R.I.J. MacDermott, et al. / European Journal of Obstetrics & Gynecology and Reproductive Biology (Ed. Española) 2001; 1: 156-160 157do <strong>de</strong> <strong>hidroxiprolina</strong> en casos <strong>de</strong> RPM [3]. Algunos estudioshan muestreado el <strong>amnios</strong> [2, 3, 5, 6] y otros el corio<strong>amnios</strong>[1, 4].Algunos investigadores han estudiado sólo <strong>membranas</strong><strong>de</strong> gestaciones a término [1, 5] y otros, <strong>membranas</strong> <strong>de</strong>todas las gestaciones [2-4, 6]. Algunos han tomado muestras<strong>de</strong> cerca <strong>de</strong> la zona <strong>de</strong> <strong>rotura</strong> [3-6], otros <strong>de</strong> una zonadistante a la zona <strong>de</strong> <strong>rotura</strong> [4, 6], y otros no han reseñadola zona <strong>de</strong> muestreo [1, 2]. El contenido <strong>de</strong> <strong>hidroxiprolina</strong>se ha medido por unidad <strong>de</strong> peso [2-6] y por unidad <strong>de</strong> área<strong>de</strong> membrana [1]. A la vista <strong>de</strong> los resultados contradictorios<strong>de</strong> los distintos estudios, se consi<strong>de</strong>ró apropiado hacerun nuevo estudio. El <strong>amnios</strong> es consi<strong>de</strong>rablemente másfuerte que el corion [8] y su contenido <strong>de</strong> <strong>hidroxiprolina</strong> esmás <strong>de</strong>l doble [9]. Por estas razones, se midió el contenido<strong>de</strong> <strong>hidroxiprolina</strong> <strong>de</strong>l <strong>amnios</strong>. El contenido <strong>de</strong> <strong>hidroxiprolina</strong><strong>de</strong>l <strong>amnios</strong> en la zona adyacente a la zona <strong>de</strong> <strong>rotura</strong>muestra variaciones gran<strong>de</strong>s [6] y, por tanto, se tomaronmuestras <strong>de</strong> una zona distante a la zona <strong>de</strong> <strong>rotura</strong>. El contenido<strong>de</strong> <strong>hidroxiprolina</strong> se midió por unidad <strong>de</strong> peso secoy por unidad <strong>de</strong> superficie <strong>de</strong> <strong>amnios</strong>. El objetivo <strong>de</strong>l estudiofue <strong>de</strong>terminar si la RPM se asocia con una reduccióngeneralizada <strong>de</strong>l contenido <strong>de</strong> <strong>hidroxiprolina</strong> <strong>de</strong>l <strong>amnios</strong>.Se <strong>de</strong>terminaron y se ajustaron los factores contaminantespotenciales. Se investigó la relación entre varios parámetros<strong>de</strong> la fuerza amniótica y el contenido <strong>de</strong> <strong>hidroxiprolina</strong>.MétodosSe recogieron las <strong>membranas</strong> fetales <strong>de</strong> 133 mujeres,entre las 21 y 45 semanas <strong>de</strong> gestación, a las 3 horas <strong>de</strong>lparto. La distribución <strong>de</strong> los casos, <strong>de</strong> acuerdo a la gestacióny al momento <strong>de</strong> la <strong>rotura</strong> <strong>de</strong> las <strong>membranas</strong>, se muestraen la tabla 1. Se <strong>de</strong>finió como RPM la confirmación <strong>de</strong>pérdida <strong>de</strong> líquido por la vagina antes <strong>de</strong>l comienzo <strong>de</strong>l trabajo<strong>de</strong>l parto.Se consi<strong>de</strong>ró como <strong>rotura</strong> <strong>de</strong> <strong>membranas</strong> en su tiempo la<strong>rotura</strong> <strong>de</strong> <strong>membranas</strong> espontánea <strong>de</strong>spués <strong>de</strong> una dilatacióncervical <strong>de</strong> 4 cm. Se tomaron muestras también <strong>de</strong> <strong>amnios</strong><strong>de</strong> mujeres que se iban a someter a cesárea. Se utilizaronlos datos menstruales, a menos que difirireran <strong>de</strong> los ecográficosen más <strong>de</strong> siete días. Se <strong>de</strong>finió como parto a términoel parto que se producía a las 38 semanas o más <strong>de</strong>gestación.La muestra <strong>de</strong>l <strong>amnios</strong> <strong>de</strong> una zona distante a la zona <strong>de</strong><strong>rotura</strong> se almacenó a -20ºC hasta su análisis. En 80 casosse obtuvo una muestra <strong>de</strong> una área conocida (80 mm x 6mm) usando un estilete <strong>de</strong> acero.El <strong>amnios</strong> se liofilizó y se pesó antes <strong>de</strong> la hidrólisis con0,75 ml <strong>de</strong> ácido hidroclórico 6 N, a 110ºC durante 24horas. Se utilizó cloramina T para oxidar la <strong>hidroxiprolina</strong>a pirrol y ácido carboxílico-pirrol 2. Estos productos sehicieron reaccionar con 4-dimetil-amino-benzal<strong>de</strong>hido enpropano-2-ol y ácido perclórico para formar un complejocoloreado rojo, y se midió su absorbancia a 560 nm, usandoun analizador <strong>de</strong> flujo continuo. El resultado análogoobtenido se leyó manualmente usando un gráfico