Tesi dottorato Annabella Russo.pdf - OpenstarTs - Università degli ...

migrazione dipende dal peso molecolare: le molecole di DNA più piccole e compatte
passeranno attraverso la matrice di agarosio più rapidamente rispetto ai frammenti più
grandi. Terminata la corsa elettroforetica e previa colorazione si passa all’osservazione
dei vetrini al microscopio ottico a fluorescenza: in caso di frammentazione del DNA,
dovuta alla presenza di agenti mutageni, i nuclei non si presentano in forma compatta e
tondeggiante bensì mostrano una cometa di lunghezza più o meno estesa. Le immagini
al microscopio sono analizzate con il programma Comet Score in grado di calcolare tutta
una serie di parametri quali: lunghezza della coda della cometa (in pixel), % di DNA nella
coda della cometa, Tail moment e Olive moment.
Il metodo Unichim per le germinazioni non prevede il contatto diretto tra
radichetta e terreno. Il seme germinante riceve l’acqua per capillarità. Queste condizioni
espongono potenzialmente i risultati ad una serie di artefatti in quanto si può ipotizzare
che le sostanze idrosolubili si concentrino, per evaporazione, a livello della carta bibula e
quindi in prossimità del seme. Le sostanze idrofobe, invece, potrebbero non entrare in
contatto con l’apice radicale. E’ da sottolineare, inoltre, che la parte apicale delle radici
interagisce in modo molto complesso con la rizosfera, ad esempio con la secrezione di
ioni e molecole, alcune delle quali hanno lo specifico compito di aumentare la
solubilizzazione di alcuni minerali del suolo, migliorando la nutrizione minerale della
pianta. Sulla base di queste considerazioni, si è ritenuto interessante verificare eventuali
differenze tra i risultati di Comet test effettuati su apici radicali cresciuti su carta bibula
(protocollo standard) e Comet test effettuati, alle medesime condizioni sperimentali, su
apici radicali cresciuti a diretto contatto con il terreno ed immersi in esso.
Al fine di trovare un terreno idoneo ad essere usato come bianco, ho eseguito
alcune prove del test su semi cresciuti su terricci di diversa composizione, con le due
modalità di germinazione appena descritte:
• terriccio universale commerciale (torba, fibre lignee e cellulosiche,
ammendante, concime organico, N 9%, P 6%, K 14%);
• terriccio per agrumi commerciale (torba, letame e miscela di materiali
vegetali);
• terreno argilloso proveniente dalla pedemontana pordenonese nei pressi
di Budoia (PN);
• composta da semi J. Innes formulata dall’omonimo istituto inglese (2 parti
di argilla di Budoia, 1 parte di torba irlandese e 1 parte di sabbia di
quarzo);
• terreno flyshoide sottoposto a biorimedio proveniente dal Parco di San
Giovanni (TS).
4