TRASCRIZIONE E MATURAZIONE DELL'RNA - Bgbunict.it
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<strong>TRASCRIZIONE</strong> E<br />
<strong>MATURAZIONE</strong><br />
DELL’RNA
LA <strong>TRASCRIZIONE</strong> COME PRIMA TAPPA NEL<br />
FLUSSO DAL GENOTIPO AL FENOTIPO
LA <strong>TRASCRIZIONE</strong> E’ IL PROCESSO<br />
ATTRAVERSO CUI SI PASSA DAL<br />
LINGUAGGIO DESOSSIRIBONUCLEOTIDICO<br />
DEL DNA A QUELLO RIBONUCLEOTIDICO<br />
DELL’RNA
ATTRAVERSO LA <strong>TRASCRIZIONE</strong> NON VENGONO<br />
SINTETIZZATI SOLO GLI RNA CHE CODIFICANO<br />
PROTEINE (mRNA), MA ANCHE SVARIATI<br />
ALTRI TIPI DI RNA (tRNA<br />
tRNA; rRNA; E PICCOLI<br />
RNA NON CODIFICANTI QUALI: snRNA; snoRNA;<br />
scRNA; miRNA) CHE SVOLGONO FUNZIONI<br />
CHIAVE NELLA FISIOLOGIA DELLA CELLULA.
IN GENERALE IL PRODOTTO (RNA) DELLA<br />
<strong>TRASCRIZIONE</strong> PRENDE NOME DI TRASCRITTO.<br />
L’INSIEME DI MOLECOLE DI RNA<br />
(CLASSICAMENTE mRNA) ALL’INTERNO DI UN<br />
BEN PRECISO MOMENTO DELLA VITA DI UNA<br />
SPECIFICA CELLULA, COSTITUISCONO IL SUO<br />
TRASCRITTOMA.
L’APPARATO ENZIMATICO CHE OPERA VIENE<br />
DEFINITO RNA POLIMERASI.<br />
UNIONE DI RIBONUCLEOSIDI<br />
MONOFOSFATO PER FORMARE UNA CATENA<br />
POLIRIBONUCLEOTIDICA.<br />
I PRECURSORI DELLA SINTESI SONO I<br />
NUCLEOSIDI TRIFOSFATO.
L’ENERGIA CHE OCCORRE PER LA<br />
FORMAZIONE DEL LEGAME<br />
FOSFODIESTERICO È DATA<br />
DALL’ELIMINAZIONE DEL<br />
PIROFOSFATO PER IDROLISI DEL<br />
LEGAME.<br />
RNA n + rnPPP = RNA (n+1) + pp i
SI INDICA COME PROMOTORE<br />
IL SITO DEL DNA OVE SI<br />
LEGA L’RNA POLIMERASI<br />
PRIMA DI INIZIARE LA<br />
<strong>TRASCRIZIONE</strong>!
GENERALMENTE SOLO UNA DELLE DUE ELICHE DI DNA VIENE COPIATA<br />
COME RNA. IL FILAMENTO CHE FUNGE DA STAMPO E’ DETTO FILAMENTO<br />
SENSO, MENTRE L’ALTRO FILAMENTO (CHE AVRA’ SEQUENZA IDENTICA<br />
ALL’RNA DI NEOSINTESI, A MENO DELLA T IN LUOGO DELL’U), E’ DETTO<br />
ANTISENSO (O NON SENSO).<br />
UNO STESSO FILAMENTO PUO’ ESSERE<br />
SENSO IN ALCUNI TRATTI ED ANTISENSO IN ALTRI! LA DIREZIONE<br />
DI SINTESI DELL’RNA AVVIENE SEMPRE SECONDO L’ANDAMENTO 5’-3’!
TRASCRIONE NEI BATTERI<br />
NEI BATTERI LA RNA POLIMERASI<br />
E’ COSTITUITA DA UN CORE DI 4 SUBUNITA’<br />
(2 SUBUNITA’ α, , UNA β ED UNA β’) [APOENZIMA],<br />
CUI, ALL’INIZIO DELLA <strong>TRASCRIZIONE</strong>, SI LEGA<br />
UNA QUINTA SUBUNITA’ (σ), A FORMARE<br />
L’OLOENZIMA. SETs SPECIFICI DI PROMOTORI<br />
VENGONO RICONOSCIUTI DA SPECIFICHE<br />
SUBUNITA’ σ!