calibradofrente a una solución acuosa estándar <strong>de</strong> <strong>hidroxiprolina</strong>. Elcontenido <strong>de</strong> <strong>hidroxiprolina</strong> se calculó por mg <strong>de</strong> peso seco<strong>de</strong> <strong>amnios</strong> y por cm 2 <strong>de</strong> <strong>amnios</strong> (cuando se conocía el área<strong>de</strong>l <strong>amnios</strong>).Se midió la fuerza <strong>de</strong> varias muestras <strong>de</strong> <strong>amnios</strong> <strong>de</strong> lasmismas <strong>membranas</strong> usando una prueba <strong>de</strong> distensibilidad(Diastron Ltd. Camberley, Surrey, Reino Unido). El<strong>amnios</strong> se mantuvo hidratado con solución salina y se cortaronmuestras que medían 80 mm x 6 mm <strong>de</strong> anchura,usando un estilete <strong>de</strong> acero. Las muestras se colocaron enpinzas <strong>de</strong> 10 mm <strong>de</strong> profundidad <strong>de</strong>l dispositivo <strong>de</strong> prueba<strong>de</strong> la elasticidad, para dar un tamaño <strong>de</strong> prueba <strong>de</strong> 60mm x 6 mm.Las muestras se distendieron en intervalos <strong>de</strong> 60mm/min hasta que se produjo la <strong>rotura</strong>. Todas las pruebasse realizaron a las 4 horas <strong>de</strong>l parto. Los siguientes parámetrosse obtuvieron por análisis <strong>de</strong> or<strong>de</strong>nador <strong>de</strong> sobrecurva resultante <strong>de</strong> carga frente a tensión (CCFT): cargamáxima, tensión máxima, pendiente <strong>de</strong> CCFT (medida <strong>de</strong>la elasticidad) y área bajo la CCFT (medida <strong>de</strong> trabajonecesario para romper el <strong>amnios</strong>).Se tomaron muestras pareadas en un número limitado <strong>de</strong>casos para valorar la variación <strong>de</strong>l contenido <strong>de</strong> hidroxi-Tabla 1La distribución <strong>de</strong> los casos <strong>de</strong> acuerdo a la gestación y el momento <strong>de</strong> la <strong>rotura</strong> <strong>de</strong> <strong>membranas</strong>Momento <strong>de</strong> la ruptura Gestación HP/mg <strong>amnios</strong> HP/cm 2 <strong>amnios</strong>(n=133)(n=80)Rotura <strong>de</strong> membrana en su tiempo A término 27 11Pretérmino 23 14RPM A término 19 12Pretérmino 36 22Cesárea programada A término 12 9Pretérmino 16 12
158 R.I.J. MacDermott, et al. / European Journal of Obstetrics & Gynecology and Reproductive Biology (Ed. Española) 2001; 1: 156-160Tabla 2<strong>Contenido</strong> <strong>de</strong> <strong>hidroxiprolina</strong> <strong>de</strong> acuerdo con la gestación y el momento<strong>de</strong> la <strong>rotura</strong> <strong>de</strong> <strong>membranas</strong>Momento Gestación Hidroxiprolina Hidroxiprolina<strong>de</strong> la ruptura media media(DE) (µg/mg (IQR) (µg/cm 2<strong>amnios</strong>) <strong>amnios</strong>)RPM A término 44,3 (6,9) 44,3 (36,3-59,3)Pretérmino 51,4 (6,4) 50,3 (35,8-61,5)Rotura <strong>de</strong> membranaen su tiempo A término 46,7 (5,9) 42,4 (37,8-50,8)Pretérmino 52,7 (6,2) 40,9 (39,9-47,0)Cesárea programada A término 46,7 (8,9) 33,3 (22,8-38,4)Pretérmino 51,5 (5,6) 35,5 (31,1-44,1)prolina entre partes adyacentes y distantes <strong>de</strong>l <strong>amnios</strong> (noincluyendo la zona <strong>de</strong> <strong>rotura</strong>).Se realizó una análisis <strong>de</strong> regresión múltiple con RPM,cesárea programada, hábito <strong>de</strong> fumar y sexo masculino <strong>de</strong>lfeto, como variables categóricas y con la gestación comovariable continua. Se utilizó la regresión simple para <strong>de</strong>terminarla relación entre el contenido <strong>de</strong> <strong>hidroxiprolina</strong> y laspropieda<strong>de</strong>s mecánicas <strong>de</strong>l <strong>amnios</strong>.ResultadosLos valores <strong>de</strong>l contenido <strong>de</strong> <strong>hidroxiprolina</strong> en relacióncon la gestación y el momento <strong>de</strong> la <strong>rotura</strong> <strong>de</strong> las <strong>membranas</strong>se muestran en la tabla 2. Los valores <strong>de</strong> <strong>hidroxiprolina</strong>/cm2 <strong>de</strong>l <strong>amnios</strong> no tuvieron una distribución normal y,por tanto, se expresan como media <strong>de</strong> intervalos intercuartiles(IQR). En los análisis <strong>de</strong> regresión múltiple no seencontró ninguna asociación entre el contenido <strong>de</strong> <strong>hidroxiprolina</strong>(por mg o por cm 2 ) y el momento <strong>de</strong> la <strong>rotura</strong> <strong>de</strong> las<strong>membranas</strong>. Hubo una correlación inversa fuerte entre lagestación y el contenido <strong>de</strong> <strong>hidroxiprolina</strong> por mg <strong>de</strong><strong>amnios</strong> (r=-0,42, p
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