Studi di citotossicità del peptide ß-amiloide - A.I.M.A. Biella

Gli studi sulla citotossicità perciò, si occupano di comprendere in quale forma e con quale
meccanismo la proteina studiata esplica un effetto tossico sulle cellule.
Il lavoro di ricerca si può avvalere di metodi e colture cellulari diverse; di seguito sono
riassunti alcuni esempi di indagine.
La maggior parte dei gruppi di ricerca sceglie di lavorare con neuroni di ippocampo di
origine murina; le loro caratteristiche, simili a quelle presenti nei neuroni umani, rendono
infatti queste cellule un buon sistema modello per gli studi di citotossicità del β-amiloide.
Nel caso in cui si lavori con linee cellulari neuronali, gli effetti di una sostanza tossica
possono andare ad agire su diverse funzioni e caratteristiche della cellula come, ad
esempio, la secrezione di un ormone, la quantità di enzimi presenti, la concentrazione di
ioni al suo interno o le variazioni del potenziale di membrana. Tutti questi parametri
possono essere controllati nel tempo durante un periodo di incubazione delle cellule con la
sostanza da testare ed una loro variazione, non reversibile, può essere indice di un effetto
tossico.
I metodi di studio usati per queste ricerche dipendono, quindi, dal parametro cellulare
scelto: si può eseguire un saggio sull’attività della lattato deidrogenasi (LDH) per stabilire
la percentuale di cellule vive oppure si possono incubare le cellule con sonde fluorescenti
sensibili al calcio e stimare la variazione di concentrazione intracellulare di tale ione con
l’ausilio di un microscopio a fluorescenza.
Il saggio della lattato deidrogenasi, probabilmente per la sua semplicità, è uno dei metodi
più usati negli esperimenti di citotossicità; nel lavoro di Fezoui (Fezoui et al., 2000) sia
neuroni dell’ ippocampo sia cellule della glia murine sono incubate per 2-3 giorni in
presenza di β-amiloide e poi separate in aliquote per saggiare l’attività della lattato
deidrogenasi ed eseguire la conta delle cellule morte.
41