MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Para la determinación de la ...

4.1.2. pH
Servicio Antimicrobianos - INEI – ANLIS “Dr. Carlos G. Malbrán”
El pH para cada lote debe ser controlado cuando se prepara el medio. El agar debe tener un
pH 7,2 - 7,4 a temperatura ambiente y debe determinarse después de su solidificación. Si el
pH es demasiado bajo, ciertas drogas (pej. Aminoglucósidos, quinolonas y macrólidos)
parecerán menos activas; mientras otras (pej. tetraciclinas) parecerán tener mayor actividad.
Si el pH es demasiado alto se podrían esperar los efectos opuestos.
4.1.3. Humedad
Si justo antes de usar, hay exceso de humedad en la superficie, las placas deben ser
incubadas a 35ºC durante 10 - 30 min. Las placas deberán estar húmedas pero no mostrar
gotas sobre la superficie del medio.
4.1.4. Efecto de la Timina o Timidina
Los medios que contienen excesiva cantidad de timina o timidina pueden revertir los efectos
inhibitorios de las sulfonamidas y trimetoprima, produciendo así zonas más pequeñas,
menos nítidas o sin halo lo cual puede dar como resultado un informe de falsa resistencia.
El agregado de timidina fosforilasa o sangre lisada de caballo puede mejorar la nitidez de
los halos y la confiabilidad de las pruebas para sulfonamidas y trimetoprima frente a
patógenos comunes, excepto para enterococos. Para evaluar cada lote de Mueller Hinton
en su contenido de Timidina se debe utilizar una cepa control (Enterococcus faecalis
ATCC® 29212 o ATCC® 33186) que se prueba frente a discos de trimetoprima /
sulfametoxazol.
Un medio satisfactorio mostrará un halo de inhibición claro y definido de 20 mm o más.
4.1.5. Efectos por variación en la composición de cationes divalentes
La variación en cationes divalentes principalmente Ca++ y Mg++ afectarán los resultados
con tetraciclina, colistín y aminoglucósidos frente a Ps. aeruginosa. Un excesivo contenido
de cationes reducirá la zona de inhibición, mientras que bajas concentraciones de cationes
resultarán en zonas de inhibición mayores que las esperadas. Un exceso de zinc podría
reducir las zonas de inhibicón de los carbapenems.
Las pruebas realizadas con cada lote de agar M. Hinton deben estar de acuerdo con los
límites de control de la Tabla 3. Los resultados de las pruebas con las cepas patrones
deben ser cuidadosamente observados para detectar cualquier valor aberrante debido a la
composición de cationes del medio de cultivo.
4.1.6. Cepas con dificultades de crecimiento
Solo bacterias aeróbicas o facultativas que crecen satisfactoriamente en agar M. Hinton sin
suplementar podrían ser testeadas en este medio. Para los test con cepas que no crecen
satisfactoriamente en M. Hinton no suplementado (pej. S. pneumoniae, estreptococos Bhemolíticos
y viridans) , se adiciona sangre de oveja desfibrinada al medio fundido y
enfriado, en una concentración final de 5 % (V/V). Cuando la sangre se agrega al agar M.
Hinton, los límites del control de oxacilina y meticilina serán levemente menores (2-3 mm.) a
aquellos obtenidos con MH no suplementado. Esto podría resultar en zonas de inhibición
menores a los límites aceptables con Staphylococcus aureus ATCC® 25923 definidos en la
Tablas 3. El agregado de sangre de carnero puede causar una fina película de crecimiento
del microorganismo dentro de la zona de inhibición alrededor de los discos de sulfonamidas
y trimetoprima. El agar chocolate no debe usarse para las pruebas con Haemophilus
spp. El medio apropiado para este microorganismo es el descripto en la sección 6.1. Para N.
gonorrhoeae ver sección 6.2.
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