (tuy nhiên không phải cơ
chế miễn dịch) với <strong>IgG</strong> thông qua phần Fc (không bị biến tính bởi nhiệt) của phân tử <strong>IgG</strong>.
Trong quá trình rửa giải với đệm trung tính, các protein khác trong sữa sẽ đi qua cột, sau
đó <strong>IgG</strong> sẽ được rửa ra với đệm có pH thấp. Phương <strong>pháp</strong> này phát hiện các protein bằng
việc đo độ hấp thụ tại bước sóng ≈ 280 nm, pic protein xuất hiện tại thời gian rửa giải pH
thấp sẽ chỉ là pic của một mình <strong>IgG</strong>. Tuy nhiên, cần loại bỏ casein do casein có khả năng
gây cản trở quá trình rửa giải <strong>IgG</strong>. Phương <strong>pháp</strong> có khoảng tuyến tính từ 1-100 mg/g [3],
phù hợp với việc phân tích sữa, sản phẩm từ sữa và sữa non.
1.3. Tổng quan về sắc ký ái lực trong sắc ký lỏng hiệu năng cao.
1.3.1. Khái niệm
Sắc ký lỏng hiệu năng hiệu năng cao (High Perform Liquid Chromatography HPLC) là
kỹ thuật tách trong đó các chất phân tích di chuyển qua cột chứa các hạt pha tĩnh. Tốc độ
di chuyển khác nhau liên quan đến hệ số của chúng giữa hai pha tức là liên quan đến ái lực
tương đối của các chất này với pha tĩnh và pha động. Thứ tự rủa giải các chất ra khỏi cột vì
vậy phụ thuộc vào các yếu tố đó. Sắc ký ái lực là một kiểu sắc ký của HPLC. [1]
1.3.2. Nguyên tắc
Các hợp chất sinh học, như enzyme và cơ chất hoặc kháng nguyên và kháng thể, sở hữu
những đặc trưng nhận biết giữa chúng một cách chọn lọc để tạo thành các hợp chất phức.
Sắc ký ái lực là một <strong>phương</strong> <strong>pháp</strong> phân tách và tinh chế các chất vận dụng tính ái lực sinh
học của chúng. Tương tác giữa chúng thường có thể đảo ngược. Một phân tử được cố <strong>định</strong>
- 9 -