1. Muestreo 1.1. Número de muestras 1.2. Método de muestreo ...

Máster en Industria e Economía Leiteira.
Microbioloxía do Leite e Productos Lácteos: Prácticas
placas de Agar Baird Parker marcadas con el código de la muestra. Repetir
el procedimiento para la dilución 10 -2 y para otras diluciones decimales si es
necesario.
2. Si en ciertos productos se desea, o es necesario detectar números bajos de
S. aureus, el límite de detección puede ser incrementado en un factor de 10,
inoculando 1 ml de la muestra a analizar si es líquida, ó 1 mL de la
suspensión inicial (10 -1 ) para otros productos, sobre la superficie de 3 placas
pequeñas de Agar (90 mm). En ambos casos, se realizarán duplicados,
empleando así 6 placas.
3. Mediante el asa de siembra recta de vidrio (asa de Drigalsky), extender
cuidadosamente el inóculo lo más rápido posible sobre las placas de BP.
4. Invertir las placas sembradas e incubarlas en estufa a 36 ºC durante 24-48
h.
Selección de las placas e interpretación:
2. Marcar y contar sobre el fondo de la placa las colonias típicas. Marcar y
contar también cualquier colonia atípica (1)
(2) Las colonias típicas son negras o grises, brillantes y convexas, de 1-5 mm
de diámetro después de una incubación de 24 h, y de 1,5-2,5 mm de
diámetro después de una incubación de 48 h, rodeadas por una zona clara.
Tras la incubación de más de 24 h, puede aparecer en esta zona clara un
anillo opalescente en contacto con las colonias.
Las colonias no características (fundamentalmente cepas de estafilococos coagulasa
positivo que contaminan productos lácteos,…) pueden presentar alguna de las siguientes
morfologías:
a. Colonias negras brillantes con/sin borde estrecho blanco; no existe zona clara o
apenas es visible y no existe el anillo opalescente o apenas se ve.
b. Colonias grises sin zonas claras.
3. Si se extendió 1 mL de inóculo sobre 3 placas, tratar estas placas como si
fueran una sola para todos los recuentos y procedimientos de confirmación.
4. Para realizar un recuento estimado de pequeñas cantidades de S. aureus
considerar todas las placas que contengan alguna colonia típica y atípica.
Seleccionar todas estas colonias para su confirmación siguiendo las
indicaciones dadas anteriormente.
A. Confirmación empleando plasma de conejo:
1. De la superficie de cada colonia seleccionada, coger un inóculo con un asa
recta estéril y transferirla a un tubo de BHI. Incubar a 36 ºC durante 24 h.
2. Añadir 0,1 mL de cada cultivo a 0,3 mL de Plasma de conejo en tubos con
base cónica estériles e incubar a 35 ºC. Examinar la coagulación del plasma
después de 4 a 6 horas de incubación y, en caso de que el test sea negativo,
examinar de nuevo a las 24 h.
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