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Osservazione al microscopio a fluorescenza I vetrini si osservano con un Microscopio ad Epifluorescenza Nikon Eclipse E 800 dotato di filtro per fluoresceina, provvisto di fotocamera digitale Nikon Digital Camera DXM 1200 collegata al software Nikon ACT-1 2.00 che permette la realizzazione delle foto. Le immagini si acquisiscono in bianco e nero, con la coda della cometa orientata verso destra e si salvano in formato bitmap. In caso di frammentazione del DNA, dovuta alla presenza di agenti mutageni, i nuclei non si presentano in forma compatta e tondeggiante (Fig. 9) bensì mostrano una cometa di lunghezza più o meno estesa che rappresenta il danno subito dal DNA (Fig. 10). 10 µm Fig. 9. Nuclei di Vicia faba osservati al microscopio ottico dopo la corsa elettroforetica. I nuclei hanno una forma tondeggiante, indice di scarso danno al DNA. 32
10 µm Fig. 10. Nuclei di Vicia faba osservati al microscopio ottico, dopo la corsa elettroforetica. I nuclei hanno una forma allungata, indice di elevato danno al DNA. Analisi delle comete Le immagini al microscopio si analizzano con un programma apposito (Comet Score, di proprietà della TriTek Corporation) in grado di calcolare i parametri mostrati in Fig. 11 e Tab. 9. Per ciascun trattamento si analizzano un vetrino e una replica fino a raggiungere non meno di 80 nuclei. Fig. 11. Parametri analizzati dal software Comet Score. 33
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Ringrazio tutta la mia famiglia che
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