Mai 2004

1UNIVERSITE HENRI POINCARE, NANCY 1-FACULTE DES SCIENCESSUJETD'EXAMENDIPLOME: Licence de BiochimieMagistère Microbiologie EnzymologieDurée du sujet: 60minNom du rédacteur: B. CharpentierEpreuve de : Génie GénétiqueSession de : Mai 2004Date: 14 mai 2004.Horaire: 9h-11h.UE09L0 Documents autorisés _lN 0 N ~II0 Calculatrice autorisée 8] lNoNI(1)(IIRayer la mention inutile.,1:-Accompagnezvos réponses et explicationsaux questionsqui suivent de schémas clairs. précis et bienannotés.Question1 :a- Quellessont les caractéristiquesminimalesd'un vecteur d'expression bactérien? Expliquez.b- Donnezun exemple de système performantd'expression par induction.c- Quelssont les problèmes liés à une expression hétérologuechez E. coli? Pourquoi le génotype dela souched'E. coli est à prendre en compte pour remédier à certains de ces problèmes?d- Pourquoi peut-il être intéressant de produire les protéines d'intérêts sous forme de protéines defusion?.Question2 :a- Décrivezles grandes étapes des méthodes traditionnelles employées pour la construction desbanquesd'ADNc.b- La représentativitéde la banque dépend beaucoup de la qualité de la synthèse de l'ADNe. Quellepropriétéde l'enzyme assurant cette synthèse est alors à prendre en compte? Expliquez.c- A partird'une banque d'expression, commentpeut être effectuée la recherche du clone d'intérêt?Question3 :a-Donnezl'utilité et le principe d'une méthode de RT-PCR en temps réel.