Técnicas de análise de DNA e RNA

Extracção, purificação, quantificação e detecção de ácidos nucleicos
Extracção e purificação de ácidos nucleicos – Utilização de Kits comerciais
Quantificação de ácidos nucleicos
Método espectrofotométrico (A concentração de DNA é medida pela absorção a 260 nm, sendo
uma absorvância de 1,0 equivalente a 50 µg/ml de DNA de cadeia dupla.)
Método baseado na fluorescência do brometo de etídio (Comparação com a fluorescência de
amostras de DNA de concentração conhecida.)
Detecção de ácidos nucleicos
Coloração com brometo de etídio
Coloração com nitrato de prata
Métodos de detecção não radioactivos na hibridação de ácidos nucleicos
Marcação das sondas in vitro com:
Corantes fluorescentes ou fluoróforos (fluoresceína e rodamina)
Biotina ou digoxigenina (através de ligandos de afinidade – avidina, estreptavidina ou
anticorpo anti-digoxigenina - acoplados a uma enzima de sinalização que converte os
substratos em produtos corados ou quimioluminescentes)
Enzimas (fosfatase alcalina – AP ou peroxidase de rábano silvestre – HRP)
Métodos de detecção radioactivos na hibridação de ácidos nucleicos
Marcação das sondas in vitro com 32 P
Marcação interna (Nick translation, Random primers, PCR)
Marcação terminal 5´ou 3’