ÇUKUROVA ÜNİVERSİTESİ FEN BİLİMLERİ ENSTİTÜSÜ ...

2. ÖNCEKİ ÇALIŞMALAR Semiha ÜNLÜ YÜCEER
herbisit kullanılarak testlemeler yapılmıştır. Yapılan testlemeler sonucunda kontrol
bitkide herbisitten dolayı ölümler gözlenirken, transgenik bitkilerde herhangi bir
herbisit zararına rastlanmamıştır. Southern blot analizi ile histokimyasal ve
florometrik analizler yapmışlardır. Araştırmada kullanılan 3 çeşit transgenik
bitkilerden “Aracy” ve “Baronesa” çeşidinde yapılan bu transformasyon prosedürü
ile başarı sağlanmadığı dolayısıyla transgenik bitki elde edememişlerdir.
“Montigueina” çeşidi patates bitkisinde ise elde edilen bitkilerin hepsinin transgenik
olduğu, yapılan analizler sonucunda belirlemişlerdir.
Yamaguchi ve ark. (2004), tatlı patatesin “Beniazuma” çeşidinde yaprak
parçaları, petiol ve gövde doku parçalarında transformasyon ve rejenerasyon
çalışmaları üzerine çalışmalar yapmışlardır. Agrobacterium tumefaciens’in EHA105
izolatı transformasyonda kullanılmıştır. pIG121Hm binary vektör olarak Npt II, Hpt
ve Gus A genlerini içermektedir. Üç dakikalık ortak-kültüvasyondan sonra üç
eksplanttan oluşan kalluslar seçilmiştir. Transgenik bitkilerin selektif ortamı olarak
Linsmaier ve Skoog (LS) ortamına ilave olarak 50 mg/l Km, 30 mg/l Hg
kullanılmıştır. Bakterinin hücre içinden eradikasyonu amacıylada 250 mg/l Cf
antibiyotiği kullanılmıştır. Ortam içerisinde 15,13 µM absisik asit (ABA) ve
2,89 µM GA3 ilave edilerek dokulardaki kahverengileşmeyi engellemişlerdir. Elde
edilen transgenik sürgünler açısından transformasyon etkinliği; gövde doku
parçasında % 30.8, yaprak disklerinde % 11.2, petiollerde ise % 10.7 olduğunu
belirlemişlerdir. Gus A ve Htp genleri açısından PCR analizi yapılmıştır. On sekiz
bağımsız transgenik bitkilerden elde edilen genomik DNA’lardan Gus A geni
açısından Southern hibridizasyonu yapılmış ve ¼ oranında T-DNA ya integre
olduğunu belirlemişlerdir.
Meiyalaghan ve ark. (2005), yaptıkları çalışmalarda patatesin “Iwa” çeşidine
A. tumefaciens’in CaMV35S izolatını kullanarak dört farklı Cry genlerini
aktarmışlardır. Aktarılan tüm genlerin patates güvesi (Phthorimaea operculella)
larvalarına karşı dayanıklılık gösterdiği tespit edilmiştir. Cry1Ac9 veya Cry9Aa2
genlerini taşıyan transgenik hatlarının dayanıklılık seviyelerinin benzer olduğu,
zararlının larva ve pupa gelişimini azalttığını belirlemişlerdir. Patatesin transgenik
hatları Cry 1Ba1 geni içeren bitkiler üzerinde larva gelişimi ve ölüm oranının yüksek
27