RVCTA Volumen 8 - Número 2

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125 Cuadro 3.- Resultados obtenidos mediante PCR al analizar diferentes concentraciones de ADN de Salmonella entérica serovariedad Enteritidis ATCC 13076 para la determinación del límite de detección de la técnica. Concentración ADN (µg/mL) Gen invA 100 (+) 50 (+) 10 (+) 1 (+) 0,75 (-) 0,5 (-) 0,25 (-) 0,125 (-) 0,0625 (-) (+): presencia de producto de amplificación de 389 pb correspondiente al gen invA. (-): ausencia de producto de amplificación de 389 pb correspondiente al gen invA. de inhibidores en muestras de alimentos, puede actuar a diferentes niveles durante el proceso de extracción y amplificación de los ácidos nucleicos y, eventualmente, conducir a la obtención de resultados falsos negativos (Rossen et al., 1992; Alcázar-Montañez et al., 2006). Al analizar el ADN proveniente de los caldos lactosado, TT y RV, se detectó el producto de amplificación de 389 pb correspondiente al gen invA en todas las muestras de lechugas inoculadas artificialmente con diluciones en el intervalo de concentraciones comprendido entre 10 1 a 10 5 UFC/mL. No se observó un efecto inhibidor del alimento en estudio sobre la reacción de PCR (Fig. 4). Se analizó la detección del género Salmonella en lechuga (L. sativa L. var. Capitata) por medio del cultivo convencional y la PCR. El método molecular permitió la detección de Salmonella en el intervalo de concentraciones comprendido entre 10 1 y 10 5 UFC/mL. Para todas las reacciones de amplificación el desempeño de los controles (control negativo de muestra, control negativo de reactivo, control negativo y control positivo) fue el esperado (Cuadro 4). Por otra parte, se demostró un muy buen grado de concordancia entre el cultivo y la técnica de PCR, ya que el valor calculado del índice K fue de 1. La PCR para detección del gen invA, marcador del género Salmonella, evaluada en este trabajo fue incorporada a un laboratorio de microbiología de alimentos de la ciudad de Rosario (Argentina) para realizar la evaluación de la sanidad de las hojas de lechuga (Lactuca sativa L. var. Capitata) destinadas a consumo humano.
Casabonne, Cecilia et al. 126 Figura 4.- Resultado de la amplificación del gen invA obtenido a partir del ADN extraído de las diluciones bacterianas en caldo lactosado. Calle 1: marcador 100 pb; calles 2-6: concentraciones 10 5 a 10 1 UFC/mL; calle 7: control positivo Salmonella enterica serovariedad Enteriditis ATCC 13076; calle 8: control negativo muestra; calle 9: control negativo (ADN E. coli ATCC 25922); calle 10: control negativo de reactivo; calle 11: control positivo PCR (ADN Salmonella enterica serovariedad Enteriditis ATCC 13076). Cuadro 4.- Resultados obtenidos para el cultivo y la PCR para cada nivel de contaminación del alimento. Nombre Nivel de inoculación (UFC/mL) Cultivo Resultado PCR (gen invA) Nivel 1 10 1 + De Nivel 2 10 2 + De Nivel 3 10 3 + De Nivel 4 10 4 + De Nivel 5 10 5 + De CNM 0 - ND CNR 0 - ND CN 10 8 - ND CP 10 8 + De UFC: unidades formadoras de colonias. De: detectable. ND: no detectable. CNM: control negativo de muestra. CNR: control negativo de reactivo. CN: control negativo. CP: control positivo. (+): se obtuvo desarrollo de Salmonella spp. (-): no se obtuvo desarrollo de Salmonella spp.
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