METINIS PRANEÅ IMAS 2007 - Biotechnologijos institutas

Metinis pranešimas – 2007Eil.Nr.Vardas, pavardėMokslinislaipsnisPareigos6. Jolanta Giedrienė jaun. mokslo darb.7. Eglutė Rudokienė bioinžinierius8. Virginija Martinkėnaitė laborantė 07.07.319. Kristina Jatkovskaja laborantėPastabosAloI, PpiI ir TstI restrikcijos endonukleazės (REazės) yra bifunkciniai, IIB REazių potipiuipriklausantys fermentai, galintys ir metilinti, ir hidrolizuoti atpažinimo sekas turinčias DNRmolekules. Šie fermentai atpažįsta pertrauktas DNR sekas ir kerpa DNR iš abiejų atpažinimosekos pusių. AloI, PpiI ir TstI REazių DNR taikinių atpažinime dalyvauja du C-galinėje fermentųdalyje esantys taikinio atpažinimo domenai (TAD), TAD1 ir TAD2, kurie yra atsakingiatitinkamai už REazių atpažinimo taikinio 5’ ir 3’ specifinių dalių atpažinimą. Neseniai TstIREazės TAD1 pakeitus pirmuoju PpiI taikinio atpažinimo domenu, buvo gautas aktyvushibridinis fermentas, kuris atpažino naujus DNR taikinius GAGN 5 GTG. Tokio specifiškumorestrikcijos endonukleazės gamtiniuose kamienuose dar nebuvo rasta (Jurenaite-Urbanaviciene irkiti, 2007).Laboratorijoje atliekamų darbų metu funkciškai aktyvias REazes mėginama sukonstruotiatliekant ir “kryžminę” AloI, PpiI ir TstI REazių TAD rekombinaciją, t. y. vieno baltymo TAD2pakeičiant kitos REazės TAD1 ir atvirkščiai, vieno polipeptido TAD1 pakeičiant kito baltymoantruoju TAD. Skirtingų baltymų segmentų sujungimo vietos pasirenkamos išanalizavusbioinformaciniais metodais sukurtus AloI, PpiI ir TstI REazių C-galinių dalių tretinės struktūrosmodelius. Vienas iš sukonstruotų hibridinių baltymų, kuriame AloI TAD1 buvo pakeistas TAD2iš TstI REazės, atpažino ir karpė numatytus DNR taikinius 5‘-CACN 5 GTTC. Tai unikalusfermentas, kadangi iki šiol REazių, atpažįstančių 5‘-CACN 5 GTTC sekas, dar nebuvo žinoma.Gauti rezultatai rodo, kad naujas, iš anksto suplanuotas DNR sekas atpažįstančias IIB potipioREazes galima kurti “kryžminės” TAD rekombinacijos būdu.© Biotechnologijos institutas 56