REVIEW: Ellagitanin; Biosintesis, Isolasi, dan Aktivitas Biologi

More documents

Recommendations

Info

30Biofarmasi 1 (1): 25-38, Pebruari 2003sama dengan reagen NaNO 2 . Sebanyak 0,5 mlekstrak dicampur dengan 2,0 ml reagen NaNO 2 atauHNO 2 0,1 M pada suhu lingkungan rendah.Absorbansi diukur pada panjang gelombang 600nm. Larutan standar yang digunakan adalah asamelagat (Harbone, 1996). Galvez (1997) menentukankandungan asam elagat (3) dalam buah Caesalpiniaspinosa dengan metode Hagerman dan Wilson(1990). Sebanyak 10 mg ekstrak dilarutkan dalam 1ml H 2 SO 4 2 N. Larutan dipanaskan 100 0 C selama 24jam, kemudian didinginkan. Sebanyak 1 ml larutantersebut ditambahkan dalam larutan piridin 1,1 mldan 0,1 ml HCL. Pada suhu 30 0 C larutan ditambah0,1 ml NaNO 2 1%. Absorbansi diukur pada 538 nm.Setelah 36 menit inkubasi pada suhu 30 0 C, dilakukanpengukuran absorbansi lagi. Selisih absorbansisebanding dengan kandungan asam elagatdalam sampel. Kadar asam elagat dihitung denganrumus A 538 = (0,3x mg kadar asam elagat)–0,04).Metode analisis dengan HPLC (high performanceliquid chromatography) merupakan prosedur yangbiasa ditempuh untuk menganalisis kandunganellagitanin suatu tumbuhan obat. Prosedur ini cocokdilakukan karena kinerja HPLC yang baik untukpemisahan senyawa-senyawa yang sulit menguap,termasuk di antaranya ellagitanin. Dengan waktuyang singkat dan persiapan yang tidak rumit, hasilpemisahan dapat segera diperoleh, untuk kemudiandianalisis baik kuantitatif maupun kualitatif.Meskipun membutuhkan biaya yang relatif mahal,setidaknya prosedur HPLC merupakan proseduryang mutakhir dalam bidang fitokimia.semua senyawa fenol dan turunannya (Salminen etal., 1999). Asam elagat (3) dapat dideteksi padapanjang gelombang 260 nm (Rauha, 2001), -punicalagin (20), -punicalagin (21), -punicalin(22), dan -punicalin (23) dideteksi pada panjanggelombang 350 nm (Machado et al., 2002).Penentuan struktur ellagitanin hasil pemisahandidasarkan pada data spektrum MS (massspectrometric) dan spektrum NMR (nuclearmagnetic resonance). Dua instrumen tersebutmenjadi standar dalam analisis struktur senyawaellagitanin. Namun untuk pemula, membuat analisisspektrum MS dan NMR adalah pekerjaan yang relatifsulit. Teknik yang dapat digunakan untuk MS,misalnya FAB-MS (fast atom bombardement-MS)(Hatano et al., 1992). Sedangkan untuk NMR baikH-NMR maupun C-NMR, antara lain COSY, NOESY,HMQC, dan HMBC (Lin et al., 2001).Perkembangan teknologi kromatografi saat initelah memungkinkan kombinasi instrumen HPLCdengan MS. Dengan kombinasi HPLC-MS pekerjaananalisis struktur menjadi lebih mudah. Senyawahasil pemisahan dari HPLC dapat secara langsungdianalisis spektrum massanya di instrumen MS.Terdapat beberapa pilihan teknik MS yang dapatdikombinasikan dengan HPLC, baik fase normal (NP)maupun fase balik (RP), antara lain API(atmospheric pressure ionization), APCI(atmospheric pressure chemical ionisation) (Rauha,2001), dan ESI (electrospray ionization) (Salminenet al., 2002) Teknik MS yang relatif sensitif adalahdengan MALDI-TOF-MS (matrix-assisted laserdesorption/ionization time-off-flight–MS), namunsampai sekarang teknik ini belum memungkinkanuntuk dikombinasikan dengan HPLC (Rauha, 2001).AKTIVITAS BIOLOGI(20) -punicalagin R1=H, R2=OH, R3=R4=H(21) -punicalagin R1=OH, R2=H, R3=R4=H(22) -punicalin R1=H, R2=OH, R3=R4=HHDP(23) -punicalin R1=OH, R2=H, R3=R4=HHDPMetode