METINIS PRANEÅ IMAS 2007 - Biotechnologijos institutas

Metinis pranešimas – 2007Šio projekto tikslas yra sukurti naujus monokloninius ir rekombinantinius antikūnus,turinčius potencialų pritaikymą moksliniuose tyrimuose bei diagnostikoje. Imunizacijoms buvonaudojami rekombinantiniai virusų antigenai, ekspresuoti mielėse. Vėliau planuojama atrinkti kaikurias perspektyviausias hibridomas (pvz., produkuojančias virusus neutralizuojančius antikūnus)ir panaudoti jas scFv kūrimui.Vykdant projektą, buvo sukurtos hibridomos, gaminančios monokloninius antikūnusprieš žaliai fluorescuojantį baltymą (GFP). Monokloniniai antikūnai prieš GFP skirti molekulinėsbiologijos tyrimams.Naudojant rekombinantinį antigeną VP1/GFP-Cter (chimerinį baltymą be C-galinio VP1baltymo fragmento), buvo sukurta 17 naujų monokloninių antikūnų prieš GFP. AntigenasVP1/GFP-Cter, turintis pilno ilgio GFP intarpą, neformuoja į virusus panašių dalelių, tačiau yralabai imunogeniškas. Imunizacija chimeriniu baltymu VP1/GFP-Cter sukėlė stiprų imuninį atsakąprieš intarpą ir silpną atsaką prieš baltymą-nešiklį (VP1). Nustatyta, kad visi gautiejimonokloniniai antikūnai yra IgG klasės. Ištirtas jų specifiškumas, naudojant Cos7 ir 3T3 ląsteles,transfekuotas GFP koduojančia plazmide. Nustatyta, kad šie antikūnai imunoblotinge atpažįstaGFP transfekuotų ląstelių lizatuose.Imunizacijoms taip pat buvo naudotas chimerinis antigenas VP1/GFP, turintis turi pilnoilgio GFP intarpą. Imunizavus baltymu VP1/GFP, gauti 3 hibridomų klonai, produkuojantys IgGklasės antikūnus pieš GFP. Šie antikūnai taip pat reaguoja su GFP transfekuotų ląstelių lizatuose,tiriant imunoblotingu.Buvo sukurti monokloniniai antikūnai prieš Nipah viruso nukleokapsidės baltymą (NP).Imunizacijoms buvo naudotas chimerinis antigenas: pelės poliomos viruso baltymas VP1 suįterptu Nipah NP 35 a.r ilgio fragmentu. Gauta 1 hibridomų linija, produkuojanti antikūnus priešNipah NP. Nustatyta, kad jie yra IgG1 izotipo, specifiškai reaguoja su pilno ilgio Nipah NP irnereaguoja su giminingo Hendra viruso NP.Bendradarbiaujant su Friedrich-Loeffler institutu (Vokietija), buvo atliktas anksčiausukurtų monokloninių antikūnų prieš pasiutligės viruso nukleokapsidės baltymą specifiškumotyrimas. Šia tema paskelbta publikacija (Kučinskaitė ir kt., 2007).Pradėtas rekombinantinių antikūnų kūrimas. Iš anksčiau sukurtos hibridomos,produkuojančios neutralizuojančius antikūnus prieš TNF-alfa (hibridoma NF-2), išskirta mRNRir PGR būdu amplifikuoti kopijinės DNR fragmentai, atitinkantys Ig sunkiosios ir lengvosiosgrandinių variabiliąsias (Fv) sekas. Šie Fv fragmentai klonuoti į pUC57 plazmidę. Atlikus DNRsekvenavimą, atrinkti klonai su reikalingomis sekomis, kurios toliau bus naudojamos scFvekspresijai E.coli.Naujai sukurti monokloniniai antikūnai buvo tiekiami kompanijoms Abcam Ltd(D.Britanija) ir Santa Cruz Biotechnology (JAV.Per ataskaitinį laikotarpį paskelbtos 6 publikacijos tarptautiniuose žurnaluose.Projektas Nr 02/07: Naujai atrasti deguonies sensoriai, kaip priešvėžiniai vaistų taikiniai:Deguonies įtaka pre-iRNR splaisingui. Vadovas A. Kanopka.Vieni aktyviausių piktybinių navikų vystimosi sukėlėjų arba skatintojų yra ląstelės stresąsukeliantys veiksniai, tokie kaip deguonies trūkumas (hipoksija) bei įvairių toksinių medžiagųpoveikis. Sparčiai didėjant augliui, jo viduje paprastai susidaro hipoksinės sąlygos dėlnepakankamos auglio vaskuliarizacijos. Hipoksijos metu ląstelėse suaktyvėja hipoksijosindukuojamų faktorių (HIF) – HIF-1α, HIF-2α ir HIF-3α sintezė. Šie transkripcijos reguliatoriaisąlygoja eilės genų, padidinančių ląstelės bei viso organizmo atsparumą deguonies trūkumui,transkripciją. Didžioji dalis duomenų apie HIF įtaką bei jų funkcijas yra gauti tyrinėjant faktorių© Biotechnologijos institutas 62