Técnicas de análise de DNA e RNA

Retardação em gel (4)
O fundamento da técnica de retardação em gel está esquematizado em (A).
Neste exemplo, o extracto proteico de uma linha celular produtora de anticorpo é misturado com o
fragmento de DNA radioactivo contendo cerca de 160 nucleótidos da sequência de DNA reguladora
do gene que codifica a cadeia leve do anticorpo produzido pela linha celular.
O efeito das proteínas do extracto na mobilidade do fragmento de DNA é analisado por
electroforese em gel de poliacrilamida, seguida de auto-radiografia, comparando com a mobilidade do
fragmento de DNA sem adição do extracto.
Os fragmentos de DNA livres migram rapidamente para o fundo do gel, enquanto os
fragmentos ligados a proteínas são retardados; as seis bandas retardadas sugerem que o extracto
contém seis proteínas diferentes de ligação a sequências específicas de DNA (C1 a C6), que se ligam
a este fragmento. (Para simplificar, os fragmentos de DNA com mais de uma proteína ligada foram
omitidos da figura).
Em (B), o extracto foi fraccionado por uma técnica padrão de cromatografia (em cima), e cada
fracção foi misturada com o fragmento de DNA radioactivo, aplicada num poço do gel de
poliacrilamida e analisada como em (A).