standar yang biasa digunakan adalahkombinasi instrumen RP-HPLC (Reverse Phase-HPLC) atau HPLC-fase balik dengan detektor UV/Vis(ultra violet/visible) atau DAD (diode arraydetector). Panjang gelombang 280 nm merupakanpanjang gelombang yang umum untuk deteksiAktivitas biologi ellagitanin merupakan implikasidari ikatan antara ellagitanin dengan protein,senyawa dengan berat molekul tinggi, senyawasederhana, dan ion logam berat (Okuda et al.,1992). Ikatan tersebut membentuk komplekssenyawa yang dapat menyebabkan perubahanfisiologis dalam sel atau jaringan mahluk hidup.Berbagai penelitian telah dikembangkan untukmengeksplorasi ellagitanin dan aktivitas biologinya.Pada tahun 1992, baru sekitar 90 senyawaellagitanin yang diketahui memiliki aktivitas biologi(Okuda et al. 1992) dan diperkirakan masih banyakyang belum terungkap. Aktivitas biologi ellagitaninyang telah diketahui antara lain sebagai antidiabetes,anti-mikrobia, anti-virus, anti-hipertensi,anti-oksidan, dan anti-kanker/tumor. Dari sekianbanyak penelitian yang telah dilakukan, belum adayang menunjukkan efek toksik ellagitanin.Anti-diabetesDiabetes mellitus (DM) merupakan penyakitfisiologis berupa perubahan homeostasis glukosasehingga kadar glukosa dalam plasma darahmengalami kenaikan di atas normal. Kondisi inisering disebut hiperglikemik (Maher, 2000).
HERNAWAN dan SETYAWAN – Ellagitanin 31Berbagai jenis tumbuhan obat telahdimanfaatkan untuk terapi penyakittersebut. Banyak penelitian telahsampai pada isolasi senyawa aktiftumbuhan yang mampu memberikanefek hipoglikemik atau anti-diabetes.Hayashi et al. (2002) berhasilmengisolasi lagerstroemin (5), flosin B(18), dan reginin A (19) dari daunkering bungur (L. speciosa) untuk ujianti-diabetes secara in vitro.Sebelumnya telah diketahui bahwaekstrak daun bungur memiliki aktifitashipoglikemik (Mishra et al.1990;Kakuda et al.,1996; Liu et al., 2001), yang manaketiga senyawa ellagitanin tersebut diketahuiberkaitan dengan efek hipoglikemik ekstrak daunbungur.Efek hipoglikemik yang diberikan oleh ellagitanindaun bungur berupa peningkatan aktifitas transporglukosa pada jaringan adiposa. Kemampuanlagerstroemin (5) dan flosin B (18) hampir setengahkali kemampuan insulin dalam meningkatkankecepatan transpor glukosa. Bahkan reginin A (19)menunjukkan aktifitas yang hampir sama denganinsulin. Pada konsentrasi 0,04 mM, kecepatantranspor glukosa meningkat menjadi hampir 0,5nmol/5 menit, padahal pada kontrol hanya 0,1nmol/5 menit. Insulin sendiri meningkatkantranspor glukosa sampai 0,48 nmol/5 menit. Inimenunjukkan bahwa ellagitanin khususnya regininA, dalam daun bungur cukup berpotensi untukmengantikan peran hormon insulin (Hayashi, 2002).Mekanisme peningkatan kecepatan transporglukosa oleh ellagitanin tersebut diperkirakanmelalui jalur yang sama dengan jalur kerja insulin.Perkiraan ini didasarkan pada fakta bahwa kerjaellagitanin dihambat oleh wortmanin (Hayashi et al.,2002). Sedangkan wortmanin itu sendiri merupakansenyawa yang dapat menghambat (atau lebihtepatnya menutup jalur) kerja insulin (Standaert etal., 1996).Asam elagat (3) dalam daun meniran (Phyllantusniruri; Euphorbiaceae) juga diketahui memilikiaktifitas hipoglikemik, baik pada hewan percobaanmaupun penderita diabetes. Kandungan asamelagat (3) dalam tumbuhan tersebut menghambatkerja enzim aldose reduktase. Enzim ini bekerjapada jalur poliol (pembentukan sorbitol