ÇUKUROVA ÜNİVERSİTESİ FEN BİLİMLERİ ENSTİTÜSÜ ...

More documents

Recommendations

Info

2. ÖNCEKİ ÇALIŞMALAR Semiha ÜNLÜ YÜCEER Hamdi ve ark (2003), patatese A. tumefaciens aracılığı ile higromisine karşı dayanıklılık sağlayan (Hpt II) marker genini aktarmak ve bitki rejenerasyonu ile ilgili protokollerin elde edilmesi konusunda çalışmalar yapmışlardır. Nicotinia plumbaginifolia’nın Cat 2 geni ve Gossypium hirsutum’un SU2 genleri transformasyonda katalizör olarak kullanılmıştır. İki antibiyotik konsantrasyonu (5- 10 mg/l) ve seçici olmayan ortamlar üzerinde bitkiler kültüre alınmışlardır. Bakteri ile ortak kültür ortamları içerisine 10 mg/l asetosyringon kullanılması sonucunda transformasyon etkinliğinin ve bitki rejenerasyonunun arttığı saptanmıştır. Tahmini transgenik bitkiler köklendirilmiş ve yapılan PCR analizi sonuçlarına göre elde edilen bitkilerin % 45’inin transgenik olduğu tespit edilmiştir. Barrell ve ark. (2004), patateste (Solanum tuberosum L.) başarılı bir transformasyon için alternatif seçici sistemler konusunda çalışmalar yapmışlardır. Binary vektör olan PGPTV plazmidine farklı seçici markör genleri ekleyerek ve bazı modifikasyonlar yaparak pMOA1 ve pMOA5 plazmidleri transformasyonda kullanılmıştır. Seçici markör genler sağ ve sol DNA sınır bölgelerine yerleştirilmiştir. Bunlar; sırasıyla Npt II, Hpt, dhfr (methotrexate), bar (phosphirothricin) ve ble (phleomycin) genleridir. Patates bitkisi üzerinde yapılan transformasyon çalışması sonucunda etkili bir transformasyon için uygun prosedürler geliştirilmiştir. Yapılan testlemeler sonucunda elde edilen bitkilerin % 95 oranında transgenik olduğu belirlenmiştir. Turhan (2004), Desiree ve Maris Bard patates çeşitlerinde kallus oluşumunu teşvik ederek etkili bir transformasyon protokolü hazırlamıştır. Yapılan bu araştırmada, patates çeşitlerine oksalat oksidaz (oxalate oxidase) enzimini Agrobacterium aracılığı ile transformasyonu gerçekleştirilerek kallus oluşumu teşvik edilmiştir. Yapılan çalışma sonucunda genotip ve ortam içeriklerinin kallus oluşumu üzerine oldukça fazla etkisinin olduğu tespit edilmiştir. Transformasyon sonucunda oksalat oksidaz enzimini içeren bitkilerde kallus oluşumu ve gelişimi üzerinde etkili bir artışın olduğu tespit edilmiştir. Transformasyon yapılmış çeşitler ile yapılmamış çeşitler verim açısından karşılaştırılmış ve aralarında önemli farklılıklar bulunmamıştır. 25
2. ÖNCEKİ ÇALIŞMALAR Semiha ÜNLÜ YÜCEER Davidson ve ark. (2004), yapmış oldukları çalışmada A. tumefaciens’in LBA4404 ve AGL1 izolatları kullanarak sekiz farklı patates (Solanum tuberosum L.) çeşitlerine kanamisine (Npt II) ve böceklere karşı dayanıklılık (Cry 1Ac9) sağlayan genleri aktarmışlardır. Patatesin “Iwa” ve “Ilam Hardy” çeşitleri kullanılarak iki farklı bakteri izolatlarının transformasyon etkinlikleri karşılaştırılmış ve her iki izolatta da transformasyon sonrası rejenere olan sürgünlerin sayısında benzerlik olduğu belirlenmiştir. Fakat AGL1 izolatı ile yapılan transformasyon sonrasında bitkiler arasında çeşitlilik oranının daha yüksek olduğu belirlenmiştir. Daha sonra “Karaka”, “Pacific”, “Red Rascal”, “Rua”, “Russet Burbank” ve “White Delight” patates çeşitleri A. tumefaciens’in LBA4404 izolatı ile transformayon yapılmıştır. Tahmini transgenik bitkiler Npt II için PCR analizi ile kontrol edilmiş ve toplamda 116 hattan 105 tanesi PCR analizi sonucunda pozitif sonuç vermiştir. PCR yapılmış bu bitkilerden 