ÇUKUROVA ÜNİVERSİTESİ FEN BİLİMLERİ ENSTİTÜSÜ ...

2. ÖNCEKİ ÇALIŞMALAR Semiha ÜNLÜ YÜCEER
2.2. Agrobacterium Aracılığı ile Bacillus thuringiensis Cry Genlerinin Patates
Bitkisine (Solanum tubesum L.) Aktarılması, Moleküler ve Biyolojik
Analizler ile İlgili Yapılan Çalışmalar
Sheerman ve Bevan (1988), yaptıkları çalışmada ikili A. tumefaciens
vektörlerini kullanarak patateste hızlı bir transformasyon metodu geliştirilmesi
üzerine çalışmalar yapmışlardır. Araştırmada 5 farklı patates çeşidi kullanılmıştır.
Patates yumruları % 20’lik ticari çamaşır suyu ile 30 dakika bekletilerek sterilizasyon
işlemini tamamlandıktan sonra yumrular 1 cm çapında dilimlere ayırmışlardır.
Yumru diskleri, A. tumefaciens’in LBA4404pBin6 izolatı ile 1 mg/l thiamine, 0,5
mg/l nikotinik asit, 0,5 mg/l pridoksin, 3 mg/l IAA, ve 30 g/l sakkaroz içeren sıvı MS
besi ortamında 20 dakika inokule edilmiştir. Yumru diskleri inokulasyon sonrasında
yine aynı ortama 8 g/l agar ilave edilerek hazırlanmış katı ortam üzerinde kültüre
almışlar ve 48 saatlik inokulasyon sonrasında ise 100 mg/l Km, 500 mg/l Cb içeren
yine aynı besi ortamı üzerinde kültüre almışlardır. Eksplantlar 3 haftada bir yeni
besin ortamlarına aktarılmıştır. Daha sonra 4 haftada bir alt kültür yapılarak Cb
miktarı 500 mg/l’den 200 mg/l'ye kadar düşürülmüştür. Bu ortamda gelişen
transgenik sürgünler 3 mg/l IAA, 100 mg/l Km, 200 mg/l Cb içeren MS besin
ortamında köklendirmeye alınmıştır. Burada gelişmeye devam eden ve köklenen
bitkiler, transgenik olarak ifade edilmiştir. “Maris Piper” ve “Maris Pard”
çeşitlerinde transformasyon etkinliği, 0/100, “Desiree” çeşidinde 60/300, “Golden
Woner”de 28/90, “Pentlan”da ise 8/150 olarak bildirilmiştir. Transformasyon
oranının kullanılan genotipe göre büyük farklılıklar gösterdiği görülmüş ve
rejenerasyon kapasitesi yüksek olan çeşitlerin gen aktarımına daha iyi cevap verdiği
bildirilmiştir.
De Block (1988), in vitro şartlarında yetiştirdiği “Bintje”, “Berolina”,
“Desiree” ve “Russet Burbank” patates çeşitlerine ait yaprak eksplantlarını
yaralayarak, plazmidinde kimerik bar ve Npt II genlerini taşıyan A. tumefaciens ile
inoküle etmiştir. Her çeşite ait yaprak eksplantı kanamisin içeren besin ortamında
kallus oluşturmuş, oluşan her kallusta da sürgün rejenerasyonu meydana gelmiştir.
“Russet Burbank” çeşidi için etkili bir adventif sürgün rejenerasyonu sağlamak
15