Nghiên cứu phương pháp xác định hàm lượng IgG trong sữa và các sản phẩm sữa bằng sắc ký lỏng hiệu năng cao (2018)

(pha tĩnh) có ái lực với chất phân tích, sau đó chất phân tích được rửa giải nhờ gradient pha
động [20].
Quy trình trong sắc ký ái lực gồm 4 bước sau:
(1) Cân bằng cột
Nhồi cột bằng pha tĩnh gồm phần chất mang đã cố <strong>định</strong> sẵn một phối tử phù hợp với mục
tiêu phân tách trên bề mặt. Cột được cần bằng nhờ dung môi chạy mẫu.
(2) Thêm mẫu và hấp phụ với hợp chất mục tiêu (Hình a)
Mẫu được đưa vào cột và thành phần mục tiêu hấp phụ lên trên pha tĩnh.
(3) Rửa cột (Hình b)
Việc rửa cột nhằm loại bỏ những thành phần không hấp phụ lên pha tĩnh.
(4) Xả cột (Hình c)
Dung môi được đưa vào để rửa giải thành phần mục tiêu đang hấp phụ trên pha tĩnh ra
khỏi cột nhằm thu hồi chúng. Quy trình bắt đầu lại từ bước (1). [27]
Hình 1.3. Quá trình trong sắc ký ái lực [27]
1.3.3. Pha tĩnh sắc ký ái lực trong sắc ký lỏng hiệu năng cao
1.3.3.1. Các chất hỗ trợ ái lực (Các chất mang pha tĩnh)
Loại chất mang được sử dụng phổ biến gồm agarose hay những hạt gel tổng hợp đại
phân tử (cấu tạo từ polyme) có tính ưa nước (ví dụ như polyvinyl alcohol polyacrylate, …).
Theo nguyên tắc, chất mang được chọn không có phản ứng gì (bất hoạt) với mẫu và bền về
mặt vật lý lẫn hóa học dưới những điều kiện sắc ký được thiết lập. Cũng cần phải lưu ý rằng
- 10 -