Técnicas de análise de DNA e RNA

Purificação de proteínas de ligação a DNA por cromatografia de afinidade (2)
Na etapa 1, as proteínas de ligação a DNA são separadas das restantes proteínas celulares numa coluna
com diferentes sequências de DNA.
A fraca afinidade por DNA não específico resulta de atracções iónicas, sendo as proteínas removidas
por uma solução com uma concentração moderada de sal.
Na etapa 2, a coluna contém apenas uma sequência particular de DNA, e as proteínas retidas devido a
interacções não específicas são eluídas por soluções de concentração moderada de sal, deixando na
coluna as proteínas (em geral uma) fortemente ligadas à sequência de DNA. Estas proteínas são eluídas
da coluna por soluções contendo uma concentração muito elevada de sal.
Um método alternativo de purificação de uma proteína de ligação a DNA consiste na triagem de
uma biblioteca de cDNA com uma sonda de DNA que contém o local de ligação à proteína.