STRUTTURA DEL PROMOTER PROCARIOTICO<br />
PRIBNOW BOX
i) INIZIO: RNA-POL<br />
(OLOENZIMA) SI LEGA<br />
ALLA REGIONE PROMOTER<br />
FACENDO SI CHE LA DOPPIA<br />
ELICA SI SEPARI.<br />
AVVIENE LA FORMAZIONE<br />
DELLA PRIMA COPPIA DI<br />
BASI TRA IL DESOSSIRIB.<br />
+1 DEL FILAMENTO STAMPO<br />
ED IL PRIMO RIBONUCL.<br />
DELLA CATENA DI RNA<br />
NASCENTE. QUESTA FASE<br />
NON NECESSITA DI ATP (AL<br />
CONTRARIO DEGLI<br />
EUCARIOTI);<br />
ii)<br />
ALLUNGAMENTO: LA<br />
SUBUNITA’ σ SI STACCA<br />
DALL’OLOENZIMA E<br />
L’OLOENZIMA CONTINUA LA<br />
SUA ATTIVITA’ DI<br />
SINTESI<br />
IN DIREZIONE 5’-3’;<br />
iii)<br />
FINE: PUO’ ESSERE ρ-<br />
DIPENDENTE O ρ-<br />
INDIPENDENTE.
SPESSO GLI RNA (mRNA; tRNA ed rRNA) DEI PROCARIOTI<br />
SONO POLICISTRONICI, CIOE’ ALL’INTERNO DI UN UNICO<br />
TRASCRITTO SONO CONTENUTE INFORMAZIONI PER LA<br />
CODIFICA DI PIU’ PROTEINE (mRNA), PIU’ rRNA O PIU’ tRNA!<br />
L’INTERA STRUTTURA GENICA POLICISTRONICA E’ DETTA<br />
OPERONE!
TRASCRIONE NEGLI EUCARIOTI<br />
3 RNA-POLIMERASI, COSTITUITE DA UN CORE<br />
ENZIMATICO E DA FATTORI GENERALI DI<br />
<strong>TRASCRIZIONE</strong> O GTF. I GTFs DELLA POLII<br />
SONO ALMENO 7: TFIIA; TFIIB; TFIID; TFIIE;<br />
TFIIF; TFIIH; TFIIJ.<br />
NOME<br />
RNA POL I<br />
RNA POL II<br />
RNA POL III<br />
LOCAL. CELL.<br />
TIPO RNA<br />
Nucleolo 45S (28S; 18S;<br />
5.8S rRNA)<br />
Nucleoplasma<br />
Nucleoplasma<br />
mRNA; snRNA;<br />
snoRNA; miRNA<br />
tRNA; 5S rRNA;<br />
scRNA; alcuni snRNA<br />
SENSIBILITA’<br />
α-AMANITINA<br />
-<br />
+++<br />
+
GENE EUCARIOTICO<br />
Promotore<br />
geni codificanti<br />
proteine!
STRUTTURA DEL PROMOTER DEI GENI<br />
EUCARIOTICI CODIFICANTI PROTEINE<br />
NOTA: ESISTONO<br />
ANCHE PROMOTERS<br />
TATA LESS
TATA BOX BINDING PROTEIN<br />
TBP<br />
Saddle-like<br />
domain<br />
TATA BOX<br />
DNA<br />
BINDING
TAF5 stabilizes<br />
TAFs interaction,<br />
specially histone-<br />
like ones (TAF6,<br />
TAF9)<br />
TAF1: Acetyl<br />
transferase<br />
activ<strong>it</strong>y<br />
Interaction w<strong>it</strong>h<br />
TFIIF<br />
TAF3<br />
TAF12<br />
TAF8<br />
TAF4<br />
TAF4<br />
TAF10<br />
TBP<br />
TAF7<br />
TAF6TAF11TAF11<br />
TAF5<br />
TAF5<br />
TAF9TAF13<br />
TAF13<br />
TAF12<br />
TAF11<br />
TAF8<br />
TATA BOX<br />
TAF13<br />
TAF6<br />
TAF9<br />
TAF10<br />
TAF3
DNA BENDING
TFIID
HETEROTRIMER<br />
(A, B, C SUBUNITS)<br />
BINDS PROMOTER<br />
REGION WITH TFIID<br />
TFIIA<br />
DAB<br />
TFIID<br />
TFIIB<br />
TWO DOMAIN:<br />
N-TERMINAL<br />
Zn-RIBBON<br />
AND<br />
TFIIF<br />
CORE DOMAIN<br />
HETEROTETRAMER<br />
(RAP30) 2 (RAP74) 2<br />
(RAP30) 2 BINDS RNA POL II<br />
AND TFIIB. RAP74 INTERACTS<br />
WITH DNA. TFIIF<br />
STABILIZES THE<br />
INTERACTION OF<br />
RNA POLII WITH<br />
