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Fig. 19. Tradescantia clone # 4430 mantenuto all’esterno, in un’area particolarmente soleggiata dell’Orto Botanico dell’<strong>Università</strong> <strong>degli</strong> Studi di Trieste. Protocollo Per l’esecuzione del saggio si è seguita la metodica descritta da Ma et al. (1994) che prevede l’utilizzo dei reagenti elencati in Tab. 10. Reagente Composizione Soluzione di Carnoy Acido acetico /etanolo (1:3) Etanolo 70% etanolo, 30% acqua Aceto - carminio 1% carminio, 45% acido acetico, 54% acqua bi-distillata Tab. 10. Reagenti utilizzati per la fissazione e la colorazione del contenuto delle antere. Una quindicina d’infiorescenze del clone vengono prelevate ed esposte per 24 ore nei siti da monitorare, con gli steli immersi in un becker contenente acqua. Parallelamente si espongono altrettante infiorescenze in un sito considerato non contaminato che funge da controllo. Al tempo di esposizione si fa seguire un periodo di 24 ore, detto “recovery time”, durante il quale le infiorescenze sono mantenute all’interno. Tale periodo permette alle cellule all’interno delle antere di raggiungere lo stadio di tetrade. 40
Trascorso questo periodo le infiorescenze vengono fissate in una soluzione di acido acetico ed etanolo (Soluzione di Carnoy) e quindi conservate in etanolo al 70%, a 4° C, fino all’osservazione al microscopio ottico. Preparazione dei vetrini Si prelevano i boccioli (Fig. 20) situati alla base dell’infiorescenza (Fig. 21) e si isolano le antere (Fig. 22). Fig. 20. Tradescantia clone # 4430: singolo bocciolo lungo 7 mm. Fig. 21. Tradescantia clone # 4430: stadio di sviluppo dell'infiorescenza utile per il test. 41
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