93 tanesinde ise Cry1Ac9 geninin olduğu tespit edilmiştir. Elde edilen 77 transgenik bitkilerde sera koşullarında Cry 1Ac9 protein genin patates güvesi (Phthorimaea operculella)’nin gelişimi üzerine olan etkisi açısından biyolojik testlemelere tabi tutulmuş ve 60 ng/g taze yapraklar kullanılmıştır. Sonuç olarak transgenik bitkilerin patates güvesinin larva gelişimini azalttığı anlaşılmıştır. Serada yetiştirilen ebebeyn bitkiler elde edilen transgenik bitkilerle fenolojik açıdan karşılaştırılmış ve 55 tanesinin tamamen ebebeyn bitki ile benzer özellikte oldukları belirlenmiştir. Elde edilen bitkilere Southern analizi yaparak dayanıklılık hatları ortaya çıkarılmıştır. Cry1Ac9 geninin 2/5 oranında kopyalarının oluştuğu saptanmıştır. Birçok transgenik bitki hatları larva gelişimini azaltmış ve bunların ebebeyn bitki genotipine benzer olduğu belirlenmiştir. Eliseu ve ark. (2004), Brezilya patates çeşitlerinde genetik transformasyon protokolü oluşturmak için çalışmalar yapmışlardır. Herbisit dayanıklılık geni, Npt II ve GUS genini içeren pGV1040 plazmidini taşıyan Agrobacterium tumefaciens bakterisi transformasyonda kullanmışlardır. Bitki materyali olarak, 3 tane yerel çeşit olan “Aracy”, “Baronesa” ve “Montigueina” kullanmışlardır. Transformasyon ve transgenik bitkilerin elde edilmesi 2 aşamada gerçekleştirmişlerdir. Elde ettikleri transgenik bitkilerin doğal koşullara adaptasyonunu sağlandıktan sonra sera koşullarında geliştirmişlerdir. Gelişen bu bitkilerde ve kontrol bitkide sprey şeklinde 26
Page 1 and 2: Semiha ÜNLÜ YÜCEER ÇUKUROVA ÜN
Page 3 and 4: ÖZ DOKTORA TEZİ PATATES BÖCEĞİ
Page 5 and 6: TEŞEKKÜR Doktora tez çalışmamd
Page 7 and 8: 3.2.2. Patates Bitkisi Yumruların
Page 9 and 10: 4.8.4. Transgenik Bitkilerden Elde
Page 11 and 12: Çizelge 4.7. Transgenik “Marfona
Page 13 and 14: Şekil 4.4. Farklı Hormon Konsantr
Page 15 and 16: Şekil 4.17. Cry 1A(c) Genini İçe
Page 17 and 18: Şekil 4.31. “Marfona” (T1, T2,
Page 19 and 20: XVII
Page 21 and 22: XIX
Page 23 and 24: PLVVR : Patates Yaprak Kıvırcıkl
Page 25 and 26: 1. GİRİŞ Semiha ÜNLÜ YÜCEER Y
Page 27 and 28: 1. GİRİŞ Semiha ÜNLÜ YÜCEER t
Page 29 and 30: 2. ÖNCEKİ ÇALIŞMALAR Semiha ÜN
Page 47: 2. ÖNCEKİ ÇALIŞMALAR Semiha ÜN
Page 61 and 62: 3. MATERYAL VE METOD Semiha ÜNLÜ
Page 77 and 78: 4. BULGULAR VE TARTIŞMA Semiha ÜN
Page 99 and 100:
4. BULGULAR VE TARTIŞMA Semiha ÜN
Page 101 and 102:
Page 103 and 104:
Page 105 and 106:
Page 107 and 108:
Page 109 and 110:
Page 111 and 112:
Page 113 and 114:
Page 115 and 116:
Page 117 and 118:
Page 119 and 120:
Page 121 and 122:
Page 123 and 124:
Page 125 and 126:
Page 127 and 128:
Page 129 and 130:
5. SONUÇLAR VE ÖNERİLER Semiha
Page 131 and 132:
Page 133 and 134:
Page 135 and 136:
ARICAN, E., ARI, Ş., GÖZÜKIRMIZI
Page 137 and 138:
CİNGEL, A., VİNTERHALTER, B., Vİ
Page 139 and 140:
HAMDI, M., CEBALLOS, E., RİTTER, E
Page 141 and 142:
KUMAR, M., CHİMOTE, V., SİNGH, R.
Page 143 and 144:
ÖZKAYNAK, E., ve SAMANCI, B., 2005
Page 145 and 146:
UNLU YUCEER, S., and KOC, N.K., 200
Page 147 and 148:
124
Page 149 and 150:
EKLER Ek 1. Patatesin kültüre al
Page 151 and 152:
Ek 4. Bakteri süspansiyonunda kull
Page 153 and 154:
Ek 7. Patatesin yaprak doku parçal
Page 155 and 156:
) Nüclei lysis bafır (100 ml içi
Page 157:
Tekerrür 2. Gün Marfona (mg) Gran
show all

ÇUKUROVA ÜNİVERSİTESİ FEN BİLİMLERİ ENSTİTÜSÜ ...

Create successful ePaper yourself

Delete template?

Save as template?