Rapporto annuale 2007 - Istituto di Ricerche Farmacologiche Mario ...

IRFMN
Inibizione del segnale mediato da PI3K/Akt
Nelle cellule di carcinoma ovarico il gene PI3K è spesso superespresso o mutato e questa
chinasi è quindi attivata costitutivamente. La conseguenza è la presenza di proteine coinvolte
nella sopravvivenza cellulare, come akt, costitutivamente fosforilate e quindi attive. Questo
progetto ha valutato la capacità dei tetra e pentainositoli fosfati ed alcuni dei loro analoghi, di
inibire il reclutamento di akt sulla membrana e la sua ulteriore fosforilazione. IP5 ed alcune
nuove molecole di sintesi sono stati capaci di ridurre la fosforilazione di akt e quindi la crescita
cellulare. L’attività di queste molecole non è limitata al tumore ovarico, ma è stata dimostrata
anche per altri tumori come quelli alla mammella e la prostata. La possibilità di combinare
inibitori di PI3K e di mTOR ( una chinasi a valle di PI3K e akt) è stata valutata. E’ stato infatti
dimostrato che alcuni inibitori di mTOR inducono una fosforilazione aberrante e quindi
attivazione di akt, e la combinazione di questi inibitori può bloccare questi effetti indesiderati. I
risultati in vitro mostrano che la combinazione ha almeno un effetto additivo e apre la via a
trovare nuovi trattamenti e verificare se la sequenza di combinazione può essere importante per
l’effetto antiproliferativo.
Oncosoppressori p53 e p73
L’analogo di p53, p73 è presente con diverse isoforme derivanti da uno splicing alternato del C-
terminale. Tra queste isoforme ce n’è una chiamata DNp73 nella quale il dominio di
transattivazione nell’N terminale della proteina è assente. Questa forma DN di p73 è un
antagonista di p53. Le isoforme DNp73 possono essere ulteriormente processate per splicing
alternato per generare un numero di isoforme con una non ancora chiarita attività biologica.
Abbiamo già dimostrato che la forma alfa di DNp73 non modifica, sia la crescita in vitro ed in
vivo delle cellule tumorali o la risposta al trattamento con farmaci antitumorali.
Abbiamo perciò generato cloni derivati dalla linea tumorale umana del polmone, H1299 che
esprime DNp73 beta dopo induzione. Questi cloni mostrano dopo induzione effetti interessanti
sulla crescita cellulare suggerendo che la presenza di alti livelli di questa isoforma può avere
effetti non predicabili. Poiché i dati sull’espressione delle isoforme di p73 nei pazienti con
tumore indicano che l’isoforma beta è presente nei tumori umani, i risultati ottenuti hanno una
particolare rilevanza e saranno ulteriormente analizzati per verificare quali sono gli effetti
collegati con la super espressione di questa isoforma.
Identificazione di un nuovo meccanismo proteolitico di attivazione di p73
Un altro membro della famiglia di p53, p73, è stato caratterizzato nel laboratorio per la sua
capacità di modificare la crescita e la risposta alla terapia delle cellule tumorali. Abbiamo
studiato ulteriormente questo potenziale soppressore tumorale studiando un nuovo possibile
meccanismo di attivazione. Abbiamo trovato un ulteriore meccanismo di regolazione per la
forma p73-alfa che avviene attraverso una rottura proteolitica connessa con l’attività della
proteasi serinica HtrA2. Dopo stimoli apoptotici HtrA2 si accumula nel nucleo e taglia p73-alfa
alla porzione C-terminale, aumentando la capacità transattivante della proteina sul gene bax ma
non sul gene p21 che regola il ciclo cellulare. In presenza di HtrA2, p73 è più incline a causare
attivazione della caspasi e frammentazione dei nuclei: p73 ha bisogno di HtrA2 per attivare ed
aumentare le sue funzioni apoptotiche. Questa nuova relazione tra p73 e HtrA2 può aiutare a
capire il diverso comportamento della proteina p73 nella fisiologia cellulare e nella risposta
delle cellule tumorali alla chemioterapia.
Meccanismi di azione di nuovi farmaci antitumorali
E’ stato caratterizzato il meccanismo di attivazione di un nuovo derivato antraciclinico,
nemorubicina (metossi morfolino doxorubicina). La nemorubicina ha un quadro di attività
antitumorale in vitro ed in vivo diverso da quello della doxorubicina.
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RAPPORTO ATTIVITA’ 2007