REVIEW: Ellagitanin; Biosintesis, Isolasi, dan Aktivitas Biologi

28Biofarmasi 1 (1): 25-38, Pebruari 2003senyawa dan tumbuhannya. Oleh karena itu, penelitianbiosintesis ellagitanin sekarang mengalamiperkembangan, tidak hanya difokuskan pada beberapajenis tumbuhan di atas, namun sudah semakinmeluas.Jalur biosintesis ellagitanin, terdiri atas tiga tahapanreaksi. Tahap pertama adalah pembentukanasam galat (1), sebagai penyusun struktur primerellagitanin (Gambar 1). Tahap ini diawali dari jalurshikimat (8) yang membentuk dua arah reaksisintesis asam galat. Arah pertama melaluipembentukan L-fenilalanin (10) dengan perantaraarogenate (9). Pembentukan asam sinamat dari L-fenilalanin (10) dihalangi oleh enzim L-AOPP (L-2-aminooxy-3-phenylpropionic acid), dan reaksidiarahkan pada senyawa kafeat (11). Arah reaksikedua melalui pembentukan 3-dehidroshikimat (12)yang mengalami hidrogenasi pada atom C ke-3sehingga terbentuk asam galat (Gross, 1992).Tahap kedua adalah pembentukan pentagalloilglukosayang diawali oleh reaksi asam galat(1) dengan uridin 5-difosfat glukosa (15) untukmembentuk -glukogallin (16) (Gambar 2). Denganpenambahan 4 molekul galloil, -glukogallin diubahmenjadi 1,2,3,4,6-pentagalloilglukosa (17). Empatmolekul galloil menggantikan atom H pada empatgugus hidroksil. Proses penggantian atom Htersebut dinamakan reaksi galloilasi. Reaksi iniberurutan mulai dari gugus hidroksil ke-1, lalu ke-6,ke-2, ke-3, dan yang terakhir ke-4. Reaksi ini membutuhkanenzim galloiltransferase (Gross, 1992).Tahap terakhir merupakan tahap yang secaralangsung menuju ke pembentukan senyawasenyawagolongan ellagitanin (Gambar 2). Sepertitelah disebutkan sebelumnya, biosintesis senyawaellagitanin berbeda-beda tergantung jenis senyawadan jenis tumbuhan penghasilnya. Senyawaellagitanin dihasilkan dari oksidasi (atau lebihtepatnya dehidrogenasi/pelepasan atom H darigugus OH) pentagalloilglukosa. Residu sederhanayang dihasilkan dari proses dehidrogenasi dua grupgalloil dari pentagalloilglukosa adalah HHDP (2).Dehidrogenasi yang terjadi diikuti dengan reaksiperangkaian (coupling) antar atom C dua gugusgalloil. Gallotanin yang mengalami oksidasiperangkaian C-C dan C-O pada gugus galloil yangberdekatan menghasilkan ellagitanin (Gross, 1992).EKSTRAKSI DAN ISOLASIELLAGITANINBahan tumbuhanPada prinsipnya, semua bagian jaringantumbuhan penghasil ellagitanin dapat digunakansebagai sumber ekstrak ellagitanin, namun jenisdan kadar pada setiap jaringan cenderung berbedabeda.Dalam menentukan bagian tumbuhan yangakan diekstraksi, perbandingan kadar senyawa padasetiap jaringan perlu dipertimbangkan. Selain itu,umur jaringan juga perlu diperhatikan. Umumnya,jaringan tua memiliki kandungan metabolitsekunder lebih banyak daripada jaringan muda.Tanin dapat diekstraksi dari seluruh bagiantumbuhan, meliputi daun, cabang, batang, akar,dan buah (Scalbert, 1991). Bagian yang kaya akantanin, berbeda-beda tergantung jenis tumbuhannya,misalnya pada Caesalpinia spinosa organ buahmemiliki kandungan tanin paling tinggi (Galvez etal. 1997), sedangkan pada pohon oak (Quercus)kandungan tanin banyak terdapat di batang (Helm,2000). Umumnya ekstraksi tanin dilakukan daridaun dan batang tumbuhan. Jaringan yangdiekstrak dapat berupa jaringan segar maupun yangsudah kering. Untuk analisis, sebaiknya digunakanjaringan segar (Scalbert, 1992). Namun,kadangkala hal itu tidak memungkinkan karenajauhnya jarak pengambilan sampel denganlaboratorium. Untuk itu sampel tumbuhan dapatdibekukan, dikeringbekukan, atau dikeringanginkan.Metode kering-beku merupakan cara yang palingaman untuk mencegah perubahan jaringan, yangberakibat pada perubahan kadar tanin. Metode inidilakukan dengan menggunakan nitrogen cair.Jika nitrogen cair tidak tersedia, maka alternatifyang mudah adalah dikeringanginkan. Titik uapsenyawa ellagitanin sangat tinggi, misalnya padalagerstroemin (5) di atas 250 0 C, namun prosespengeringan sebaiknya dilakukan pada suhu kamaratau kurang dari 40 0 C. Pada suhu lebih dari 40 0 Cdapat terjadi penurunan kadar dan ekstrakbilitastanin secara drastis. Jika pengeringan dilakukandalam ruang yang kelembabannya tinggi, makapenggunaan kipas angin sangat disarankan. Hal iniakan mempercepat proses pengeringan danmencegah molekul air bereaksi dengan molekultanin melalui lukaluka pada jaringan.Ekstraksi dan IsolasiSenyawa tanin umumnya dapat larut denganpelarut dari polar sampai semipolar. Ekstraksi tanindari jaringan tumbuhan dilakukan denganmenggunakan pelarut aseton 70% atau metanol50% dalam air (FAO/IAEA, 2000). Lin et al. (2001)melakukan ekstraksi ellagitanin dari daun keringEuphorbia tirucalli dengan menggunakan pelarutaseton 60%. Sedangkan Machado et al. (2002)berhasil melakukan ekstraksi ellagitanin dari kulitbuah delima segar (Punica granatum; Punicaceae)dengan etanol. Seperti yang dilakukan oleh Liu etal. (2001), jika menggunakan air sebagai pelarut,proses ekstraksi harus berlangsung pada kondisi airmendidih. Suhu panas dapat membantuekstrabilitas tanin terhadap pelarut air.Prosedur ekstraksi biasa tidak cukup untukmengisolasi ellagitanin. Proses ekstraksi umumnyadilakukan secara berulang dan bertahap. Seringkali, ekstraksi dengan aseton 70% dilakukan berulangsampai tiga kali dan dilanjutkan ke tahapanisolasi. Banyak pekerjaan isolasi ellagitaninmengharuskan penggunaan kromatografi kolomsebagai salah satu tahapan isolasi. Ellagitanin dapatterpisah dengan baik menggunakan kolom pemisahSephadex LH-20, MCI-gel CHP 20P, atau ODS-AQ.Metanol dengan konsentrasi bertingkat merupakaneluen yang baik untuk memperoleh ellagitanin.