Memorias 2ra Jornada de Medicinas Complementarias y su ...

parásitos protozoarios T. b. rhodesiense, T. cruzi, Leishmania donovani y P.
falciparum.
Materiales y métodos
Rotación óptica: Polarímetro Perkin-Elmer 241. Espectro IR: Espectrómetro Perkin-
Elmer serie 1600 FTIR en celda de NaCl. CD: Espectro-polarímetro Jasco J-700.
EIMS: Espectrómetro de masas Hewlett Packard 5989A a 70 eV. Espectros 1 H-NMR,
13 C-NMR, DEPT, 1 H COSY, HMQC, HMBC (60 y 110 ms) y ROESY (300 ms) en
CD3OD o CDCl3 como solvente y TMS como estándar interno: Mercury 400. Los
desplazamientos químicos son reportados en unidades δ (ppm) y constantes de
acoplamiento (J) en Hz. Silica gel SDS chromagel 60 A CC (6–35 μm) fue utilizada
para VLC, y silica gel 60 F254 Macherey–Nagel para TLC analítica y preparativa.
La recolección del material vegetal se realizó en el municipio de la Sierra (1833
msnm), departamento del Cauca (Colombia) en septiembre de 2003. Las muestras
fueron autenticadas por el Dr. Bernardo Ramírez. Ejemplares de esta especie (voucher
número 17-169) se encuentran en el Museo de Historia Natural, Sección Herbario,
Universidad del Cauca de Colombia.
El material vegetal seco (771.3 g de bulbos) fue exhaustivamente macerado con etanol
a temperatura ambiente (3 x 1.5 L). La solución se evaporo bajo presión reducida y el
residuo se acidifico con H2SO4 al 5 %. El filtrado de la solución ácida fue extraído con
Et2O para eliminar el material neutro y se alcalinizó posteriormente con NH4OH (pH =
8-9) y extraído con AcOEt. La solución AcOEt se concentro en vació obteniendo así el
extracto A (2.03 g). El extracto A se sometió a una separación cromatográfica CLV en
sílica gel 60 A C.C (Chromagel, Art. 11677) y comenzando la elusión con hexano, 100
%, luego se incremento progresivamente la cantidad de AcOEt hasta 100 % y
entonces se adiciono MeOH lentamente hasta completar la elusión (1:1). Fueron
obtenidas tres fracciones principales. La fracción I se cromatografió utilizando TLC
preparativa en sílica gel 60 (SDS, Art. CCM121354) eluyendo con AcOEt-MeOH (7:3)
y con Sephadex LH20 (Amersham Biocience, 17-0090-01) eluyendo con MeOH, se
obtuvo así los alcaloides pseudolicorina (15 mg), faedranamina (18 mg) y
haemantamina (15 mg). La fracción II fue separada utilizando repetidamente TLC
preparativa en sílica gen 60 eluyendo con Acetona-MeOH (7:3) y con Sephadex LH20
eluyendo con MeOH, de esta forma se obtuvo sanguinina (5 mg), galantamina (5 mg) y
epinorgalantamina (4 mg). La fracción III se cromatografio nuevamente por CC en
sílica gel 60 y por sucesivas TLC preparativa eluyendo con BuOH-AcOH-H2O saturado
con NH3, obteniéndose así los alcaloides tipo betaina, zefbetaina (8 mg) y ungeremina
(6 mg). Los ensayos de actividad biológica frente a los parásitos protozoarios y
actividad citotóxica frente a células L6 se desarrollo como describe Labraña y col.,
(2002).
Resultados y Discusión
El fraccionamiento del extracto EtOH de los bulbos de P. dubia con partición solventesolvente
y gradiente de pH permitió obtener una fracción alcaloidal. Una vez sometida
a múltiples purificaciones cromatográficas, esta fracción arrojo los compuestos 1 – 8
(figura 1). El espectro IR de faedranamina (1) mostró una banda de absorción ancha a
3200 cm -1 , así como una banda a 936 cm -1 asociada a un grupo hidroxilo y a uno
metilendioxi, respectivamente. Su EIMS mostró un pico base a m/z 301, el cual
representa el ion molecular. En el espectro NMR 1 H (400 MHz, CD3OD), las
constantes de acoplamiento entre H-1 y H-2 (J = 5.5 Hz), H-2 y H-3 (J = 10.0 Hz), H-3
y H-4β (J = 2.5 Hz), junto con la constante geminal alrededor de 16.0 Hz entre H-4α y
H-4β, permite la asignación del grupo hidroxilo en la posición C-1 y la instauración
entre C-2 y C-3. La multiplicidad de H-4a confirma la asignación del doble enlace, con
la notable diferencia del H-4a axial en alcaloides tipo haemantamina (Bastida y col.,
2006). Los dos protones H-6 fueron claramente diferenciados como un sistema AB con
una constante geminal de 17.0 Hz. El protón aromático singlete fue adscrito a H-10
debido a la correlación a tres enlaces HMBC con C6a y C-10b, en adición a la
correlación NOESY con H-1, permitiendo la localización del grupo metoxilo aromático