Avaliação da Presença, Toxicidade e da Possível Biomagnificação ...

montagem da coluna de eluição, os extratos de HPAs foram dispostos na bureta com posterior
adição de 20 mL de hexano. Este material foi descartado para eliminação dos hidrocarbonetos
alifáticos e a coluna foi eluida, em seguida, com uma mistura de 10 mL de diclorometano e 10
mL de hexano. Este extrato final foi recolhido e evaporado através de rotavapor modelo R-
210 da marca Buchi. Por fim, as amostras foram concentradas para posterior análise
cromatográfica.
4.5. ANÁLISE DE HPAs
4.5.1. Condições Cromatográficas (KHILLARE et al., 2006)
As amostras foram analisadas em HPLC da marca Shimadzu modelo LC 20AT com
detector de UV (254 nm) com arranjo de diodos e coluna cromatográfica ODS Hipersil C18
250 mm x 4mm da Thermo Cientific. Foram utilizadas as seguintes condições
cromatográficas: fase móvel consistiu de um gradiente de acetonitrila e água degaseificada na
proporção de 50% de acetonitrila durante os 5 primeiros minutos; no período de 5 à 20
minutos foi utilizado um gradiente linear de crescimento até 100% de acetonitrila; no período
de 20 à 28 minutos foi mantido o gradiente de 100% de acetonitrila; por fim, foi utilizado um
gradiente linear de decréscimo até 50% de acetonitrila no período de 28 à 32 minutos; o fluxo
utilizado foi de 1,5 mL.min -1 .
4.5.2. Curva de Calibração
Para a montagem da curva de calibração foi utilizado a solução padrão mix dos 16
HPAs a serem analisados da marca sigma-aldrich com concentração de 2.000 mg.mL -1 em
diclorometano/metanol 50:50. Através desta solução padrão foi feita uma solução mãe com
concentração de HPAs de 20 ppm em diclorometano. A partir desta solução mãe, foi
produzida as concentrações menores, as quais foram utilizadas para injeção no HPLC. As
concentrações do padrão utilizadas foram as seguintes: 35, 50, 75, 100, 300, 500, 1000 e 5000
µg.L -1 . A identificação dos picos dos diferentes HPAs das soluções padrão foi realizada
através da análise do tempo de retenção e da sequência de picos, segundo estudo realizado nas
mesmas condições cromatográficas por KHILLARE et al. (2006). A sequência dos picos de
HPAs foi a seguinte: naftaleno (Naf), acenaftileno (Aci), acenafteno (Ace), fluoreno (Fl),
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