PROMOTER AND STIMULATES<br />
ELONGATION RATE<br />
TFIIE<br />
TFIIH<br />
TFIIB INTERACTS WITH<br />
SADDLE-LIKE LIKE DOMAIN OF<br />
TBP AND WITH BENDED DNA<br />
ON SIDES OF TATA BOX.<br />
TBP/TFIIB COMPLEX<br />
RECRUITS RNA POLII AND<br />
OTHER GTF<br />
P<br />
TFIIE MODULATES<br />
THE HELICASE AND<br />
KINASE<br />
ACTIVITIESOF TFIIH<br />
BY STIMULATING CTD<br />
DOMAIN RNA POLII<br />
PHOSPHORYLATION<br />
TFIIH<br />
STIMULATES<br />
PROMOTER<br />
PHOSPHORYLATION OF<br />
MELTING AND IT<br />
RNA POLII CTD<br />
HAS KINASE<br />
STIMULATES PROMOTER<br />
ACTIVITY<br />
AGAINST RNA<br />
MELTING AND<br />
POL II<br />
TRANSCRIPTION START
ENHANCER È IL TERMINE USATO PER DEFINIRE<br />
SPECIFICHE SEQUENZE DI DNA IN GRADO DI<br />
AUMENTARE L'EFFICACIA DEI PROMOTORI<br />
NELL'ATTIVAZIONE DELLA <strong>TRASCRIZIONE</strong>. GLI<br />
ENHANCER SVOLGONO IL LORO RUOLO ATTRAVERSO<br />
L'ASSOCIAZIONE CON DIVERSE PROTEINE, TRA CUI<br />
DIVERSI FATTORI COINVOLTI NELL'AVVIO DELLA<br />
<strong>TRASCRIZIONE</strong> STESSA.<br />
NEI GENI DEGLI EUCARIOTI GLI ENHANCERS<br />
POSSONO DISTARE DALLA REGIONE CODIFICANTE<br />
ANCHE PIÙ DI 50 KB.
IL SILENCER È UNA SEQUENZA DI DNA IN GRADO DI<br />
LEGARE DEI FATTORI DI <strong>TRASCRIZIONE</strong> DETTI<br />
REPRESSORI. QUANDO IL SILENCER È LEGATO DAL<br />
REPRESSORE, L’RNA POLIMERASI NON È IN GRADO DI<br />
INIZIARE LA <strong>TRASCRIZIONE</strong>.
TERMINAZIONE DELLA <strong>TRASCRIZIONE</strong><br />
NEI GENI EUCARIOTICI
<strong>MATURAZIONE</strong> DELL’mRNA<br />
i) CAPPING<br />
ii)<br />
METILAZIONE<br />
iii) POLIADENILAZIONE<br />
iv) SPLICING<br />
v) EDITING
i) 5’- CAPPING<br />
5’ capping<br />
7’methyl<br />
guanylate<br />
Legame 5’ – 5’<br />
Metilazione del<br />
2’<br />
C
PRINCIPALI FUNZIONI DEL 5’- CAPPING<br />
PROTEZIONE E STABILIZZAZIONE DEGLI<br />
mRNA, TRASPORTO DAL NUCLEO AL<br />
CITOSOL, INIZIO DELLA TRADUZIONE.
ii) POLIADENILAZIONE<br />
QUESTA SEQUENZA SI TROVA A CA. -10/ 10/-35 RISPETTO AL SITO<br />
DI POLIADENILAZIONE<br />
NOTA: ALCUNI hnRNA (Es.:<br />
QUELLI DEI GENI CODIFICANTI<br />
GLI ISTONI) NON HANNO UNA<br />
CODA DI POLI-A!<br />
DAPPRIMA I CLEAVAGE FACTORS<br />
TAGLIANO A 10/35 NT. A VALLE DELLA<br />
SEQUENZA AAUAAA, QUINDI I CPF (CLEAVAGE AND POLYADENILATION FACTORS)<br />
CONSENTONO ALLA POLI(A) POLIMERASI DI RICONOSCERE LA SEQ. AAUAAA E DI ADD. LE “A” !
PRINCIPALI FUNZIONI DELLA<br />
POLIADENILAZIONE<br />
LA CODA DI POLI A CONTRIBUISCE<br />
IN MODO MOLTO IMPORTANTE ALLA<br />
STABILITA’ DEGLI mRNA ED<br />
ALL’INCREMENTO DELLA EFFICIENZA<br />
TRADUZIONALE!
iii) SPLICING<br />
PROCESSO ATTRAVERSO CUI VENGONO ELIMINATI GLI INTRONI.<br />
IL COMPLESSO RIBONUCLEOPROTEICO (FATTO DA snRNA + PROTEINE,<br />
A FORMARE LE snRNPs) ADIBITO AL CONTROLLO DELLO SPLICING<br />
PRENDE NOME DI SPLICEOSOMA!
