Técnicas de análise de DNA e RNA

Electroforese em gel convencional (2)
A técnica de electroforese em gel permite a separação de fragmentos de DNA de
dimensões diferentes
A matriz de gel (ovais laranja) consiste em longas cadeias de polímeros, entrelaçadas. A
dimensão das cadeias interligadas, ou poros, depende da concentração de agarose ou de
acrilamida utilizada no gel.
Os poros nos géis de agarose são maiores do que nos géis de acrilamida. Os primeiros
são utilizados para separar fragmentos grandes de DNA (≈500 pb a ≈20 kb) e os últimos para
separar fragmentos pequenos de DNA (1 nucleótido a ≈2 kb).
Sob a acção da corrente eléctrica que passa através do gel os fragmentos são separados,
movendo-se para o pólo positivo a uma taxa inversamente proporcional ao logaritmo da
sua dimensão, formando bandas que são visualizadas por auto-radiografia (fragmentos
radioactivos) ou pela adição de um corante fluorescente, como por exemplo o brometo de
etídio.
Os géis de agarose são horizontais, mas os de acrilamida são verticais (preparados entre
duas placas de vidro com um afastamento de alguns milímetros apenas) porque o oxigénio do
ar inibe a polimerização da acrilamida.