1. Muestreo 1.1. Número de muestras 1.2. Método de muestreo ...

Máster en Industria e Economía Leiteira.
Microbioloxía do Leite e Productos Lácteos: Prácticas
- Incubar el caldo RV a 42 ºC/24 h y el caldo TT a 36 ºC/24 h.
4. Siembra en placa e identificación
- A partir del cultivo obtenido en RV tras una incubación de 24 h, inocular
por medio de un asa de siembra una placa Petri de cada uno de los
medios selectivos: XLD y AH. Sembrar las placas de forma que se
obtengan colonias bien aisladas.
- Proceder de la misma manera con el cultivo obtenido en TT tras una
incubación durante 24 h.
- Invertir las placas e introducirlas en la estufa a 36 ºC/24 h
- Examinar las placas para determinar la presencia de colonias típicas de
Salmonella:
XLD: colonias con una parte central negra y un borde ligeramente
transparente o rojizo debido al viraje de color experimentado por el
indicador.
AH: colonias verde-azuladas con o sin centro negro.
5. Confirmación
Selección de colonias para su confirmación
Seleccionar de las placas de cada medio selectivo, al menos 5 colonias
consideradas típicas o sospechosas que estén perfectamente aisladas.
Sembrar las colonias seleccionadas en la superficie de placas de AN o
TSA de manera que permitan el crecimiento de colonias bien aisladas.
Incubar las placas inoculadas a 36 ºC/24 h. Utilizar estos cultivos puros
para la confirmación bioquímica.
Confirmación bioquímica
A. TSI
Inocular las colonias aisladas en TSI, empleando para ello un asa de
siembra recta. Seleccionar una colonia bien aislada de la placa de TSA;
con el extremo de la aguja de inoculación tocar la colonia seleccionada
y pinchar en el tubo de TSI; retirar el asa del fondo del tubo y sembrar el
pico de flauta con un movimiento en zig-zag. Incubar a 36 ºC/24 h.
Interpretar los cambios en el medio siguiendo los siguientes criterios:
Fondo
• Amarillo: glucosa positivo (fermentación de glucosa).
• Rojo o sin cambios: glucosa negativo (no fermenta la glucosa)
• Burbujas o roturas: formación de gas a partir de la glucosa
• Negro: producción de sulfuro de hidrógeno (H2S)
16