dan fruktosadari glukosa). Pada penderita DM, prosespengubahan glukosa menjadi fruktosa terganggu.Untuk mengembalikan keseimbangan metabolismeglukosa harus ada penghambatan kerja enzimaldose redukstase (Trueblood dan Ramasamy,1998). Karena kerja enzim aldose reduktasedihambat oleh asam elagat (3) maka prosespeningkatan kadar glukosa darah dapat menurundan metabolisme glukosa menuju ke arahkeseimbangan (Taylor, 2003; Shimizu et al., 1989).Rubus imperialis (Rosaceae) merupakantumbuhan obat yang biasa digunakan sebagaibahan untuk terapi DM oleh penduduk Brazil(Kanegusuku et al., 2002). Kandungan ellagitanin,3-O-metilelagat-4-O-rhamnose (24), dalamHOH 3 COOOOOOHO-rhamnose(24) 3-O-metilelagat-4-OrhamnoseHOHOHOHOOH HOtumbuhan tersebut diperkirakan berkaitan denganefek hipoglikemik yang diberikan oleh tumbuhantersebut pada penderita diabetes. Kondisihiperglikemia ini dapat menyebabkan aktivasi PKC(protein kinase C). Aktifnya PKC akan menginduksiberbagai penyakit kardiovaskuler dan komplikasiturunan diabetes lainnya (Koya dan King, 1998).Ellagitanin merupakan inhibitor PKC yang lebih kuatdibandingkan dengan gallotanin (Bruyne et al.,1999). Oleh karena itu, ellagitanin juga dapatmenurunkan resiko komplikasi yang diakibatkanoleh DM. Tanin merupakan senyawa yangberpotensi besar sebagai agen anti-mikrobia(Scalbert, 1991). Mekanisme anti-mikrobia taninantara lain terjadi melalui inaktivasi adhesinmikrobia, penghambatan kinerja enzim, danpenghambatan transpor protein (Cowan, 1999).Anti-mikrobia dan virusPengujian aktifitas anti-mikrobia terhadapEpidermophyton floccosum, Microsporum canis,Tricophyton mentagrophytes, T. rubrum, T.tonsurans, T. terreste, Penicillium italicum,Aspergillus fumigatus, Mucor racemosus, Rhizopusnigricans, Candida albicans, C. glabrata, Candidatakrussei, dan Cryptococcus neofarmans,menunjukkan bahwa senyawa-senyawa taninterhidrolisiskandan flavonoid memiliki variasiaktifitas yang berbeda-beda tergantung jenissenyawa dan jenis mikrobia sasaran. Ellagitanin,corilagin (25), memiliki aktifitas yang sama denganamfotericin B dan conazole terhadap C. glabrata(Latte dan Kolodziej, 2000).Punicalagin (20–21) dari delima mampumenghambat pertumbuhan beberapa strainStaphylaococcus aureus yang telah resistenterhadap antibiotik. MIC (minimum inhibitoryconcentration) yang dibutuhkan untuk menghambatsemua strain S. aureus adalah 61,5 µg ml. Hal yangberbeda diperoleh pada punicalagin yang diekstrakdari Terminalia citrina. MIC yang dibutuhkan relatiflebih besar yaitu, 768 µg ml (Machado et al., 2002).Punicalagin (20–21) yang diekstrak dari Combretummolle (Combretaceae) mampu menghambatpertumbuhan Mycobacterium tuberculosis (typushumanus ATCC 27294). Punicalagin diketahui lebihefektif dalam menghambat pertumbuhan M.tubercolosis dibandingkan saponin yang diekstrakdari tumbuhan yang sama (Asres, et al., 2001).Aktifitas anti-virus dari ekstrak tumbuhandiketahui berkaitan dengan kelompok senyawaOCCHOOOOHOOHO(25) corilaginOH
Page 1 and 2: Biofarmasi 1 (1): 25-38, Pebruari 2
Page 3 and 4: HERNAWAN dan SETYAWAN - Ellagitanin
Page 5: HERNAWAN dan SETYAWAN - Ellagitanin
Page 9 and 10: HERNAWAN dan SETYAWAN - Ellagitanin
Page 14: 38Biofarmasi 1 (1): 25-38, Pebruari

REVIEW: Ellagitanin; Biosintesis, Isolasi, dan Aktivitas Biologi

You also want an ePaper? Increase the reach of your titles

Delete template?

Save as template?