LA RIMOZIONE DI UN INTRONE AVVIENE<br />
ATTRAVERSO DUE REAZIONI<br />
SEQUENZIALI DI TRASFERIMENTO DI<br />
FOSFATO, NOTE COME<br />
TRANSESTERIFICAZIONI.<br />
QUESTE UNISCONO DUE ESONI<br />
RIMUOVENDO L’INTRONE COME UN<br />
“CAPPIO”
L’ELIMINAZIONE DEGLI<br />
INTRONI PREVEDE LA FORMAZIONE<br />
DI UNA STRUTTURA A CAPPIO<br />
DETTA “LARIAT”.
Lo splicing avviene ad opera dello spliceosoma,<br />
cost<strong>it</strong>u<strong>it</strong>o da snRNPs (small nuclear<br />
ribonucleoprotein particles) formati da snRNA<br />
e proteine.
SPLICING ALTERNATIVO<br />
PERMETTE LA FORMAZIONE DI TRASCRITTI MATURI DIVERSI<br />
A PARTIRE DA UNO STESSO hnRNA<br />
(4 exons)<br />
cell 1<br />
cell 2<br />
tissue specific
ALTRI MECCANISMI CHE PRODUCONO FORME<br />
ALTERNATIVE DI TRASCRITTI, PARTENDO<br />
DALL’INFORMAZIONE CONTENUTA IN UNO STESSO<br />
GENE SONO:<br />
i) RICONOSCIMENTO DI SITI DI INIZIO DELLA<br />
<strong>TRASCRIZIONE</strong> ALTERNATIVA (Es.: GENE PER IL GnRH<br />
- Gonadotropin Releasing Hormone- CHE PRESENTA DUE<br />
TRASCRITTI DIVERSI, UNO A LIVELLO IPOTALAMICO<br />
ED UNO A LIVELLO DI PLACENTA ED ALTRI TESSUTI. IL<br />
SECONDO SITO DI INIZIO SI TROVA A -579 E DIPENDE<br />
DA UN SECONDO PROMOTORE);<br />
ii) SEGNALI DI TERMINAZIONE DELLA <strong>TRASCRIZIONE</strong><br />
ALTERNATIVI
STRUTTURA DELL’ hnRNA<br />
5’<br />
Cap<br />
7mGppp<br />
5’ untranslated region<br />
in<strong>it</strong>iation<br />
AUG<br />
translated region<br />
UGA<br />
3’ untranslated region termination<br />
polyadenylation signal<br />
AAUAAA<br />
(A) ~200<br />
poly(A) tail<br />
• all mRNAs have a 5’ cap and all mRNAs (w<strong>it</strong>h the exception<br />
of the histone mRNAs) contain a poly(A) tail<br />
• the 5’ cap and 3’ poly(A) tail prevent mRNA degradation<br />
• loss of the cap and poly(A) tail results in mRNA degradation<br />
3’
<strong>MATURAZIONE</strong> DEGLI rRNA<br />
E tRNA<br />
I GENI PER GLI rRNA 18S, 5.8S E 28S IN H. sapiens SONO<br />
RAGGRUPPATI IN CLUSTER. TALI UNITA’ SONO RIPETUTE<br />
IN TANDEM CIRCA 250 VOLTE E DISTRIBUITE SU 10 ANSE<br />
CROMOSOMICHE LOCALIZZATE SUI BRACCI CORTI DEI CHR.<br />
ACROCENTRICI 13, 14, 15, 21 E 22.
I GENI PER I tRNA SONO ORGANIZZATI IN GRUPPI<br />
E, IN CIASCUN CLUSTER, CIASCUN GENE E’ SEPARATO<br />
DAI GENI VICINI DA SPAZIATORI INTERGENICI.<br />
IL PRE-tRNA<br />
DEVE PERDERE ALCUNE SEQ. AL 5’ E 3’ E,<br />
IN ALCUNE SPECIE DEVE AVVENIRE ANCHE UN SELF-<br />
SPLICING DI UN INTRONE.<br />
ALTRI EVENTI MATURATIVI RIGUARDANO ESSENZIALMENTE<br />
LA MODIFICA DI ALCUNE BASI E L’AGGIUNTA AL 3’ DELLA<br />
SEQUENZA 5’-CCA-3’<br />
AD OPERA DELLA tRNA NUCLEOTIDIL<br />
TRANSFERASI.